江 海,李 斌,李 炳,陳予民

（鄖陽醫(yī)學(xué)院：1.附屬人民醫(yī)院心胸外科；2.病理教研室,湖北十堰442000）

食管癌的浸潤轉(zhuǎn)移是臨床治療中最大的難題之一,也是導(dǎo)致患者死亡的關(guān)鍵因素。大量研究表明腫瘤轉(zhuǎn)移是癌基因與抑癌基因參與調(diào)節(jié)的復(fù)雜過程,主要與腫瘤細(xì)胞特性、宿主整體免疫狀態(tài)及轉(zhuǎn)移局部組織的特性有密切關(guān)系[1-3]。本研究采用免疫組化技術(shù)S-P法檢測E-鈣黏素蛋白的表達(dá),探討其與食管癌發(fā)生、分化、浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系,為預(yù)測食管癌浸潤轉(zhuǎn)移及臨床阻斷食管癌轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2005年1月至2007年7月在鄖陽醫(yī)學(xué)院附屬人民醫(yī)院經(jīng)手術(shù)切除的食管癌患者68例,其中男38例,女30例；年齡35～78歲,平均56.5歲。全部病例均由2名病理醫(yī)生確診為食管鱗癌。根據(jù)2000年WHO食管癌的分級標(biāo)準(zhǔn)將68例食管鱗癌分為高、中、低分化3級,其中高分化鱗癌25例,中分化鱗癌29例,低分化鱗癌14例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者38例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例；有纖維膜浸潤者56例,無纖維膜浸潤者12例。同時(shí)取距腫瘤5cm正常食管黏膜組織（常規(guī)HE切片證實(shí)為分化良好的鱗狀上皮及少量固有層成分）23例作為對照組。

1.2 檢測方法 將選取的食管鱗癌組織和正常食管黏膜組織行常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片,厚4μ m,分別作HE染色、免疫組化和陰性對照用。采用免疫組化技術(shù)S-P法對各組標(biāo)本進(jìn)行E-鈣黏素檢測,鼠抗人E-鈣黏素單克隆抗體及鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司,采用微波修復(fù)抗原,操作步驟按說明書進(jìn)行。用PBS代替一抗作陰性對照,已知陽性片作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 根據(jù)參考文獻(xiàn)[4]的方法,以細(xì)胞膜呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。對每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野,每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞,共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞,計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞并計(jì)算其所占比例,陽性細(xì)胞小于25%,判定為陰性表達(dá),陽性細(xì)胞大于25%,判定為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件,采用χ2檢驗(yàn)及配對χ2相關(guān)分析、t檢驗(yàn)、方差分析（F檢驗(yàn)）等,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

E-鈣黏素蛋白的陽性產(chǎn)物表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜,呈棕黃色顆粒。食管癌組織中的癌細(xì)胞和正常食管組織中的上皮細(xì)胞都有E-鈣黏素的表達(dá),E-鈣黏素蛋白在正常的食管鱗狀上皮組織中以基底層細(xì)胞和棘層細(xì)胞表達(dá)最強(qiáng),在癌組織中以高分化癌細(xì)胞表達(dá)最強(qiáng),中、低分化癌細(xì)胞表達(dá)較弱。E-鈣黏素蛋白在食管鱗癌和正常食管組織中陽性表達(dá)率分別為69.1%（47/68）、100%（30/30）,兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；E-鈣黏素蛋白在高、中、低分化癌組織的陽性表達(dá)率分別為84.0%（21/25）、72.4%（21/29）、51.1%（8/14）,E-鈣黏素蛋白在不同分化程度的食管鱗癌組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；E-鈣黏素蛋白在有、無淋巴轉(zhuǎn)移的癌組織中陽性表達(dá)率分別為57.9%（22/38）、80.0%（24/30）,兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；E-鈣黏素蛋白在有、無纖維膜浸潤的食管鱗癌組織中的陽性表達(dá)率分別為71.4%（40/56）、66.7%（8/12）,兩組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 E-鈣黏素在食管鱗狀細(xì)胞癌和正常食管黏膜組織中的表達(dá)〔n（%）〕

