游本剛， 潘海敏， 許瓊明， 唐麗華， 楊世林

(蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院，江蘇蘇州215123)

口服滲透泵制劑是以滲透壓作為釋藥動(dòng)力的控釋片，具有零級(jí)釋藥、釋藥速度恒定以及受釋藥環(huán)境影響較小等特點(diǎn)［1-3］，被認(rèn)為是迄今為止口服控釋制劑中最為理想的一種［4］。目前，已上市的滲透泵片有鹽酸奧昔布寧(商品名Ditrophan XL)、硝苯地平(商品名Procardia XL)、鹽酸維拉帕米(商品名Covera-HS又名Coer-24)等等，但中藥提取物的滲透泵產(chǎn)品報(bào)道很少。本課題組對(duì)珍珠菜［5］進(jìn)行了多年研究，制備了具有良好抗腫瘤作用的珍珠菜有效部位提取物［6-9］。本實(shí)驗(yàn)以珍珠菜有效部位提取物為模型藥物制備了微孔滲透泵控釋片，通過(guò)相似因子法對(duì)制劑的體外釋放度實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了評(píng)價(jià)，并通過(guò)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了處方，以期為中藥有效部位提取物制備微孔滲透泵控釋制劑提供一定的參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(配備SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器，LC-20AT型泵，CTO-10AS VP型溫控柱溫箱，LC solution型色譜工作站，日本島津儀器公司);KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);電子分析天平(starorious);RC-6溶出度測(cè)定儀(天津市新天光分析儀器技術(shù)有限公司);TDP型單沖壓片機(jī);YD-片劑硬度測(cè)試儀(天津市光學(xué)儀器廠);BY-300A型小型包衣機(jī)(上海黃海藥檢儀器廠)。

1.2 試劑 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):080-9002);柚皮素-7-O-葡萄糖苷對(duì)照品(實(shí)驗(yàn)室自制);珍珠菜提取物(ZTF，實(shí)驗(yàn)室自制);醋酸纖維素(CA，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);聚乙二醇400(PEG400，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);丙酮(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);鄰苯二甲酸二丁酯(DBP，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);乙腈(色譜純，TEDIA公司);其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 微孔滲透泵控釋片的制備 片芯制備:將處方量的ZTF粉末與過(guò)80目篩的各種輔料混合均勻，水作黏合劑制軟材，過(guò)20目篩，在40℃下干燥后用20目篩整粒，加入一定量的NaHCO3和滑石粉混合均勻，填充于直徑8 mm淺沖模內(nèi)壓得片重為(200±10)mg片芯。

包衣液制備:將適量醋酸纖維素溶于丙酮中，配制一定濃度的醋酸纖維素丙酮溶液，加入一定量的致孔劑和增塑劑，即得。

滲透泵片制備:將片芯置于包衣鍋內(nèi)，在滾動(dòng)條件下噴入包衣液，固定包衣液流速為2.5 mL/min，噴霧壓力為10.34 kPa，包衣溫度為40℃，包衣鍋轉(zhuǎn)速為35 r/min，至包衣膜增重達(dá)到要求即可。

2.2 體外釋放度試驗(yàn)

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流動(dòng)相:以乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸為流動(dòng)相B，采用梯度洗脫:0～18 min，83% ～80%B;18 ～30 min，80% ～86%B;檢測(cè)波長(zhǎng):蘆丁和柚皮素-7-O-葡萄糖苷的檢測(cè)波長(zhǎng)分別為254 nm和281 nm;流速:1.0 mL/min;柱溫:35℃;進(jìn)樣量20 μL。分別制備對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1，由圖可見(jiàn)輔料對(duì)于藥物的測(cè)定無(wú)干擾。

2.2.2 體外釋放度測(cè)定 取珍珠菜提取物微孔滲透泵控釋片，按照中國(guó)藥典2005年版(二部)附錄XC第三法測(cè)定，以250 mL 0.5%SDS水溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，溫度(37±0.5)℃，分別于第2、4、6、8、12 h 取樣3 mL(取出后迅速補(bǔ)加等量的新鮮介質(zhì))，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，棄初濾液，取續(xù)濾液經(jīng)HPLC分析求得蘆丁和柚皮素-7-O-葡萄糖苷的濃度并計(jì)算其累積釋放百分率。

2.2.3 體外釋放度評(píng)價(jià) 采用f2相似因子法對(duì)制劑體外釋藥曲線的相似性進(jìn)行評(píng)價(jià)，公式如下:f2=50×lg{［1+(1/n)∑(Rt-Tt)2］-0.5×100}。其中，Rt和Tt分別代表參比制劑和受試制劑在時(shí)間t的釋放度，n為時(shí)間點(diǎn)的個(gè)數(shù)。若50≤f2≤100則認(rèn)為兩制劑的釋放度相似，反之，則認(rèn)為不相似。

