韓凌霞，劉霄磊，牛成明，周 剛，司昌德，曲連東

（1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，哈爾濱 15001；2.黑龍江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，哈爾濱 15001）

2008年，本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物近交系小鼠、大鼠生化標(biāo)記檢測(cè)方法》［1］GB/T 14927.1-2001，對(duì)黑龍江省5個(gè)生產(chǎn)單位的送檢大鼠進(jìn)行了生化標(biāo)記位點(diǎn)的檢測(cè)，品系包括SD、Wistar、DA和PVG大鼠，對(duì)其遺傳概貌進(jìn)行了描述。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2008年黑龍江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站承檢的5批送檢大鼠，送檢編號(hào)分別為2011、2014、3026、8028和8029，被檢品系分別為SD、Wistar以及新引進(jìn)的DA和PVG，各5只。

1.2 儀器設(shè)備與試劑

DYY-6C型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、電泳微量點(diǎn)樣器和醋酸纖維板購(gòu)于北京六一儀器廠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大鼠遺傳檢測(cè)試劑盒購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所（批號(hào)：0407），檢測(cè)所用生化試劑均為分析純。

1.3 樣品的制備

按照參考文獻(xiàn)［1］制備樣品。將大鼠逐一放在通風(fēng)櫥內(nèi)干燥器內(nèi)乙醚麻醉，至站立不穩(wěn)后取出。摘眼球采血，常規(guī)方法制備血清。另取腎臟、部分小腸、部分肺臟、2側(cè)睪丸，分別在研缽中加石英砂研磨，轉(zhuǎn)移在1.5mL的EP管中稱重，加2倍（v/m）蒸餾水混勻，4℃12 000r/min離心10min。保留上清液，立即檢測(cè)，或在4℃?zhèn)浯妗?/p>

1.4 各同工酶的檢測(cè)

參照國(guó)標(biāo)，分別對(duì)相應(yīng)組織中的Akp1、Es1、Es3、Es4、Es10和Es6、8、9等8種同工酶的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 堿性磷酸酶-1（Akp1）的檢測(cè)結(jié)果

利用腎臟組織對(duì)Akp1位點(diǎn)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果所有被檢樣品都出現(xiàn)明顯的2條帶，如箭頭所示為a帶型，帶型清楚。見(jiàn)圖1。各樣品用送檢單位的編號(hào)表示，余下圖例略同。

2.2 酯酶-1（Es1）的檢測(cè)結(jié)果

以血清為檢測(cè)組織，結(jié)果表明存在a、b兩種帶型。其中送檢單位2011全部個(gè)體、2014中3個(gè)體（泳道7、9、10）、3026全部個(gè)體為a帶型，其余個(gè)體為b帶型。如箭頭所示，見(jiàn)圖2。

2.3 酯酶-3（Es3）的檢測(cè)結(jié)果

利用小腸組織對(duì)Es3位點(diǎn)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示各品系個(gè)體都是a帶型，如箭頭所示，見(jiàn)圖3。其中SHR、BN、SD和F344為標(biāo)樣。

2.4 酯酶-4（Es4）的檢測(cè)結(jié)果

利用腎臟組織對(duì)Es4位點(diǎn)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果所有被檢組織都出現(xiàn)明顯的3條帶，為b帶型，圖略。

1～5：來(lái)自2011；6～10：來(lái)自2014；11～15：來(lái)自3026；16～20：來(lái)自8028；21～25：來(lái)自8029圖1 Akp1的檢測(cè)結(jié)果1-5：from 2011；6-10：from 2014；11-15：from 3026；16-20：from 8028；21-25：from 8029Fig.1 The results ofAkp1 detection in the rats

1～5：2011；6～10：2014；11～15：3026；16～20：8028；21～25：8029圖2 Es1的檢測(cè)結(jié)果1-5：2011；6-10：2014；11-15：3026；16-21：8028；22-26：8029Fig.2 The results of Es1 detection in the rats

