鄧向濤， 董玉秀， 李宗鐸

(1.河南省腫瘤醫(yī)院，河南 鄭州450003;2.河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州450003)

參桂膠囊由人參、川芎、桂枝三味中藥研制而成，具有益氣通陽、活血化瘀的功效，臨床上用于缺血性心臟病療效顯著?，F(xiàn)代研究表明，人參的主要有效成分是人參總皂苷，其中人參皂苷Rb組分(包括Rb1、Rb2、Rb3)可明顯增強(qiáng)皮下注射異丙腎上腺素小鼠的耐缺氧能力，對抗腦垂體后葉素所致大鼠急性缺血性心電圖改變［1］;人參皂苷 Re、Rg1、Rb2、Rc對整體動物的冠狀動脈、腦血管、椎動脈、肺動脈均有擴(kuò)張作用［2］。川芎的活性成分有阿魏酸、川芎嗪、川芎揮發(fā)油，阿魏酸具有抑制血小板聚集、促進(jìn)血小板解聚、抗血栓形成、解除血管平滑肌痙攣、抗氧化、提高膜穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)免疫等作用［3］;川芎嗪能夠擴(kuò)張血管，增加冠脈流量，改善心肌供氧，降低心肌耗氧［4］;川芎揮發(fā)油具有改善微循環(huán)、增加腦血流量等作用［5］。桂枝揮發(fā)油中的主要成分桂皮醛有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、解熱、擴(kuò)張血管、降壓、解痙、活血通經(jīng)作用［6］。本文從各藥物所含有效成分入手，采用均勻設(shè)計方法篩選出最佳組合與配比，為參桂膠囊的二次開發(fā)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

ASB240U生物信號分析系統(tǒng):成都遨生電子有限公司。

人參皂苷(武漢生物科技有限公司，總皂苷含量為90.82%，人參皂苷Rg1和Re的總含量為17.44%)，鹽酸川芎嗪(北京市燕京制藥廠，含量為100%)，阿魏酸(武漢遠(yuǎn)城科技發(fā)展有限公司，含量為74.5%)，川芎揮發(fā)油、桂枝揮發(fā)油(吉安市福達(dá)天然藥用油廠)，參桂膠囊(上海玉丹藥業(yè)有限公司，批號050328，臨用前用0.5%CMC－Na溶液配成所需濃度)，戊巴比妥鈉(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號F20020915)，垂體后葉素(上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號051103，臨用前用NaCl注射液配成1 u/mL的濃度)，吐溫－80(江蘇晨牌藥業(yè)集團(tuán))。

Wistar大鼠，體重230～250 g，♀♂各半，河南省實驗動物中心提供，合格證號:醫(yī)動字第410117號。

2 方法與結(jié)果

2.1 劑量設(shè)置

參桂膠囊處方中治療心肌缺血的物質(zhì)基礎(chǔ)主要有:人參皂苷、阿魏酸、川芎嗪、川芎揮發(fā)油和桂枝揮發(fā)油，參桂膠囊即是根據(jù)這些成分的理化性質(zhì)提取研制而成，故以此為重新組方的對象。由于各有效成分在提取制備過程中存在一定的損失，故各有效成分的劑量設(shè)置大體以文獻(xiàn)報道藥材含量的最高值(川芎嗪除外)為上限。人參在原方中為君藥，故人參皂苷劑量設(shè)置的下限不能為零，以制劑中的實測值為標(biāo)準(zhǔn)，其余成分劑量設(shè)置的下限均為零。為了減少試驗次數(shù)，將有效成分中的川芎揮發(fā)油和桂枝揮發(fā)油合并為一個因素即芎桂揮發(fā)油(川芎揮發(fā)油和桂枝揮發(fā)油的混合物)，兩者的比例與參桂膠囊的比例相同，即川芎揮發(fā)油∶桂枝揮發(fā)油=1.9∶0.6。經(jīng)大鼠與人的劑量換算及動物預(yù)試驗，確定垂體后葉素致大鼠心肌缺血實驗中各有效成分的劑量范圍為人參皂苷(X1)63～189 mg/(kg·d);阿魏酸(X2)0～16.4 mg/(kg·d);芎桂揮發(fā)油(X3)0～0.13 mL/(kg·d);鹽酸川芎嗪(X4)0～576 mg/(kg·d)。

