鐘露苗， 夏新華

(1.湖南省藥品審評(píng)認(rèn)證與不良反應(yīng)監(jiān)測中心，湖南 長沙 410013;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410013)

舒胸片為《中國藥典》2005版一部收載的品種［1］，由三七、紅花和川芎三味藥組成。具有活血化瘀，通絡(luò)止痛之功效。用于瘀血阻滯所致的胸痹，癥見胸悶、心前區(qū)刺痛及冠心病心絞痛見上述證候者。其制法為紅花、川芎水提干膏、三七粉碎細(xì)粉制成的糖衣片，日服劑量達(dá)15片。為探討該復(fù)方有效成分富集純化的方法，作者采用大孔樹脂吸附技術(shù)，選擇LSA-30、HPD-100二種樹脂，在靜態(tài)吸附-脫吸附實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，對(duì)方中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、羥基紅花黃色素A、阿魏酸和川芎嗪六種有效成分進(jìn)行了動(dòng)態(tài)吸附性能的系統(tǒng)研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 shimadzu LC-10Atvp型高效液相色譜儀;shimadzu SPD-10Avp型紫外檢測器;N3000色譜工作站;AY120 SHIMADZU分析天平。玻璃層析柱(內(nèi)徑1.5 cm)。

1.2 試藥與材料 人參皂苷Rg1(批號(hào):110703-200322，供含測用)、人參皂苷Rb1(批號(hào):110704-200318，供含測用)、三七皂苷R1(批號(hào):110745-200312)、川芎嗪(批號(hào):110817-200305，供含量測定用)、阿魏酸(批號(hào):07733-9910，供含量測定用)、羥基紅花黃色素A對(duì)照品(批號(hào):111637-200502，供含量測定用)，均由中國藥品生物制品檢定所提供。

乙腈為色譜純(Caledon Laboratories LTD.)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

三七經(jīng)鑒定為五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根莖;川芎經(jīng)鑒定為為傘形科植物川芎Ligugsticum chuanxiong Hort.的干燥根莖;紅花經(jīng)鑒定為菊科植物紅花Carthamus tinctorius L.的干燥花。均由湖南三湘中藥飲片有限公司提供。

LSA-30型大孔吸附樹脂，由西安藍(lán)深交換吸附材料有限責(zé)任公司提供;HPD-100型大孔吸附樹脂由滄州寶恩化工有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 舒胸片提取液的制備 按2005版《中國藥典》舒胸片處方各藥味比例，取三七細(xì)粉，加50%乙醇浸泡2.5 h，回流提取2次，加醇量分別為藥材的8倍、6倍量，提取時(shí)間分別為2.5 h、2.0 h，收集醇提液，回收乙醇，備用;取川芎，加10倍量水煎煮2 h，濾過，濾液另存，藥渣與紅花加8倍量水煎煮二次，每次1 h，合并三次煎液，60℃減壓濃縮至每1 mL含1 g生藥，在攪拌下緩緩加入乙醇使含醇量達(dá)70%，靜置24 h，濾過，濾液回收乙醇，與上述醇提濃縮液合并，視實(shí)驗(yàn)需要于60℃減壓濃縮至適當(dāng)濃度，濾過，即得。

2.2 上柱藥液濃度對(duì)動(dòng)態(tài)吸附的影響

2.2.1 不同濃度藥液動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn) 分別精密量取生藥濃度為0.3 g/mL的藥液200mL、0.4 g/mL的藥液150 mL、0.5 g/mL的藥液120 mL、0.6 g/mL的藥液100 mL，調(diào) pH為5.0，以2 BV/h的流速分別通過裝有4 g LSA-30、HPD-100濕樹脂的玻璃柱，并用水洗去附著的藥液，收集各濃度下的全部流出液，分別用HPLC法測定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、川芎嗪、阿魏酸及羥基紅花黃色素A的含量［2-4］，同時(shí)測定原液(未經(jīng)吸附的舒胸片提取液)中上述各有效成分的含量，按下式計(jì)算各成分在LSA-30、HPD-100兩種樹上的比吸附量(A)。