3 討論

腫瘤轉(zhuǎn)移作為一個(gè)相當(dāng)復(fù)雜的過程,不僅與多個(gè)癌基因與抑癌基因的改變有關(guān),還與腫瘤細(xì)胞的黏附性有關(guān),作為重要黏附分子的E-鈣黏素是鈣黏蛋白家族中的一個(gè)重要成員,其功能是介導(dǎo)特異性黏附,并在許多上皮組織形成和維持中起關(guān)鍵作用。E-鈣黏素黏附系統(tǒng)在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中有抗轉(zhuǎn)移功能,癌細(xì)胞通過多種機(jī)制損害E-鈣黏素的黏附作用,使癌細(xì)胞易于離散并脫離原發(fā)灶發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。E-鈣黏素表達(dá)下調(diào)普遍存在于低分化及進(jìn)展期腫瘤,所以E-鈣黏素被看作是腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制因素[5]。在肺癌、大腸癌、胃癌、宮頸癌中均有E-鈣黏素蛋白表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)的報(bào)道[6-7]。E-鈣黏素可能與食管鱗癌的轉(zhuǎn)移也密切相關(guān)。

E-鈣黏素是Ca2+依賴性跨膜糖蛋白,主要利用其胞外段中組-丙-擷（His-Ala-Ual）序列識別介導(dǎo)細(xì)胞間的黏附反應(yīng),細(xì)胞內(nèi)段通過α、β、γ連接蛋白與微絲、中間絲、肌動(dòng)蛋白相連接,形成復(fù)合體,使E-鈣黏素被錨定于細(xì)胞骨架上,與相鄰細(xì)胞形成穩(wěn)定連接[8-9]。E-鈣黏素定位于16號染色體q22.1,DNA全長100×103,主要存在于人和動(dòng)物的上皮細(xì)胞中,是維持細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)的完整性和極性的重要分子[10]。它是介導(dǎo)細(xì)胞間及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)黏附的主要分子,其通過胞漿連環(huán)素與細(xì)胞骨架蛋白相連,而細(xì)胞骨架能維持細(xì)胞形態(tài)、運(yùn)動(dòng)及偽足的形成,故當(dāng)腫瘤細(xì)胞E-鈣黏素發(fā)生基因突變,轉(zhuǎn)錄受抑,啟動(dòng)子區(qū)域GpG,其功能發(fā)生障礙,而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞侵襲性生長,分化程度降低,易脫離原發(fā)灶而發(fā)生局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[11]。近年來還發(fā)現(xiàn)E-鈣黏素分子具有腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移抑制功能和參于Wnt信號傳遞系統(tǒng)[12-13],通過β-連接蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞核的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄,以調(diào)節(jié)細(xì)胞功能活動(dòng),在細(xì)胞生物學(xué)和腫瘤生物學(xué)中起重要作用。

本研究顯示,E-鈣黏素在23例正常食管黏膜上皮組織中均有表達(dá),在68例食管鱗癌組織中有47例（69.1%）表達(dá)陽性（P＜0.05）,說明食管癌中存在明顯的E-鈣黏素表達(dá)缺失或表達(dá)水平的降低,從蛋白水平上證明了E-鈣黏素基因的失活與食管癌的發(fā)生有關(guān)；本研究還發(fā)現(xiàn)伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中E-鈣黏素蛋白的陽性表達(dá)率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05）,低分化癌組織中E-鈣黏素蛋白的陽性表達(dá)率明顯低于高分化癌組織（P＜0.05）,說明E-鈣黏素表達(dá)的減少與食管鱗癌分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。而在有、無纖維膜浸潤的癌組織之間E-鈣黏素蛋白的表達(dá)無明顯差異。

總之,E-鈣黏素在抑制食管癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及促進(jìn)食管癌的分化中具有調(diào)節(jié)作用,這可為食管癌患者的預(yù)后判斷提供有效的依據(jù)。

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