唐 晉,宋孟龍,程 飛,張獻(xiàn)全

(重慶醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科 400010)

大承氣湯治療重癥急性胰腺炎大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

唐 晉,宋孟龍,程 飛,張獻(xiàn)全△

(重慶醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科 400010)

目的探討大承氣湯治療重癥急性胰腺炎(SAP)的作用機(jī)制。方法健康Wistar大鼠50只隨機(jī)分成5組,分別為:假手術(shù)組(A組),SAP模型組(B組),SAP+烏司他丁治療組(C組),SAP+大承氣湯治療組(D組),SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組(E組)。采用胰膽管逆行注射5%?；悄懰徕c法建立SAP大鼠模型,于制模后24 h收集樣本,檢測大鼠肺組織、回腸和血漿中促炎因子白細(xì)胞介素-6(IL-6)、內(nèi)毒素(ET)和抑炎因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)的含量變化。結(jié)果SAP+烏司他丁治療組、SAP+大承氣湯治療組、SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組與SAP模型組比較血漿及組織ET、IL-6含量明顯降低(P＜0.05),IL-10含量明顯升高(P＜0.05);SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組與SAP+烏司他丁治療組、SAP+大承氣湯治療組比較血漿及組織ET、IL-6含量明顯降低(P＜0.05),IL-10含量明顯升高(P＜0.05)。結(jié)論大承氣湯可能通過減少致炎因子 ET、IL-6和增加抑炎因子IL-10來影響SAP的炎癥反應(yīng),大承氣湯和烏司他丁對大鼠SAP具有相加或協(xié)同的抗炎作用。

重癥急性胰腺炎;大承氣湯;炎癥因子

△通訊作者。

重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是臨床常見的急危重癥之一,是指急性胰腺炎伴有其他器官功能障礙或胰腺出現(xiàn)壞死、膿腫或假性囊腫等局部并發(fā)癥者,Ranson評分大于3分,APACHEⅡ評分大于8分,Balthazar CT分級在Ⅱ級或以上者。SAP具有起病急、變化快、并發(fā)癥多等特點(diǎn),常伴發(fā)休克、呼吸功能不全、腎功能不全、感染等并發(fā)癥,死亡率高達(dá)20%～30%。SAP發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,近年研究顯示,炎癥因子參與SAP的發(fā)病,臨床應(yīng)用大承氣湯治療SAP可以降低死亡率,但其機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)研究大承氣湯治療SAP大鼠炎癥因子的變化情況,探討大承氣湯治療SAP的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動物及分組 健康Wistar大鼠50只(購自重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心,清潔級)體質(zhì)量 220～250 g,隨機(jī)分成5組,每組10只。分為A組:假手術(shù)對照組;B組:SAP模型組;C組:SAP+烏司他丁治療組;D組:SAP+大承氣湯治療組;E組:SAP+大承氣湯+烏司他丁治療組。

1.2 藥物 烏司他丁(ulinastatin,UTI,天普生物化學(xué)制藥有限公司);大承氣湯(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院中藥房提供),配方為大黃20 g,枳實(shí)10 g,厚樸10 g,芒硝15 g,熬制成W/V為1∶1的藥液。

1.3 主要儀器和試劑 SP-100型微量注射泵(日本JMS公司);TGL-16G恒溫高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);LP-4000型酶標(biāo)儀(法國Basture公司);BX50生物光學(xué)顯微鏡(日本Olympus公司);超低溫冰箱(日本 SANYO公司);?；悄懰徕c(美國Sigma公司);大鼠IL-6 ELISA測試藥盒(中國晶美生物工程公司);大鼠IL-10 ELISA測試藥盒(中國晶美生物工程公司);內(nèi)毒素(ET)檢測采用上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所生產(chǎn)的鱟試劑盒(Ⅱ)。

1.4 動物模型的制備 參照 Frossard和Pastor[1]的方法,采用胰管內(nèi)逆行注入5%硫磺膽酸鈉0.1 mL/100 g建立大鼠SAP模型。

1.5 實(shí)驗(yàn)動物處理 假手術(shù)組(A組):大鼠開腹后翻動胰腺數(shù)次后關(guān)腹;烏司他丁治療組(C組):制模后30 min以4萬u/kg靜脈注入烏司他丁;大承氣湯治療組(E組):制模后12 h灌入熬制好的大承氣湯1 mL/100 g;烏司他丁+大承氣湯治療組(F組):用兩種藥物治療 SAP大鼠,方法同上。術(shù)后24 h取靜脈血標(biāo)本分離血漿置冰箱備用,取大鼠胰腺、左肺、回腸末端組織行病理檢查,右肺組織、部分回腸組織液氮速凍后提取組織勻漿,置-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 大鼠肺、回腸組織勻漿的獲取 參照Tulzo等[2]的方法制作組織勻漿,肺、回腸組織勻漿分別以1∶8和1∶10的比例加入PBS緩沖液(0.1 mmol/L,pH=7.4)并用勻漿器攪勻,于低溫高速離心機(jī)(4℃,8 000 r/min,30 min)分離出上清液分裝置于小離心管于-70℃冰箱保存用于檢測蛋白。