式中:A為樹脂比吸附量(mg/g)，M1為起始濃度(mg/mL)，M2為流出液與水洗液混合后的剩余濃度(mg/mL)，V1為上柱藥液總體積(mL)，V2為流出液與水洗液的體積之和(mL)，W為干樹脂重量(g)。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.2.1 濃度對(duì)三七皂苷R1的動(dòng)態(tài)吸附的影響 結(jié)果見表1。

表1 不同濃度藥液中三七皂苷R1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表1可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內(nèi)，LSA-30樹脂對(duì)三七皂苷R1的比吸附量隨濃度增加總體呈增加趨勢，其中濃度為0.4 g/mL時(shí)有最大比吸附量;HPD-100樹脂對(duì)三七皂苷R1的比吸附量隨濃度增加未見明顯的變化。另外，LSA-30樹脂對(duì)三七皂苷R1的動(dòng)態(tài)比吸附量明顯大于HPD-100樹脂，配對(duì)t-檢驗(yàn)表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=5.770 3，P＜0.05)。

2.2.2.2 濃度對(duì)人參皂苷Rg1的動(dòng)態(tài)吸附的影響 結(jié)果見表2。

表2 不同濃度藥液中人參皂苷Rg1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表2可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內(nèi)，LSA-30樹脂對(duì)人參皂苷Rg1的比吸附量隨濃度的變化情況與上述三七皂苷R1相似;HPD-100樹脂對(duì)三七皂苷R1的比吸附量隨濃度增加呈增加的趨勢，濃度為0.4 g/mL時(shí)，吸附已接近飽和。另外，LSA-30樹脂對(duì)人參皂苷Rg1的動(dòng)態(tài)比吸附量也明顯大于HPD-100樹脂，配對(duì)t-檢驗(yàn)表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=13.831 8，P＜0.01)。

2.2.2.3 濃度對(duì)人參皂苷Rb1的動(dòng)態(tài)吸附的影響 結(jié)果見表3。

由表3可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內(nèi)，LSA-30樹脂對(duì)人參皂苷Rb1的比吸附量隨濃度的增加呈先增加后下降的趨勢，與上述二種皂苷一樣，濃度為0.4 g/mL時(shí)有最大比吸附量;HPD-100樹脂對(duì)人參皂苷Rb1的比吸附量隨濃度增加未見明顯變化。另外，與上述二種皂苷不同，除濃度為0.4 g/mL外，LSA-30樹脂在其它濃度下對(duì)人參皂苷Rb1的動(dòng)態(tài)比吸附量低于HPD-100樹脂，配對(duì)t-檢驗(yàn)表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=-5.117 0，P＜0.05)。

表3 不同濃度藥液中人參皂苷Rb1在樹脂上的吸附情況(n=2)

2.2.2.4 濃度對(duì)羥基紅花黃色素A動(dòng)態(tài)吸附的影響 結(jié)果見表4。

表4 不同濃度藥液中羥基紅花黃色素A在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表4可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內(nèi)，LSA-30與HPD-100二種樹脂對(duì)羥基紅花黃色素A的比吸附量隨濃度的變化趨勢相似，均呈波浪形變化，濃度為0.4 g/mL時(shí)有最大比吸附量，濃度為0.5 g/mL時(shí)有最小比吸附量。另外，LSA-30樹脂對(duì)羥基紅花黃色素A的動(dòng)態(tài)比吸附量高于HPD-100樹脂，配對(duì)t-檢驗(yàn)表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=4.310 1，P ＜0.05)。

2.2.2.5 濃度對(duì)阿魏酸動(dòng)態(tài)吸附的影響 結(jié)果見表5。

表5 不同濃度藥液中阿魏酸在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表5可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內(nèi)，LSA-30、HPD-100樹脂對(duì)阿魏酸的比吸附量隨濃度的變化情況與上述人參皂苷Rg1相似。LSA-30樹脂對(duì)阿魏酸的動(dòng)態(tài)比吸附量也明顯大于HPD-100樹脂，配對(duì)t-檢驗(yàn)表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=4.244 4，P＜0.05)。