2.3 不同因素對(duì)珍珠菜提取物微孔滲透泵片釋藥的影響

2.3.1 NaCl用量對(duì)藥物釋放的影響 固定片芯處方其他成分的用量不變，使NaCl用量分別為片重的10%、25%、40%，填充劑的用量隨之作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，考察不同用量的NaCl對(duì)藥物釋放的影響，結(jié)果見(jiàn)圖2。采用相似因子法進(jìn)行相似性判定，結(jié)果表明NaCl的用量對(duì)藥物的釋放有一定的影響。

圖2 NaCl用量對(duì)藥物釋放的影響(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.2 NaHCO3用量對(duì)藥物釋放的影響 固定片芯處方各成分的用量，分別加入片芯處方量0%、2%、4%、6%、8%的 NaHCO3壓片、包衣，制備滲透泵控釋片，考察NaHCO3用量對(duì)藥物釋放的影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。由釋放曲線可見(jiàn)，隨著NaHCO3用量的增大，藥物12 h的累積釋放量呈明顯上升趨勢(shì)。相似因子法判定結(jié)果表明，NaHCO3用量對(duì)藥物的釋放有明顯的影響。

圖3 NaHCO3用量對(duì)藥物釋放的影響(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.3 片芯制備工藝方法對(duì)藥物釋放的影響 分別采用濕法制粒壓片和粉末直接壓片法，按照上述處方制備滲透泵控釋片，考察制片工藝方法對(duì)藥物釋放的影響，結(jié)果見(jiàn)圖4。相似因子法判定結(jié)果表明，片芯制備工藝方法對(duì)藥物的釋放有明顯的影響。由釋藥曲線圖可見(jiàn)，濕法制粒12 h藥物釋放較完全，且由于濕法制粒具有外觀美觀，流動(dòng)性好，耐磨性較強(qiáng)，壓縮成形性較好等優(yōu)點(diǎn)，因此片芯制備工藝選用濕法制粒壓片。

圖4 制片工藝對(duì)藥物釋放的影響(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.4 片芯硬度對(duì)藥物釋放的影響 按照上述片芯處方，采用濕法制粒壓片，以不同壓力分別制備硬度為2.5～3.0 kg，4.0～4.5 kg，6～6.5 kg的片芯，包衣后考察不同片芯壓力對(duì)藥物釋放的影響，結(jié)果見(jiàn)圖5。采用相似因子法進(jìn)行相似性判定，結(jié)果表明片芯硬度對(duì)藥物釋放有明顯的影響。結(jié)合藥物釋放曲線，固定片芯硬度為2.5～3.0 kg時(shí)藥物在12 h內(nèi)可以獲得較好的藥物釋放行為。

圖5 片芯硬度對(duì)藥物釋放的影響(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.5 包衣處方中DBP用量對(duì)藥物釋放的影響固定包衣液中PEG400的濃度為2%，向2%CA的丙酮溶液中加入一定量的DBP，制得DBP濃度分別為0.2%、0.4%、0.6%和0.8%的系列包衣液，包衣，考察DBP用量對(duì)藥物釋放的影響，結(jié)果見(jiàn)圖6。采用相似因子法進(jìn)行相似性判定，結(jié)果表明DBP用量對(duì)藥物釋放有明顯的影響。結(jié)合藥物釋放曲線，固定DBP濃度為0.4%時(shí)藥物釋放較完全且有良好的重現(xiàn)性。

圖6 DBP用量對(duì)藥物釋放的影響(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.6 包衣處方中PEG400用量對(duì)藥物釋放的影響 固定包衣液中DBP的濃度為0.4%，向2%CA的丙酮溶液中加入一定量的PEG400，制得PEG400濃度分別為0.4%、1%、1.5%、2%、3%的系列包衣液，包衣，考察PEG400用量對(duì)藥物釋放的影響，結(jié)果見(jiàn)圖7。相似因子法判定結(jié)果表明，包衣液中PEG400濃度對(duì)藥物的釋放有顯著的影響。由釋放曲線圖可以看出，隨著PEG400濃度的增加，藥物的釋放加快。而當(dāng)PEG400濃度達(dá)3%時(shí)藥物釋放存在一定的突釋現(xiàn)象。原因是PEG400是親水性的增塑劑(致孔劑)，隨著致孔劑含量的增多，在水溶液中瀝出后，包衣膜表面形成的微孔增多，所以藥物的釋放加快。

