尹 萌，孟月蘭，聞琍毓，徐 力(江蘇省揚州藥品檢驗所，揚州 225009)

香丹注射液為臨床常用的中藥制劑，由丹參水提取液和降香經(jīng)水蒸氣蒸餾后的飽和溶液制備而成，具有擴張血管、增進冠狀動脈血流量的功效。衛(wèi)生部藥品標準十七冊質(zhì)量標準中采用HPLC法測定丹參中原兒茶醛的含量，本文建立一種用HPLC法同時測定丹參中丹參素和原兒茶醛兩種水溶性成分含量的方法，簡便、準確、無干擾，可更好的控制香丹注射液的質(zhì)量;同時采用該方法測定了共12個生產(chǎn)廠家16批樣品中兩成分的含量。結(jié)果表明，不同廠家的香丹注射液中，丹參素和原兒茶醛的含量差異很大，質(zhì)量標準急待提高以進一步控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證人民用藥安全。

1 儀器與試藥

Waters 2695 HPLC色譜儀，包括2996檢測器、Empower色譜工作站;AG-135型電子分析天平(梅特勒-托利多上海有限公司);原兒茶醛對照品(批號:110855-200508)、丹參素鈉對照品(批號:110810-200506)均由中國藥品生物制品檢定所提供;甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純;香丹注射液為本所抽檢樣品，測定時均在樣品標注有效期內(nèi)，見表1。

表1 樣品情況一覽表Tab 1 Data of samples

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Alltima C18(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -0.5%冰醋酸(90∶10);流速:1.0 mL·min-1;檢測波長:280 nm;柱溫:25℃ ;進樣量:10 μL。

2.2 對照品溶液的制備

分別精密稱取置五氧化二磷干燥器中干燥12 h的丹參素鈉對照品26.38 mg和原兒茶醛對照品12.10 mg，置同一50 mL量瓶中，加流動相適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密吸取該貯備液5 mL，置25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取樣品2 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

取降香藥材按香丹注射液制備工藝制成不含丹參的陰性對照溶液，按“2.3”項下方法制得陰性對照溶液。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

取陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定。結(jié)果，丹參素鈉和原兒茶醛的保留時間分別為7.02 min和14.40 min，理論板數(shù)按丹參素鈉峰計算，達到7 000以上，與其他雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC

2.6 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品貯備液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，置10 mL量瓶中，分別用流動相稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”色譜條件分別吸取10 μL進樣測定，以所得的峰面積(A)對進樣量(C)進行線性回歸，得回歸方程:A丹參素鈉=6 433.7C+18 540(r=0.999 5);A原兒茶醛=42 039C+52 708(r=0.999 6)。結(jié)果表明，丹參素鈉、原兒茶醛進樣量分別在0.26 ～1.58 μg和 0.121 ～0.726 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗

取對照品溶液10 μL，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次。結(jié)果丹參素鈉、原兒茶醛峰面積的 RSD分別為0.4%和0.3%，表明儀器精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗

取同一批樣品，按“2.2”項下方法制備樣品溶液，共取6份，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果，丹參素鈉、原兒茶醛峰面積的RSD分別為1.2%和0.9%，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取已知含量的同一批樣品1 mL，置50 mL量瓶中，分別加入對照品適量，加流動相稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)Tab 2 Results of recovery test of samples(n=6)

2.10 樣品含量測定

取供試品溶液和對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣10 μL，用外標法計算含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果Tab 3 Results of content determination of samples

3 討論

實驗時，選用的冰醋酸的濃度分別為0.2%、0.5%和1.0%，結(jié)果冰醋酸的濃度為0.5%時，峰形對稱性好，且流動相甲醇-0.5%冰醋酸的比例為90∶10時，丹參素鈉、原兒茶醛兩峰與相鄰雜質(zhì)峰均能達到很好的分離效果。

丹參(salvia miltiorrhiza beg)為唇形科鼠尾草屬植物的干燥根，具有祛痰止痛、活血通經(jīng)、清心除煩之功效。近來對丹參化學(xué)成分的研究很多，一致認為丹參的化學(xué)成分主要分為兩類，即水溶性成分和脂溶性成分。水溶性成分主要有原兒茶醛、丹參素、丹酚酸 A、丹酚酸 B等，脂溶性成分有丹參酮ⅡA、隱丹參酮等。而香丹注射液由降香經(jīng)水蒸氣蒸餾后與丹參水提取液制備而成。由此可以認為香丹注射液中丹參的主要成分為水溶性成分，所以選擇丹參中兩類最主要的水溶性成分丹參素和原兒茶醛，作為定量指標，從而達到控制質(zhì)量的目的。

在測定樣品時發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)樣品的色譜圖基本一致，但有兩批樣品色譜圖中在與原兒茶醛色譜峰相對保留時間約為0.43處，有一較大的色譜峰，而其他樣品的色譜圖在相應(yīng)的位置上只有一很小的色譜峰。目前仍不能確定該色譜峰的來源，此項工作有待進一步研究。鑒于香丹注射液組成簡單，只有兩味藥，建議可以在質(zhì)量標準中增加以標準指紋圖譜作為對照圖譜的鑒別試驗，保證藥品質(zhì)量。

共測定了12個廠家生產(chǎn)的16批樣品中丹參素鈉和原兒茶醛的含量，樣品中兩成分的含量差異很大。丹參藥材由于產(chǎn)地、生長環(huán)境、采收時間、貯藏條件、炮制以及制備工藝的不同，對其中有效成分均會造成影響。因此建議廠家重視藥材質(zhì)量，改善制備工藝，提高產(chǎn)品質(zhì)量，保證人民用藥安全。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［S］.2005年版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:52-53.

［2］ 國家藥典委員會.藥品標準中成藥成方制劑(17冊)［S］.1998:200.

［3］ 蔡 梅，季一兵，駱雪芳，等.高效液相色譜法測定香丹注射液中丹參素和原兒茶醛的含量［J］.海峽藥學(xué)，2004，16(3):54.

［4］ 徐 曼，劉愛華，崔亞君，等.不同廠家生產(chǎn)的香丹注射液中丹參色譜指紋圖譜的比對研究［J］.中國天然藥物，2007，5(2):120.