1.7 觀察指標(biāo)及方法

1.7.1 胰腺、左肺、回腸組織病理學(xué)檢查 10%中性甲醛固定,石蠟包埋切片,HE染色后,光鏡下觀察各組動物病理變化。

1.7.2 內(nèi)毒素、IL-6、IL-10測定 內(nèi)毒素采用鱟試劑偶氮基質(zhì)顯色法定量檢測,IL-6、IL-10采用酶聯(lián)免疫測定(ELISA)試劑盒測定。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用±s來表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SAS8.0軟件行單因素方差分析,組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 病理學(xué)變化 模型組胰腺腺泡細(xì)胞腫脹,可見灶性壞死,腺泡細(xì)胞間有大量炎癥細(xì)胞浸潤;小葉排列紊亂,其間有大量炎性滲出;壞死區(qū)內(nèi)腺泡結(jié)構(gòu)消失,胞核溶解;葉間隙增寬,間質(zhì)微血管破裂,大量紅細(xì)胞溢出;肺臟及回腸組織均有程度不同的充血、水腫及間質(zhì)白細(xì)胞浸潤,并可見白細(xì)胞貼附于血管內(nèi)膜。各治療組均有不同程度的改善,炎癥細(xì)胞浸潤減少。

2.2 ET檢測結(jié)果 B組ET表達(dá)水平明顯高于A組,E組與B、C組比較,ET表達(dá)水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表 1。

表1 各組大鼠血漿、肺和回腸內(nèi)毒素的濃度比較(Eu/mL,x ±s)

2.3 IL-6檢測結(jié)果 B組IL-6表達(dá)水平明顯高于假手術(shù)組(A組),E組與 B、C組比較,IL-6表達(dá)水平明顯降低,P＜0.05。見表2。

表 2 各組大鼠血漿、肺和回腸IL-6比較(pg/mL,x ±s)

2.4 IL-10檢測結(jié)果 模型組IL-10表達(dá)水平明顯高于A組,E組與B、C組比較,IL-10表達(dá)水平明顯升高,P＜0.05。見表3。

表3 各組大鼠血漿、肺和回腸組織IL-10的濃度比較(pg/mL,±s)

表3 各組大鼠血漿、肺和回腸組織IL-10的濃度比較(pg/mL,±s)

★:與B組比較,P＜0.05;☆:與 C、D 組比較,P＜0.05。

組別 血漿 肺組織 回腸組織A 組 0.68±0.15 10.21±0.22 14.04±2.95 B組 11.50±1.28 46.89±4.08 27.40±4.17 C組 16.30±2.04★ 56.96±4.47★ 36.34±2.30★D 組 20.70±2.99★ 60.30±5.00★ 39.85±2.30★E組 32.12±4.30★☆ 73.81±8.42★☆ 45.16±1.81★☆