將上述四個因素各等分為7個水平，分別用1～7代表四個因素(X1、X2、X3、X4)的 7 個水平，按均勻設(shè)計 U7(74)表(表1)的安排進(jìn)行試驗。7個處方的受試品分別按表中的劑量配制(10 mL/kg)，溶劑為0.5%CMC－Na溶液，揮發(fā)油用吐溫－80 增溶，用量為 0.68%［7］。

2.2 垂體后葉素致大鼠心肌缺血試驗

取230～250 g Wistar大鼠90只，♀♂各半，隨機(jī)分為9組，每組10只。處方1～7組分別灌胃相應(yīng)的受試品;參桂膠囊組灌胃參桂膠囊內(nèi)容物3.0 g/(kg·d);空白組灌胃0.5%CMC－Na溶液(內(nèi)含0.68%吐溫－80)。灌胃容積均為10 mL/kg。連續(xù)灌胃給藥10 d，末次給藥1 h后，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(38 mg/kg)，將大鼠背位固定，電極連接于ASB240U生物信號分析系統(tǒng)，記錄正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖，然后由舌下靜脈注射垂體后葉素(Pit)0.5 u/kg(0.5 mL)，速度 10 s推完，即刻記錄靜脈注射后 15 s，30 s，1 min，2 min，3 min，5 min時的Ⅱ?qū)?lián)心電圖，測定給Pit前后T波峰值的變化，以3 min內(nèi)T波變化值為指標(biāo)，用SPSS(社會科學(xué)統(tǒng)計軟件包)11.0軟件進(jìn)行組間比較;用UD(均勻設(shè)計)2.20軟件進(jìn)行多元回歸分析，預(yù)測優(yōu)化結(jié)果。見表1。

表1 均勻設(shè)計U7(74)表

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 組間比較

以3 min內(nèi)T波變化值為指標(biāo)，各組之間用SPSS 11.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果見表2。除處方1外，其余處方均顯著降低3 min內(nèi)T波變化值(P＜0.05);處方2和處方5的對抗作用極顯著，與參桂膠囊組相比也有顯著性差異(P＜0.05)。

2.3.2 回歸模型的建立與分析

均勻設(shè)計的實驗結(jié)果見表3。

表2 垂體后葉素(pit)致大鼠3 min內(nèi)T波變化

表3 均勻設(shè)計試驗結(jié)果

以各原料藥的劑量為相應(yīng)的因素值，3 min內(nèi)的ΔT值為Y值，應(yīng)用UD 2.20軟件進(jìn)行二次多項式逐步回歸分析，求得回歸方程為:

復(fù)相關(guān)系數(shù)r=0.999 9，方差分析顯著，結(jié)果見表4。

回歸方程中的Y值代表處方對垂體后葉素致心肌缺血拮抗作用的強(qiáng)弱，其值越小說明拮抗作用越強(qiáng)，處方的療效越好，故對試驗條件進(jìn)行優(yōu)化時，Y值應(yīng)取最小值。采用網(wǎng)格嘗試法優(yōu)化，UD2.20軟件得出的結(jié)果為:X1(人參皂苷)63 mg;X3(芎桂揮發(fā)油)0.13 mL;X4(鹽酸川芎嗪)438 mg。

表4 方差分析

2.4 優(yōu)化處方的驗證

取230～250 g Wistar大鼠20只，♀♂各半，隨機(jī)分為2組，每組10只。優(yōu)化處方組灌胃按優(yōu)化結(jié)果所制成的受試品，空白組灌胃0.5%CMC－Na溶液，按照2.2項下的方法檢測藥效。結(jié)果見表5。