2.2.2.6 濃度對(duì)川芎嗪動(dòng)態(tài)吸附的影響 結(jié)果見表6。

由表6可見，在生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內(nèi)，LSA-30、HPD-100樹脂對(duì)川芎嗪的比吸附量隨濃度的變化情況亦與上述人參皂苷Rg1相似。LSA-30樹脂對(duì)阿魏酸的動(dòng)態(tài)比吸附量也明顯大于HPD-100樹脂，配對(duì)t-檢驗(yàn)表明二者的比吸附量存在顯著性差異(t=11.918 6，P＜0.01)。

表6 不同濃度藥液中川芎嗪在樹脂上的吸附情況(n=2)

2.3 上柱藥液pH值對(duì)動(dòng)態(tài)吸附的影響

2.3.1 不同pH藥液動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn) 量取生藥濃度為0.4 g/mL的藥液150 mL和生藥濃度為0.6 g/mL的藥液100 mL，各4 份，分別調(diào) pH 為4.0，5.0，6.0，7.0，以2 BV/h 的流速分別通過裝有4 g LSA-30和4 g HPD-100濕樹脂的玻璃柱，以下操作同2.1項(xiàng)下方法。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.3.2.1 pH對(duì)三七皂苷R1在樹脂上吸附的影響 結(jié)果見表7。

表7 不同pH藥液中三七皂苷R1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表7可見，藥液pH5時(shí)，三七皂苷R1在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上均具有最大的比吸附量，但LSA-30明顯高于HPD-100;而在pH7時(shí)，均具有最小的比吸附量。另外，pH對(duì)三七皂苷R1在兩種樹脂上的比吸附量的影響程度有明顯的差異。

2.3.2.2 pH對(duì)人參皂苷Rg1在樹脂上吸附的影響 結(jié)果見表8。

表8 不同pH藥液中人參皂苷Rg1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表8可見，pH改變，對(duì)人參皂苷Rg1在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量有一定程度的影響，對(duì)LSA-30樹脂，以pH5為佳;而對(duì)于HPD-100樹脂，以pH5～6為佳。兩種樹脂相比，在pH4～7范圍內(nèi)，LSA-30均明顯優(yōu)于HPD-100。

2.3.2.3 pH對(duì)人參皂苷Rb1在樹脂上吸附的影響 結(jié)果見表9。

表9 不同pH藥液中人參皂苷Rb1在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表9可見，pH改變，對(duì)人參皂苷Rb1在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響趨勢不同，在pH4～7范圍內(nèi)，人參皂苷Rg1的比吸附量在兩種樹脂上呈現(xiàn)相反的變化趨勢，對(duì) LSA-30樹脂，以 pH5為佳;而對(duì)于 HPD-100樹脂，以pH7為佳。

2.3.2.4 pH對(duì)羥基紅花黃色素A在樹脂上吸附的影響結(jié)果見表10。

表10 不同pH藥液中羥基紅花黃色素A在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表10可見，pH改變，對(duì)羥基紅花黃色素A在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響趨勢不同，在pH4～7范圍內(nèi)，對(duì)LSA-30樹脂，羥基紅花黃色素A的比吸附量呈先上升后下降走勢，pH以5為佳;而對(duì)于HPD-100樹脂，羥基紅花黃色素A的比吸附量呈逐步下降的趨勢，pH以4為佳。兩種樹脂相比，在pH5～7范圍內(nèi)，LSA-30明顯優(yōu)于HPD-100。

2.3.2.5 pH對(duì)阿魏酸在樹脂上吸附的影響 結(jié)果見表11。

表11 不同pH藥液中阿魏酸在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表11可見，pH改變，對(duì)阿魏酸在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響非常大，阿魏酸的比吸附量均是隨pH的增加而下降。對(duì)LSA-30樹脂，從pH4→5，阿魏酸的比吸附量稍有下降，而pH6～7時(shí)，比吸附量急居下降，幾乎達(dá)到不吸附的程度;而對(duì)于HPD-100樹脂，從pH4→5時(shí)，阿魏酸的比吸附量即出現(xiàn)明顯下降，pH6～7時(shí)與LSA-30樹脂相似。兩種樹脂對(duì)阿魏酸的比吸附量，均以pH4為佳。

