李 籃， 何 群， 王歡歡， 李鐵浪， 卿 藍(lán)， 王 適

(1.湖南化工職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南株洲412004;2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南長沙410208;3.湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬衡陽醫(yī)院，湖南衡陽421001)

脾氣虛證是臨床上小兒疳癥常見的證侯群之一，目前多用健脾益氣方內(nèi)服進(jìn)行治療。然而小兒服用湯劑有一定困難，尋找合適的針對小兒的治療方法乃臨床急需。捏脊療法為中醫(yī)特色療法之一，廣泛用于臨床多種疾病，特別是小兒疳證的治療中，目前臨床上多采用捏脊療法配合藥物等綜合治療，對其單獨(dú)使用的療效觀察偏少，能否推廣適合小兒特色的捏脊療法是目前學(xué)術(shù)界關(guān)注的內(nèi)容之一。本文探索單獨(dú)使用捏脊療法對脾氣虛癥的治療效果，以評價(jià)能否單獨(dú)使用該法對脾氣虛癥進(jìn)行治療。血液中的D-木糖含量是反應(yīng)腸道功能的重要指標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)通過對D-木糖含量的測定來檢定實(shí)驗(yàn)兔的胃腸道功能從而對比各個(gè)治療組的治療效果。據(jù)報(bào)道:脾氣虛癥患者，木糖排泄率多數(shù)降低，表明小腸的吸收功能減弱。本研究以利血平復(fù)制的脾氣虛證模型家兔為研究對象，通過捏脊療法對血清中的D-木糖的含量的影響，觀察捏脊療法治療脾氣虛癥的療效，并與四君子湯進(jìn)行對比，探討捏脊療法治療脾氣虛癥的可行性。

1 動(dòng)物、藥品、試劑與儀器

1.1 動(dòng)物 健康成年新西蘭大白兔，湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品與試劑 D-木糖:中國惠興生化試劑有限公司批號20080118;間苯三酚:天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所 批號20070607;冰醋酸:分析純;四君子湯:湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)院藥劑科提供;二次蒸餾水(自制)。

1.3 主要儀器 TU-1900雙光束紫外可見光光度計(jì):北京普析通用儀器有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 雙波長分光光度法血中D-木糖含量測定的方法學(xué)考察［1］

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)對照液的配制［1］稱取30.1 mg木糖用重蒸水溶解并稀釋至100 mL，配置成2.0 mmol/L的木糖對照品溶液。

2.1.2 最大吸收波長的測定 將標(biāo)準(zhǔn)對照液在雙光束紫外可見光光度計(jì)下掃描，記錄其紫外吸收光譜。結(jié)果顯示，D-木糖在550 nm處有最大吸收波長。

2.1.3 供試品溶液的制備 取試管若干，在供試品測定管、標(biāo)準(zhǔn)對照管和空白管中分別加入血清、標(biāo)準(zhǔn)液和雙蒸水各50 μL，各管加入顯色劑(取間苯三酚約0.5 g，精密稱定，加入100 mL冰醋酸及6 mL濃鹽酸)5 mL，混勻，100℃水浴中10 min，流水冷卻至室溫。用550 nm波長，以空白管調(diào)零，讀取測定管、標(biāo)準(zhǔn)管的吸收值(Abs)。

2.1.4 線性關(guān)系考察 取D-木糖標(biāo)準(zhǔn)對照品適量，精密稱定，加入雙蒸水溶解，定容至100 mL，搖勻，即得母液。分別移取 10、20、40、60、80、100 mL，置 100 mL 量瓶中，加入雙蒸水至刻度，搖勻，即得 0.6、1.2、2.4、3.6、4.8、6.0 mmol/L 的標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液。取各標(biāo)準(zhǔn)對照品溶液，于雙光束紫外可見光光度計(jì)測定吸光度，得吸收度與濃度的線性回歸方程為:Y=0.235 4X+0.049 1(R2=0.994 3，R=0.997 1)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，樣品的濃度在0.6 mmol/L到6 mmol/L之間線性關(guān)系良好。

2.1.5 儀器精密度實(shí)驗(yàn) 取正常兔血清50 μL，加入顯色劑5 mL，混勻，于100℃水浴加熱10 min，流水冷卻至室溫，測定A值，重復(fù)6次，計(jì)算得其RSD為0.404 5%，表明儀器精密度符合分析方法的要求，結(jié)果見表1。

表1 儀器精密度測定結(jié)果

2.1.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取正常兔血清50 μL，按2.1.4項(xiàng)法測定A值，每隔1 h測定1次，結(jié)果見表2。通過建立數(shù)學(xué)模型可知，吸收值隨時(shí)間變化的函數(shù)關(guān)系符合零級數(shù)學(xué)方程表達(dá)式為:Y=-1.55X+101.6，決定系數(shù) R2=0.950 8，P ＜0.05，將吸收值下降至95%所需時(shí)間代入方程中得測定時(shí)間4.258 h，供試品溶液在4.258個(gè)小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性測定結(jié)果

