黃增瓊， 蔣偉哲， 黃興振， 黃 敏， 巫世紅

(廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，廣西南寧530021)

貓豆胍是從貓豆中提取分離得到的一種單體成分，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。貓豆，又名貓爪豆、狗爪豆、龍爪豆，是豆科藜豆屬植物龍爪藜豆Stizotobium cochinchinensis(Lour).Tang et Wang的種子［1］。貓豆中含有左旋多巴，是國(guó)內(nèi)提取左旋多巴最主要的原料藥材［2］。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，貓豆胍具有一定的鎮(zhèn)靜催眠作用［3］。但對(duì)其質(zhì)量控制方法的研究尚無(wú)報(bào)道。為了確保貓豆胍的產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)研究建立了準(zhǔn)確、可靠、專(zhuān)屬性強(qiáng)的質(zhì)量控制方法。

圖1 貓豆胍化學(xué)結(jié)構(gòu)式

1 儀器和試藥

1.1 儀器

威瑪龍LC-9000D高效液相色譜儀(南寧市威瑪龍色譜科技有限公司);Sartorius ME215S電子天平(北京賽多麗斯儀器系統(tǒng)有限公司);AS5150A超聲波處器(天津奧特比賽恩斯有限公司);X-6顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀(北京泰克儀器有限公司)。

1.2 試藥

貓豆胍對(duì)照品，純度99.54%(廣西醫(yī)科大學(xué)新藥研究開(kāi)發(fā)中心提供);貓豆藥材(廣西邦爾植物制品有限公司提供，經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院劉春榮副主任中藥師鑒定);貓豆胍樣品(自制);甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 貓豆胍的制備方法

取貓豆適量，以0.1 mol/L鹽酸溶液滲漉提取，提取液濃縮，經(jīng)732型強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂交換，蒸餾水洗至中性，1%氨水作為洗脫劑洗脫。收集含有貓豆胍的洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得貓豆胍粗品。反復(fù)重結(jié)晶，得貓豆胍精品，經(jīng)HPLC測(cè)定，純度大于98%。

3 性狀

3.1 外觀性狀及溶解度

取本品，觀察其外觀性狀。本品為白色或類(lèi)白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，無(wú)味。微溶于水，溶于酸性或堿性水溶液;在乙醇中極微溶解;在石油醚中幾乎不溶。

3.2 熔點(diǎn)

取本品，用顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定熔點(diǎn)，熔點(diǎn)為208～212℃(分解)。

3.3 吸收系數(shù)

取本品，精密稱(chēng)定，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，定量稀釋?zhuān)瞥擅? mL中約含30 μg的溶液，按中國(guó)藥典2005年版二部附錄IV A，在324 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，本品的吸收系數(shù)為423-428。

4 鑒別方法

4.1 化學(xué)法

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴改良的碘化鉍鉀試劑，產(chǎn)生桔紅色沉淀。

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴碘－碘化鉀試劑，產(chǎn)生棕色沉淀。

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，加1～2滴硅鎢酸試劑，產(chǎn)生白色沉淀。

4.2 紫外分光光度法

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸制成每1 mL含10 μg的溶液，按紫外-可見(jiàn)分光光度法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄IV A)測(cè)定，在324 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，246 nm波長(zhǎng)有次大吸收。

4.3 紅外分光光度法

取本品適量，按紅外分光光度法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄IV C)測(cè)定，紅外吸收光譜圖中有芳香雜環(huán)、氨基、仲氨基、羰基和羥基等特征吸收峰，與對(duì)照品紅外吸收光譜圖一致。

4.4 薄層色譜法

取本品適量，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，制成濃度為1 mg/mL的供試品溶液。另取貓豆胍對(duì)照品，加0.1 mol/L冰醋酸溶解，制成濃度為1 mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版二部附錄ⅤB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)為展開(kāi)溶劑，展開(kāi)，取出，晾干，在365 nm紫外燈下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色熒光斑點(diǎn)。

5 含量測(cè)定

5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

色譜柱:PhenomenexTMC18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.1 mol/L冰醋酸-甲醇(95∶5);流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)324 nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量20 μL。

按上述色譜條件，取5.2項(xiàng)下各溶液，進(jìn)樣測(cè)定。理論塔板數(shù)按貓豆胍峰計(jì)算不低于10 000。在該條件下測(cè)定，陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