1～5：2011；6～7、11～13：2014；8：SHR；9：BN；10：SD；14～18：3026；19：F344；20～25：8028；26～29：8029圖3 Es3的檢測(cè)結(jié)果1-5：2011；6-7 and 11-13：2014；8：SHR；9：BN；10：SD；14-18：3026；19：F344；20-25：8028；26-29：8029Fig.3 The results of Es3 detection in the rats

1～5：來(lái)自2011；6：WKY；7：SHR；8～12：來(lái)自2014；13～17：來(lái)自3026圖4 Es10的檢測(cè)結(jié)果1-5：2011；6：WKY；7：SHR；8-12：2014；13-17：3026Fig.4 The results of Es10 detection in the rats

表1 各被檢單位在8個(gè)生化標(biāo)記位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果Tab.1 The results of detection of 8 biochemicalmarkers in rats from different resources

2.5 酯酶-10（Es10）的檢測(cè)結(jié)果

肺臟樣品在Es10位點(diǎn)出現(xiàn)3條帶，均為b帶型，如箭頭所示。8028和8029未檢測(cè)。見(jiàn)圖4。

2.6 酯酶-6，8，9（Es6，8，9）的檢測(cè)結(jié)果

由于Es6，8，9的被檢組織來(lái)自睪丸，所以只對(duì)雄性個(gè)體進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明，2011帶型為Es6-a、Es8-b、Es9-a；8028大鼠帶型為Es6-a、Es8-b、Es-9a；8029大鼠帶型為 Es6-b、Es8-a、Es-9c（圖略）。

3 討論

目前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，除生化標(biāo)記同工酶之外，還有下頜骨形狀分析法和皮膚移植法，但皮膚移植法，一般需觀察100d左右［2］。對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠、大鼠的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)在國(guó)內(nèi)外主要采用皮膚移植法和生化標(biāo)記基因法［3-5］。所以我們選用生化標(biāo)記基因法進(jìn)行對(duì)送檢大鼠的遺傳概貌進(jìn)行了分析。

本研究參照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生化標(biāo)記檢測(cè)方法的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)［1］，分別對(duì)5批送檢大鼠的相應(yīng)組織中Akp1、Es1、Es3、Es4、Es10和Es6，8，9等8種同工酶的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，來(lái)自送檢單位2011和3026的大鼠在Es3位點(diǎn)中雖都出現(xiàn)3條帶，屬于a帶型，但個(gè)體之間仍存在表達(dá)量、遷移率等差異；來(lái)自2014的大鼠在Es1和Es3位點(diǎn)中個(gè)體之間存在帶型差異，體現(xiàn)了封閉群的雜合特點(diǎn)。帶型匯總見(jiàn)表1。

8028和8029分別是新引進(jìn)的DA大鼠與PVG大鼠，國(guó)標(biāo)中沒(méi)有相應(yīng)位點(diǎn)的描述，且送檢個(gè)體較少，本研究的檢測(cè)結(jié)果與已發(fā)表的研究結(jié)果一致［6］。

［1］GB/T 14927.1-2008實(shí)驗(yàn)動(dòng)物近交系小鼠、大鼠生化標(biāo)記檢測(cè)方法［S］.

［2］GB/T 14927.2-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物近交系小鼠、大鼠皮膚移植法［S］.

［3］孫賀娟，王冬平，王鉅，等.長(zhǎng)爪沙鼠生化基因?yàn)辄c(diǎn)檢測(cè)方法的建立［J］.上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2004，24（4）：211-213.

［4］李華，王太一，史曉平.生化標(biāo)記基因法對(duì)近交系小鼠擴(kuò)大生產(chǎn)群的遺傳檢測(cè)［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志，1996，6（1）：43-46.

［5］史順娣，王丹，趙宏旭，等.采用電泳法對(duì)近交系大鼠進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，1988，10（5）：311-316.

［6］林彥，唐小玲，王洪，等.近交系DA大鼠遺傳學(xué)質(zhì)量［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2009，5（19）：59-61.