2.1.7 重復(fù)性測定 取試管6支，分別加入正常兔血清50 μL，再加入顯色劑5 mL，混勻，在100℃水浴加熱10 min，流水冷卻至室溫，測定A值，計(jì)算得其平均值=0.367 45，RSD=1.78%，表明重復(fù)性良好，測定結(jié)果見表3。

表3 重復(fù)性測定結(jié)果

方法學(xué)考察表明該分析方法簡便、快速、準(zhǔn)確，靈敏度高、重復(fù)性好(RSD=1.78%)，供試品溶液在4.258個(gè)小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，可用于本項(xiàng)研究中D-木糖的含量測定。

2.2 不同治療方法對脾氣虛證家兔的療效研究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果處理

2.2.1 家兔的選擇與分組 選用重量為1.4～2.1 kg的普通級家兔32只，♀♂各半，動(dòng)物購買后，正常喂養(yǎng)1周，觀察健康情況，稱重，編號，隨機(jī)分為4組:空白對照組、模型治療組、捏脊治療組、中藥治療組(四君子湯治療組)。每組8只。

2.2.2 脾氣虛癥模型兔的制備 除空白組外，各組家兔每日1次肌內(nèi)注射利血平注射液0.25 mg/kg，連續(xù)5 d，制作脾氣虛癥動(dòng)物模型?？瞻捉M家兔同期肌肉注射生理鹽水0.25 mg/kg，連續(xù) 5 d［3］。

2.2.3 各組處理方法及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果 空白組:每日1次灌喂生理鹽水10 mL/kg，連續(xù)兩周。模型組:每日1次灌喂生理鹽水10 mL/kg，連續(xù)兩周。中藥組:給予四君子湯治療，每日1次灌喂四君子湯10 mL/kg，連續(xù)兩周。捏脊組:每日捏脊1次，7 d為1個(gè)療程，連續(xù)2個(gè)療程，分別測定4組家兔在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后(第15天)血清中的D-木糖含量，結(jié)果見表4。

表4 第15天各組家兔血清中D-木糖含量測定結(jié)果(±s，n=8)

表4 第15天各組家兔血清中D-木糖含量測定結(jié)果(±s，n=8)

/mmol/L空白組組別 D-木糖平均濃度5.288 8±0.980 6模型組 3.351 5±1.186 7捏脊組 4.748 0±0.741 4中藥組5.029 4±1.077 3

將每組中測得的數(shù)據(jù)依次采用3S法、狄克松(Dixon)法、格拉布斯(Grubbs)法、指數(shù)分布樣本法檢驗(yàn)異常值，結(jié)果顯示每組數(shù)據(jù)無異常值(P＜0.05);數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)(Shapiro Wilk法、Kolmogorov-Smirnov法)，均滿足正態(tài)性(P＞0.05);數(shù)據(jù)經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)(Bartlett卡方檢驗(yàn)、Levene檢驗(yàn))，均滿足方差齊性(P＞0.05)。所以采用完全隨機(jī)單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析進(jìn)行多重比較(LSD法)，結(jié)果如表5。

表5 治療第15天各組D-木糖濃度多重比較結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知: 模型組與空白組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明造模成功;空白組與捏脊組、中藥組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，捏脊組、中藥組均與模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，表明治療效果顯著;其中捏脊組與中藥組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3.2 D-木糖是一種五碳糖，通常在血液中不存在。樊欣榮［3］等認(rèn)為，D-木糖在小腸內(nèi)通過被動(dòng)擴(kuò)散的方式進(jìn)行吸收，不需消化酶參與，吸收后在體內(nèi)不被肝臟代謝，經(jīng)腎排出，其吸收水平能夠反映小腸的表面積及小腸吸收功能水平。本實(shí)驗(yàn)用利血平造模，以期在模型動(dòng)物上模擬人的脾氣虛證，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示造模成功。捏脊療法為中醫(yī)的特色療法之一，廣泛流傳于民間，且已被應(yīng)用于臨床治療之中。本實(shí)驗(yàn)利用捏脊療法治療脾氣虛證并與傳統(tǒng)中藥的治療效果進(jìn)行比較，結(jié)果顯示捏脊療法與中藥湯劑療法治療效果相近，值得進(jìn)一步向臨床推廣。

［1］李幼生，劉放南，盛學(xué)勤，等.血清或尿液木糖快速測定及應(yīng)用［J］.陜西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，1995，10(2):1-2.

［2］張 銳，王聯(lián)清，李雨升，等.捏積療法對脾虛家兔血漿胃泌素的影響［J］.按摩與導(dǎo)引，2004，10(20):5-7.

［3］樊欣榮，朱文鋒，伍參榮，等.太陰與陽明病證實(shí)驗(yàn)大鼠小腸D-木糖的吸收功能及肝臟ATP酶活性研究［J］.上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，21(4):47-49.