2.3.7 衣膜增重對(duì)藥物釋放的影響 固定片芯處方及包衣處方，以衣膜增重(以片芯增重計(jì)算)來(lái)反映包衣膜的厚度，制備衣膜增重分別為3%、5%、7%和9%的控釋片，考察衣膜增重對(duì)釋藥行為的影響，結(jié)果見(jiàn)圖8。由圖可見(jiàn)，隨著衣膜增重的增加，藥物釋放減慢。相似因子法判定結(jié)果表明，衣膜增重對(duì)藥物的釋放有比較顯著的影響。衣膜厚度的增加，降低了水分向膜內(nèi)的滲透速率，從而使藥物向膜外釋放的速率減慢。

圖7 PEG400用量對(duì)藥物釋放的影響(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

圖8 衣膜增重對(duì)藥物釋放的影響(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.4 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化處方 單因素實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)NaHCO3用量(A)、NaCl用量(B)、PEG400 用量(C)和包衣膜增重(D)等4個(gè)因素對(duì)藥物釋放的影響較為顯著，參考具體結(jié)果將此4個(gè)因素分成3個(gè)水平，根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表L9(34)安排實(shí)驗(yàn)，見(jiàn)表1。

參照2005年版《中國(guó)藥典》附錄XIX D緩釋、控釋和遲釋制劑指導(dǎo)原則，采用綜合加權(quán)評(píng)分法評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果，重點(diǎn)對(duì)以下四個(gè)指標(biāo)進(jìn)行考察:①2 h控釋片的累積釋放量(L2h)，用以考察藥物是否有突釋?zhuān)?0%為指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)為1;②6 h控釋片的累積釋放量(L6h)，用以考察釋藥特性，以60%為指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)為1;③12 h控釋片的累積釋放量(L12h)，用以考察藥物是否釋放完全，以95%為指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)為1;④ 相關(guān)系數(shù)r，用以考察藥物是否遵從零級(jí)釋藥規(guī)律，以1為指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)為2。按下式分別計(jì)算蘆丁得分(Lrutin)和柚皮素-7-O-葡萄糖苷的得分(LNaringenin-7-O-Glucoside):

表1 正交設(shè)計(jì)因素水平

L越小，表示釋藥速率越好，越接近零級(jí)釋藥規(guī)律，結(jié)果見(jiàn)表 2、3。

表2 正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

通過(guò)直觀分析，由極差值R可知，對(duì)藥物釋放產(chǎn)生影響的因素主次順序?yàn)镈＞C＞B＞A;方差分析結(jié)果表明，因素D即包衣膜增重對(duì)藥物釋放有顯著性影響。實(shí)驗(yàn)確定最終優(yōu)選處方為A3B1C3D1，即NaHCO3用量為8%;NaCl用量為30%;PEG400濃度為2%;包衣膜增重為4%。根據(jù)最佳處方制備滲透泵控釋片并進(jìn)行體外釋放度測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖9。表明該制劑在0～12 h內(nèi)體外釋放呈良好的零級(jí)釋放特征(rrutin=0.981;rNaringenin-7-O-Glucoside=0.988)。

圖9 3批樣品重現(xiàn)性考察(A.蘆丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

3 討論

微孔滲透泵片是滲透泵片的一種，它是通過(guò)向包衣膜內(nèi)加入致孔劑來(lái)改善膜的通透性，這種包衣膜表面無(wú)釋藥孔，藥物溶液通過(guò)致孔劑形成的海綿狀微孔釋放出來(lái)。因此簡(jiǎn)化了滲透泵片的制備工藝，并避免了單一釋藥孔所造成的局部藥物濃度過(guò)高所引起的負(fù)面作用?，F(xiàn)今已有以阿魏酸鈉［10］、三七總皂苷［11］等為模型藥物制備的微孔滲透泵片的相關(guān)報(bào)道。

由于質(zhì)控指標(biāo)性成分蘆丁和柚皮素-7-O-葡萄糖苷在蒸餾水中的平衡溶解度較低，難以滿(mǎn)足溶出實(shí)驗(yàn)的漏槽條件，所以本研究在處方前溶解度研究的基礎(chǔ)上選擇了0.5%SDS的水溶液作為滲透泵控釋片的釋放介質(zhì)。

滲透泵控釋片片芯內(nèi)的藥物為微溶于水的成分，預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不管是調(diào)整片芯的處方還是調(diào)節(jié)包衣處方，藥物12 h的累計(jì)釋放百分率始終達(dá)不到要求，而通過(guò)加入NaHCO3后藥物的釋放得以提高，基本符合要求?？赡苁怯捎谡渲椴颂崛∥镉行Р课怀嗜跛嵝?，加入NaHCO3后，當(dāng)水分滲透入片芯時(shí)，誘發(fā)酸性藥物與片芯內(nèi)的碳酸氫鈉發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生的二氧化碳?xì)怏w有助于藥物的充分釋放。這方面的原因還有待于進(jìn)一步研究探討。

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