圖2 高效液相色譜圖

5.2 溶液的配制

對(duì)照品溶液 取貓豆胍對(duì)照品約10 mg，精密稱(chēng)定，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸溶解至刻度，配制成濃度為0.118 0 mg/mL的對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液10 mL，置25 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，制成濃度為0.047 2 mg/mL的對(duì)照品溶液。

供試品溶液 取貓豆胍樣品約35 mg，精密稱(chēng)定，置10 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸溶解至刻度，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，即得。

陰性對(duì)照溶液 以0.1 mol/L冰醋酸溶液作為陰性對(duì)照溶液。

5.3 線性關(guān)系考察

精密量取 5.2 項(xiàng)下對(duì)照品貯備液 0.5，1，2，4，8 mL，分別置于10 mL量瓶中，加0.1 mol/L冰醋酸至刻度，搖勻，制成濃度分別為 0.005 9，0.011 8，0.023 6，0.047 2，0.094 4 mg/mL的系列溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得線性回歸方程為:Y=2 000 000X－29 078，r=0.999 7。結(jié)果表明，貓豆胍進(jìn)樣量在0.118～1.888 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

5.4 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一份對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定 6次，RSD為0.89%，表明本法精密度高。

5.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品6份，按5.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，RSD為1.60%，表明本法重復(fù)性良好。

5.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同1份供試品溶液，室溫放置。分別于0，2，4，8，12 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果RSD為0.63%，表面樣品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定。

5.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)［4］

取已知含量的同一批樣品9份，每3份為1組，分別加入對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率和RSD，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

5.8 樣品的含量測(cè)定

取3批貓豆胍樣品，每批2份，按“5.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每份樣品進(jìn)樣測(cè)定3次。另取對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。貓豆胍的平均含量為98.06%，RSD為1.04%。

6 討論

貓豆是廣西特色藥材資源，從貓豆中提取左旋多巴的技術(shù)已經(jīng)比較成熟并實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化。為充分利用貓豆資源，我們對(duì)貓豆中的單體成分貓豆胍進(jìn)行了研究。前期研究表明，貓豆中的貓豆胍含量約為0.35%，具有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用的價(jià)值。

實(shí)驗(yàn)中對(duì)薄層色譜法鑒別貓豆胍的展開(kāi)條件進(jìn)行了探索，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)展開(kāi)時(shí)，展開(kāi)速度較慢，樣品斑點(diǎn)分不開(kāi)，脫尾較嚴(yán)重;以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，樣品無(wú)法展開(kāi)。經(jīng)反復(fù)探索，以乙酸乙酯-甲酸-水(10∶2∶3)為展開(kāi)劑時(shí)，展開(kāi)較好。

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇:貓豆胍在324 nm波長(zhǎng)有最大吸收，在246 nm波長(zhǎng)有次大吸收。在246 nm波長(zhǎng)處測(cè)定，樣品中的少量左旋多巴和其它雜質(zhì)成分也有吸收，對(duì)實(shí)驗(yàn)有一定干擾。而采用324 nm波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定，雜質(zhì)成分在該波長(zhǎng)條件下無(wú)吸收，專(zhuān)屬性強(qiáng)，故確定測(cè)定波長(zhǎng)為324 nm。

參考有關(guān)文獻(xiàn)［5］，以0.1 mol/L 冰醋酸-甲醇(90 ∶10)為流動(dòng)相測(cè)定貓豆胍含量時(shí)，出峰時(shí)間過(guò)早，樣品峰未能與溶劑峰分離。當(dāng)流動(dòng)相比例調(diào)整為0.1 mol/L冰醋酸-甲醇(95∶5)時(shí)，貓豆胍的保留時(shí)間在7 min左右，分離度好和峰形均較好。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所建立的貓豆胍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1977:1423.

［2］蔣偉哲，周燕文，吳 闖，等.不同產(chǎn)地貓豆中左旋多巴的含量比較［J］.中草藥，2000，31(11):861.

［3］黃增瓊，蔣偉哲，黃興振，等.貓豆胍鎮(zhèn)靜催眠和抗震顫麻痹作用研究［J］.中草藥，2009，40(2):276-278.

［4］謝衛(wèi)鋒，高玉珍，陳莉琳.感冒滴丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中成藥，2008，30(8):1171-1174.

［5］黃海濱，許學(xué)健，奉建芳.高效液相色譜法測(cè)定貓豆中左旋多巴的含量［J］.廣西植物，1994，14(3):293-294.