表5 優(yōu)化處方驗證結(jié)果(±s，n=10)

表5 優(yōu)化處方驗證結(jié)果(±s，n=10)

注:與空白組比較，*P＜0.01。

空白組0.46±0.12優(yōu)化處方組 0.17±0.08*

優(yōu)化處方組與空白組的比值小于均勻設(shè)計實驗中各處方組與同批試驗空白組的比值，說明此處方確為最佳處方，其中固態(tài)原料藥人參皂苷，鹽酸川芎嗪的配比(重量比)為1∶6.95，劑量為501 mg/kg;液態(tài)提取物川芎揮發(fā)油，桂枝揮發(fā)油的配比(體積比)為1.9∶0.6，劑量為0.13 mL/kg。

3 討論

3.1 中醫(yī)認(rèn)為冠心病心肌缺血之病機(jī)以心脾腎陽氣虛衰為本，瘀血濁邪阻滯脈道為標(biāo)，本虛標(biāo)實，因虛致實［8］。本實驗根據(jù)文獻(xiàn)報道，利用垂體后葉素使冠狀動脈、毛細(xì)血管、小動脈、小靜脈收縮，導(dǎo)致心臟血氧供應(yīng)障礙，造成急性心肌缺血模型。由于大鼠心電圖ST段極短，幾乎與T波融合，故將T波抬高或下降幅度作為評價心肌缺血損傷的指標(biāo)。

3.2 川芎嗪在藥材中的含量很低，在制劑中難以檢出，但其人工合成的鹽酸鹽用于缺血性心腦血管疾病效果顯著，故川芎嗪最高水平劑量的設(shè)定參照臨床上的最高用量。

3.3 UD 2.20軟件的分析結(jié)果中，阿魏酸的量為零，優(yōu)化處方最終由人參皂苷、川芎揮發(fā)油、鹽酸川芎嗪、桂枝揮發(fā)油組成。其中，人參皂苷是人參中的有效物質(zhì)，川芎揮發(fā)油和川芎嗪是川芎中的有效物質(zhì)，桂枝揮發(fā)油則是桂枝中的有效物質(zhì)。從有效成分的歸屬上看來，優(yōu)化處方與原處方的組成相一致。與組方成分相比，優(yōu)化處方中缺少阿魏酸，這可能與下列因素有關(guān):實驗設(shè)置的劑量與其它組分相比偏低，優(yōu)化結(jié)果易趨于零;阿魏酸的主要藥理作用為改善血液的流變性，在治療心肌缺血方面處于輔助地位。

［1］陳可冀.冠心病心絞痛的治療研究述評［J］.北京中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1989，12(3):1.

［2］李天寶.中醫(yī)治療冠心病心絞痛近況［J］.新中醫(yī)，1992，1(6):51.

［3］于幼海.冠心病心絞痛中醫(yī)藥治療近況［J］.上海中醫(yī)藥雜志，1989，4(6):33.

［4］李宗鐸，索潤堂.參桂膠囊藥理學(xué)研究［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2003，26(4):56－58.

［5］殷惠軍，蔣躍絨，劉 穎，等.參桂膠囊對心肌細(xì)胞能量代謝及脂質(zhì)過氧化影響的研究［J］.中醫(yī)藥信息，2004，21(3):71－72.

［6］殷惠軍，蔣躍絨，劉 穎，等.參桂膠囊對大鼠心肌梗死后心功能影響的研究［J］.上海醫(yī)藥，2005，26(10):447－448.

［7］范碧亭.中藥藥劑學(xué)［M］.上海:上?？萍汲霭嫔?，2002.237.

［8］張秋娟，趙 紅.中醫(yī)藥治療冠心病的機(jī)制研究及對患者心功能的影響［J］.中國臨床康復(fù)，2004，8(15):2942－2943.