顧玉芳,陳方勇,彭本英

(長江大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院,湖北 荊州434025)

隨著人類對疾病重視程度的提高以及人們對健康觀念的理解不斷發(fā)生轉(zhuǎn)變,從單純的醫(yī)病治病到個體乃至保障人群健康都與我們息息相關(guān)的生態(tài)平衡、環(huán)境污染、人畜共患病、動物性食品的安全性等密切相關(guān)[1]。環(huán)境中的污染物尤其是一些病原微生物污染空氣、水源、土壤,破壞生態(tài)平衡,通過呼吸、飲水直接危害人類健康。高仕瑛等查出某社區(qū)的肉類、生活飲用水、蔬菜等含有不同程度的食用性致病菌[2],方治國等對北京城市空氣細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)及細(xì)菌動態(tài)變化進行了探討[3],傅小紅等檢出醫(yī)院外環(huán)境中的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生明顯的耐藥 性[4]。因此對自然環(huán)境中微生物的監(jiān)測,保護自然環(huán)境及生活環(huán)境,提高人們預(yù)防和控制疾病的能力尤為重要。本文通過對學(xué)校周邊不同功能區(qū)環(huán)境中細(xì)菌種類及相關(guān)病原菌的致病性進行了分析研究,為學(xué)校周邊環(huán)境公共衛(wèi)生狀況及疾病預(yù)防,提供相應(yīng)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 環(huán)境中微生物的檢測 選擇學(xué)校周邊4個不同功能區(qū):超市、宿舍、醫(yī)院門診部、曠野用滅菌牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基露置60 min,然后37℃恒溫培養(yǎng)24 h。觀察菌落生長狀況。

1.1.1 常規(guī)儀器設(shè)備、試劑 均由長江大學(xué)動物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)實驗室提供。

1.1.2 細(xì)菌種類及總數(shù)統(tǒng)計 挑選不同色彩、形態(tài)的菌落涂片,進行革蘭染色、鏡檢,做好標(biāo)記,同時進行細(xì)菌總數(shù)統(tǒng)計分析。

細(xì)菌數(shù)計算:采用培養(yǎng)平板暴露法[5]

每m3細(xì)菌(真菌)數(shù)=1000÷[(A/10)×t×(3/5)]×N=[167000N/(At)]

A—平板面積(固定數(shù)100 cm2);t—平板曝露空氣時間5 min;N—培養(yǎng)后平板上菌落數(shù)。

評價標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)我國2003年3月1日起正式實行的GB/T18883-2002《室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》為內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)≤2500 CFU/m3為合格。

1.1.3 細(xì)菌的分離、純化及鑒定 選取上述鏡檢是葡萄球菌和枯草芽孢桿菌的菌落反復(fù)3次用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行純化培養(yǎng),革蘭染色、鏡檢。再取單一菌落在血瓊脂培養(yǎng)基37℃培養(yǎng),24 h后觀察菌落溶血狀態(tài),然后再將得到較純的葡萄球菌菌落放入液體培養(yǎng)基培養(yǎng),24 h后取其培養(yǎng)物0.5 mL接種到已制備好的1∶2～1∶4的兔血漿中,37℃過2～4 h后觀察血漿凝固情況,其余備用。

1.2 葡萄球菌的致病性試驗 小鼠30只,購自荊州某實驗動物養(yǎng)殖場。

將上述3種備用液體培養(yǎng)物,分別離心收集細(xì)菌,各用5 mL生理鹽水重懸制備菌液,取24只小鼠分為4組,每組6只。試驗1組為對照組皮下注射0.5 mL生理鹽水;2、3、4組分別皮下注射0.5 mL三種不同的菌液,隔離飼喂,隨時觀察小鼠的臨床癥狀,對死亡小鼠進行剖檢,并在第3天全部剖殺,觀察病變。

2 結(jié)果

2.1 菌落的種類及數(shù)量統(tǒng)計 在4個不同功能區(qū)所采集的菌落數(shù)不一。超市和門診部以球形菌落較多,形態(tài)大多圓形、凸起、表面光滑、濕潤、邊緣整齊,色彩有金黃色、橙色、白色,曠野里除了少量的球形菌落外,還有乳白色、邊緣整齊、表面有皺褶、較大的菌落。居室里主要是較大白色、絮狀、邊緣不整齊、直徑較大的菌落及零星的球形菌落。鏡檢可見超市和門診的菌落主要是長鏈狀的葡萄球菌,還有一些少量其他未做鑒定的細(xì)菌;曠野里有少量葡萄球菌,大部分是枯草芽孢桿菌。寢室里主要是真菌和少量球菌。細(xì)菌總數(shù)分別是:門診部2 688 CFU/m3,超市3 500 CFU/m3,田野 1 848 CFU/m3,宿舍 700 CFU/m3。

