蔡 宇

(暨南大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州510632)

枸杞具有補(bǔ)腎養(yǎng)肝、潤肺明目、益精、補(bǔ)血等功效［1］。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides，LBP)是枸杞的有效成分之一。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，LBP具有降血糖、抗疲勞、增強(qiáng)免疫、耐缺氧、延緩衰老、促進(jìn)排鉛等多種生物功能［2，3］。熱水浸提法是枸杞多糖提取的常用方法，但其提取時(shí)間長，耗能多。超聲波提取是近年來中藥提取分離研究應(yīng)用較多的方法，具有提取效率高、提取時(shí)間短、能耗低、提取藥液雜質(zhì)少、有效成分易于分離純化等優(yōu)點(diǎn)［4］。本研究采用正交實(shí)驗(yàn)法篩選超聲法提取枸杞多糖的適合條件，以枸杞多糖提取量為考察指標(biāo)，并與常規(guī)提取方法進(jìn)行比較，為超聲法用于枸杞多糖的提取提供理實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

枸杞，購于廣州市清平藥材市場，于60℃烘箱中烘烤1.5 h，取出后置于干燥器中放置24 h，備用。無水葡萄糖，分析純，上海伯奧公司生產(chǎn)，批號(hào):200802008。濃硫酸，分析純，廣州市東紅化工廠，批號(hào):080401202。苯酚，分析純，汕頭西隴化工廠，批號(hào):071105。

1.2 供試品溶液的制備

1.2.1 超聲提取法提取 稱取枸杞9份，每份10 g，按照正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的條件提取。每次提取后過濾，合并濾液，濃縮至10 mL，備用。

1.2.2 煎煮法提取 稱取枸杞子10 g，加10倍水于80℃水浴鍋中浸泡2 h，于電磁爐上加熱，沸后煎煮1.5 h，稍冷過濾，收集濾液;濾渣加8倍水，于電磁爐上加熱，沸后煎煮1 h，稍冷過濾，合并濾液，濃縮至10 mL，備用。

1.2.3 枸杞多糖的分離 將取濃縮液離心處理(3 000 r/min，10 min)，除去水不溶性雜質(zhì)，傾出上清液加5倍量無水乙醇，快速混勻30 s，3 000 r/min離心15 min，傾去上清液，沉淀加3倍量無水乙醇，方法同上，反復(fù)兩次。用水將沉淀定量轉(zhuǎn)移到50 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻即得枸杞粗多糖液，濃度0.2 g(生藥)/mL。待測。

1.3 枸杞多糖含量的測定

采用苯酚－硫酸法測定枸杞多糖的含量。

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取無水葡萄糖適量，加水溶解稀釋制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL 置于帶塞試管中，然后依次精密加入 2.0，1.8，1.6，1.4，1.2，1.0 mL 蒸餾水，再各加 6%的苯酚試劑1.0 mL，混勻，精密加入5 mL濃硫酸，混勻后放置5 min，置沸水浴中加熱15 min，立即轉(zhuǎn)入冷水浴中冷卻至室溫。于490 nm下測定吸光度值。以濃度－吸光度值做直線，經(jīng)回歸分析得回歸方程。

1.3.3 供試品溶液枸杞多糖含量的測定 精密吸取樣液0.5 mL三份，分別置于10 mL具塞試管中，精密加入蒸餾水1.5 mL，6%苯酚試劑1.0 mL，混勻，再精密加入濃硫酸5 mL，混勻后放置5 min，置沸水浴中加熱15 min，立即轉(zhuǎn)入冷水浴中冷卻至室溫，于490 nm下測定吸光度值。吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，計(jì)算濃度。

1.4 提取方法比較

稱取枸杞子，分別按照正交實(shí)驗(yàn)得到的最適超聲提取條件和水煎煮法提取枸杞多糖，每種方法重復(fù)3次，比較枸杞多糖提取量的平均值。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取無水葡萄糖51.2 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解稀釋到刻度，濃度1.024 mg/mL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以各濃度的標(biāo)準(zhǔn)液的體積對(duì)吸光度做直線，得方程y=6.041 3x+0.004 9，r=0.999 5。

2.3 超聲法提取枸杞多糖正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表1～3。

表1 超聲法因素水平

表2 超聲法提取枸杞多糖L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

表3 方差分析

從方差分析表可以看出，超聲法提取枸杞多糖中水量對(duì)有效成分提取量的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05;提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)有效成分提取量的影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。從K值可見，所加水量為14倍，提取時(shí)間為15 min，提取次數(shù)為3次時(shí)枸杞多糖提取量最高。綜合上述結(jié)果可知，超聲法提取枸杞多糖的最佳條件為:水量14倍、提取時(shí)間15 min，提取次數(shù)3次。

2.4 超聲提取和水煎煮法提取枸杞多糖的比較

超聲法提取與水煎法提取比較，枸杞多糖提取量略高，但二者沒有顯著性差異，結(jié)果見表4。采用超聲提取法提取更省時(shí)，更節(jié)能，提取效率更高。

表4 兩種方法枸杞多糖提取量比較

3 討論

枸杞子系茄科植物枸杞的干燥果實(shí)，性甘平，具有補(bǔ)腎養(yǎng)肝、潤肺明目、益精骨、補(bǔ)血之功效。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides，LBP)是從枸杞子中分離出的有效成分之一，具有降血糖、抗疲勞、增強(qiáng)免疫、耐缺氧、延緩衰老、促進(jìn)排鉛等多種生物功能。本實(shí)驗(yàn)采用正交實(shí)驗(yàn)篩選超聲法提取枸杞多糖的適合條件，結(jié)果顯示:超聲法提取加水量為14倍，提取時(shí)間為15 min，提取次數(shù)為3次時(shí)枸杞多糖提取量最高;超聲法提取與水煎法提取比較，枸杞多糖含量無顯著性差異，但耗能較少，提取效率更高?？勺鳛殍坭蕉嗵翘崛〉挠行Х椒ㄖ唬溆糜诖笊a(chǎn)的提取條件還有待于進(jìn)一步研究。

［1］唐 軍，姚虹霞，王燕平.枸杞子藥理作用進(jìn)展［J］.中華現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與臨床，2006，5(4):44－45.

［2］黃秋蚌，陳遠(yuǎn)鋒.枸杞多糖的研究及其進(jìn)展［J］.食品研究與開發(fā)雜志，2006，27(1):172－174.

［3］蔡天革等.枸杞多糖對(duì)染鉛大鼠海馬腎上腺素和去甲腎上腺素影響［J］.中國職業(yè)醫(yī)學(xué)，2006，33(2):139－140.

［4］鐘 玲，尹蓉莉.超聲提取技術(shù)在中藥提取中的研究進(jìn)展［J］.西南軍醫(yī)，2O07，9(6):84－87.

［5］龔 濤，任大明，王 楠.枸杞多糖提取工藝的研究［J］.生物技術(shù)，2005，15(6):78.