3 討 論

大承氣湯治療SAP的療效已在臨床得到證實(shí)并廣泛應(yīng)用,但其確切機(jī)制至今尚不明確。大承氣湯為臨床經(jīng)驗(yàn)方制劑,主要由柴胡、大黃、芒硝、枳實(shí)等組成,具有通里攻下、清熱解毒、活血化淤之功效。柴胡、枳實(shí)可促使胃排空,枳實(shí)、厚樸增加小腸蠕動,芒硝有清熱瀉下之功效,可以降低腸管壓力,協(xié)助大黃通腑泄?jié)?。生大黃促使結(jié)腸蠕動,改善胃腸黏膜微循環(huán),降低血清和小腸組織腫瘤壞死因子、磷脂酶A2和血小板激活因子(PAF)的含量,從而減輕上述介質(zhì)引發(fā)的其他炎癥介質(zhì)的釋放和炎癥反應(yīng)[3]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),SAP大鼠分別經(jīng)大承氣湯治療、烏司他丁治療和大承氣湯+烏司他丁治療24 h后,大鼠血清、肺組織和回腸末端組織的內(nèi)毒素水平明顯降低,與陳海龍等[4]和王春妍等[5]研究相似,表明大承氣湯具有減少內(nèi)毒素的生成和吸收、加快滅活和排泄等作用,并因此減輕內(nèi)毒素引起的全身炎性反應(yīng)綜合征和急性肺損傷以及內(nèi)毒素引起的腸黏膜屏障的損害。本研究還發(fā)現(xiàn),SAP大鼠應(yīng)用大承氣湯治療后血漿、肺和回腸組織的IL-6水平明顯下降,與烏司他丁治療結(jié)果相似,但大承氣湯結(jié)合烏司他丁治療IL-6水平較單獨(dú)應(yīng)用烏司他丁或大承氣湯明顯下降,提示二者對治療SAP大鼠有相加或者協(xié)同作用。IL-6是炎癥反應(yīng)中一個(gè)非常重要的因子,可以作為促炎因子引起炎癥反應(yīng)的一系列連鎖反應(yīng)和放大效應(yīng),導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)和多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的發(fā)生。最近的研究顯示,IL-6在SAP的發(fā)病中起重要作用,其升高的幅度與SAP的嚴(yán)重程度密切相關(guān),發(fā)病后24 h內(nèi)檢測血漿IL-6含量預(yù)測SAP是目前早期評價(jià)SAP嚴(yán)重程度的較好指標(biāo)[6]。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),經(jīng)大承氣湯、烏司他丁和大承氣湯+烏司他丁分別治療后,大鼠血漿、肺和回腸組織中的抑炎因子IL-10的水平明顯升高,與呂冠華等[7]研究結(jié)果相一致,表明大承氣湯具有雙重調(diào)節(jié)作用,即具有降低致炎因子IL-6和內(nèi)毒素和提高抑炎因子IL-10的雙向作用,提示大承氣湯可能是通過參與炎癥反應(yīng)的調(diào)控而發(fā)揮治療SAP的作用的。何俊等[8]研究也發(fā)現(xiàn),應(yīng)用生長抑素聯(lián)合柴芍承氣湯鼻飼和生大黃灌腸治療SAP,可更快改善患者腹痛、腹脹癥狀,恢復(fù)心率、呼吸,降低死亡率。由于大承氣湯的成分不是很單一,加上SAP的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,調(diào)控炎癥反應(yīng)可能只是大承氣湯治療SAP一條比較重要的途徑。

[1] Frossard JL,Pastor CM.Experimental acute pancreatitis:new insights into the pathophysiology[J].Front Biosci,2002,7(1):257.

[2] Tulzo YL,Shenkar R,Kancko D,et a1.Hemorrhage increase cytokine expression in lung mononuclear cells in mice[J].Clin Invest,1997,99(7):1516.

[3] 劉峰,高士杰,胡慧剛,等.大黃治療休克后胃腸功能障礙的研究[J].中國急救醫(yī)學(xué),2003,23(1):38.

[4] 陳海龍,吳咸中,關(guān)鳳林,等.大承氣湯對 MODS時(shí)腸道細(xì)菌微生態(tài)學(xué)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2007,19(2):132.

[5] 王春妍,楊世忠,遲寶榮.大承氣湯對急性肝損傷大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥生物學(xué)效應(yīng)的阻斷作用[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2006,16(6):356.

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[7] 呂冠華,王長洪,王立新,等.大承氣湯對重癥急性胰腺炎大鼠細(xì)胞因子及外周血γ δ T細(xì)胞的影響[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志,2008,16(6):355.

[8] 何俊,何慶玲,陳忠華,等.生長抑素聯(lián)合柴芍承氣湯鼻飼和生大黃灌腸治療重癥急性胰腺炎50例分析[J].重慶醫(yī)學(xué),2008,37(22):2603.

Effects of Dachengqi Decoction on rats with severe acute pancreatitis

T ANGJ in1,SONG Meng-long1,CHENG Fei1,et al.

(Departmentof Oncology,Second Af f iliated Hospital,Chongqing Medical University,Chongqing400010,China)

ObjectiveTo observe the effects of Dachengqi Decoction on rats with severe acute pancreatitis(SAP).MethodsFifty Wistar rats were randomly divided into sham operation group(A group),SAP group(B group),SAP+ulinastatin group(C group),SAP+Dachengqi Decoction group(D group)and SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group(E group).SAP was induced by retrograde injection of 5%sodium taurocholate,the levels of IL-6,IL-10 and ET from lung,ileum and blood plasma were detected after 24 h since SAP induced.ResultsThe levels of IL-6 and ET of lung,ileum and blood plasma in SAP+ulinastatin group,SAP+Dachengqi Decoction group,SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group decreased significantly than that in SAP group(P＜0.05),and they were significantly lower in the SAP+Dachengqi Decoction+ulinastatin group compared with other two group(P＜0.05);but the levels of IL-10 increased significantly(P＜0.05).ConclusionDachengqi Decoction could affect inflammatory reaction of SAP by reducing proinflammatory factors of ET and IL-6 and increasing anti-inflammatory factor of IL-10.Dachengqi Decoction and ulinastatin have additive or synergetic effects on anti-inflammatory action in rats with SAP.

severe acute pancreatitis;Dachengqi Decoction;inflammatory factor

R365.576

A

1671-8348(2010)09-1051-02

2009-10-19

2009-11-12)

?論 著?