2.2 細(xì)菌分離、純化 經(jīng)過3次牛肉膏蛋白胨純化培養(yǎng)得到的細(xì)菌菌落。鏡檢觀察2號、4號、7號細(xì)菌均為革蘭陽性的葡萄球菌;6號為枯草芽孢桿菌呈長桿狀排列。血瓊脂培養(yǎng)2、4、7號出現(xiàn)不同程度的溶血現(xiàn)象,且血漿凝固酶試驗是陽性;而6號均為陰性。2.3 致病性試驗

2.3.1 臨床觀察 攻毒后各試驗組小鼠未表現(xiàn)出明顯的異常變化,個別小鼠精神沉郁,食欲降低。

2.3.2 病理學(xué)觀察 攻毒后第3天剖殺的小鼠,其眼觀變化表現(xiàn)為試驗2組2號小鼠脾臟輕度腫大,肺心葉膈葉局部色彩暗紅,腎臟輕度腫大,肝臟邊緣有針帽大小的膿性病灶。鏡檢肺組織局部毛細(xì)血管淤血,間質(zhì)里有少量淋巴細(xì)胞浸潤,肝細(xì)胞輕度變性,脾臟淤血,其他病變不明顯。試驗3組3號小鼠肝臟邊緣有米粒大小白色粘稠病灶,肺膈葉上緣有暗紅色實變區(qū),鏡檢與3號病變類似。7號小鼠肝色彩變黃,邊緣有黃豆大的白色膿性病灶,脾腫大,腎腫大、色淡,腦水腫,鏡檢肝細(xì)胞普遍變性,局部有散在壞死灶,腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)不同程度顆粒變性和脂肪變性,心肌細(xì)胞變性,脾臟淤血,小梁疏松、水腫。試驗4組6號小鼠肝腫大,邊緣有綠豆大的白色膿性病灶,鏡檢觀察內(nèi)臟器官病變與試驗2組類似。

3 討論

3.1 從所檢測結(jié)果中可以看出,學(xué)校周邊幾個不同功能區(qū)葡萄球菌的檢出率為100%,還有少量的枯草芽孢桿菌、真菌。細(xì)菌總數(shù)分別是門診部2 688 CFU/m3,超市 3 500 CFU/m3,田野 1 848 CFU/m3,宿舍700 CFU/m3,醫(yī)院門診、超市里的空氣質(zhì)量較差。根據(jù)我國2003年3月1日起正式實行的GB/T18883-2002《室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》為內(nèi)空氣中細(xì)菌總數(shù)≤2 500 CFU/m3為合格的規(guī)定是不符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的。主要是由于醫(yī)院里病人來往較頻繁,消毒措施沒有及時跟上,超市里貨物較多,品種復(fù)雜,貨物擺放不嚴(yán)格,不規(guī)范,再加上通風(fēng)不良,濕度較大,衛(wèi)生打掃不徹底,造成細(xì)菌的大量繁殖。學(xué)生宿舍真菌數(shù)量較多,也應(yīng)引起注意。提示我們平時要加強環(huán)境監(jiān)測,提高人們的認(rèn)識,積極采取措施,降低不良因素的影響,控制疾病的發(fā)生。

3.2 小鼠致病性試驗結(jié)果顯示,3種類型的葡萄球菌都對機體內(nèi)臟器官產(chǎn)生不同程度的器質(zhì)性變化,肝臟表現(xiàn)典型的化膿性病灶,特別是試驗3組更為明顯,盡管多數(shù)葡萄球菌為非致病菌[6],但如果超出一定量它可導(dǎo)致疾病發(fā)生,尤其是醫(yī)院交叉感染的重要來源。應(yīng)該引起高度重視。

[1]張彥明.獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2003:1-123.

[2]高仕瑛,楊赟,鄧仲良,等.社區(qū)外環(huán)境中細(xì)菌種群分布及耐藥性檢測[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007,17(10):1830-1832.

[3]方治國,歐陽云志,趙景柱,等.北京城市空氣細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)與動態(tài)變化特征[J].微生物學(xué)報,2006,46(4):618-623.

[4]傅小紅,徐景野,于梅,等.醫(yī)院外環(huán)境中檢出的金黃色葡萄球菌的耐藥性[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2005,32(5):523-524.

[5]鐘嶷,郭重山,李小暉,等.自然沉降法和撞擊法在空氣細(xì)菌總數(shù)測定中的應(yīng)用和比較[J].環(huán)境與健康雜志,2004,21(3):149-152.

[6]郁慶福.衛(wèi)生微生物學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995.