2.3.2.6 pH對(duì)川芎嗪在樹脂上吸附的影響 結(jié)果見表12。

表12 不同pH藥液中川芎嗪在樹脂上的吸附情況(n=2)

由表12可見，pH改變，對(duì)川芎嗪在LSA-30、HPD-100兩種樹脂上的比吸附量的影響趨勢不同，在pH4～7范圍內(nèi)，對(duì)LSA-30樹脂，川芎嗪的比吸附量呈先上升后趨于穩(wěn)定的走勢，pH以5為佳;而對(duì)于HPD-100樹脂，川芎嗪的比吸附量在pH5時(shí)出現(xiàn)明顯下降，而在其它pH時(shí)，比吸附量較為接近。兩種樹脂相比，除pH5外，LSA-30與HPD-100在各pH處的比吸附量相近。

3 小結(jié)與討論

3.1 上柱藥液生藥濃度為0.3～0.6 g/mL范圍內(nèi)，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、羥基紅花黃色素A、阿魏酸和川芎嗪六種有效成分在LSA-30樹脂上的動(dòng)態(tài)比吸附量一般均大于HPD-100樹脂。其中生藥濃度為0.4 g/mL時(shí)，各成分在LSA-30樹脂上均有較佳的比吸附量;其中生藥濃度為0.6 g/mL時(shí)，各成分在HPD-100樹脂上均有較佳的比吸附量。

3.2 不同成分在同一樹脂上的比吸附量隨pH變化趨勢視樹脂種類不同差異有大有小。對(duì)于LSA-30樹脂，除阿魏酸外，其它5種成分比吸附量隨pH變化趨勢較為相似，且均以pH5時(shí)為最佳，阿魏酸在此pH亦可獲得較好的比吸附量;而對(duì)于HPD-100樹脂，6種成分的比吸附量隨pH變化趨勢差異較大，但pH4時(shí)各成分均可獲得較佳的比吸附量。

3.3 結(jié)構(gòu)類型相同的成分，pH對(duì)其在樹脂上的吸附性能影響不一定相同。如三七所含3種皂苷在LSA-30、HPD-100二種樹脂上的比吸附量隨pH的變化趨勢亦有程度不等的差異。對(duì)于有機(jī)弱酸類(如阿魏酸)、黃酮類(如羥基紅花黃色素A)，pH增加，可明顯降低其在非極性樹脂上的吸附性能，該現(xiàn)象可能與其解離后極性增加或使氫鍵破壞有關(guān);對(duì)生物堿類成分(如川芎嗪)，pH增加，其在非極性樹脂上的吸附性能稍有增加，該現(xiàn)象可能與其游離程度增加，極性降低有關(guān)。因此，用大孔樹脂分離純化復(fù)方提取液中多種不同結(jié)構(gòu)類型的有效成分時(shí)，考察藥液pH對(duì)各類成分比吸附量的影響十分必要，它將有助于尋找到對(duì)于大多數(shù)有效成分均具有較佳吸附性能的最適pH。

3.4 動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)與實(shí)際生產(chǎn)條件較為接近，它的研究結(jié)果對(duì)于合理選擇大孔樹脂的吸附工藝條件用于復(fù)方多組分的分離純化具有一定的指導(dǎo)價(jià)值。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:636.

［2］何 麗，夏新華.川芎提取液中川芎嗪與阿魏酸在HPHPD-100型大孔樹脂上吸附-脫吸附動(dòng)力學(xué)研究［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27(3):29-30.

［3］楊紅艷，夏新華.RP-HPLC測定腦得生片中4種皂苷的含量［J］. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008，4(5):38-40.

［4］夏新華，吳 衛(wèi).均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選紅花提取工藝［J］.中藥材，2006，29(11):1251-1253.