張煒煜， 金 葉， 滕利榮*， 范 里

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130117;2.吉林大學(xué)，吉林長(zhǎng)春130000)

銀杏葉提取物(Ginkgo biloba Extract，GbE)是從銀杏科銀杏屬植物銀杏的干燥葉中提取純化而成的一種淡黃色粉狀物質(zhì)，具有改善心腦血管循環(huán)、保護(hù)肝臟、改善記憶、抗炎、抗過(guò)敏、提高機(jī)體免疫功能等作用，由于其療效顯著、副作用低，現(xiàn)已成為歐美及世界各地治療老年疾病的暢銷(xiāo)產(chǎn)品［1］。類(lèi)脂質(zhì)體具有類(lèi)似脂質(zhì)體封閉的雙層結(jié)構(gòu)，且不易泄漏［2］;粒徑較小的的類(lèi)脂質(zhì)體(＜150nm)，不容易被巨噬細(xì)胞吞噬，可以延長(zhǎng)在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，具有優(yōu)良的組織通透性，尤其可在有滲漏性血管組織(腫瘤、炎癥區(qū)或梗死區(qū)等)聚集;類(lèi)脂質(zhì)體不易被腎排泄，粒徑大的類(lèi)脂質(zhì)體也可在肝、脾濃集，而有被動(dòng)靶向作用［3］。為此，本試驗(yàn)采用高脂血癥模型，以血液生化指標(biāo)和血液流變學(xué)為考察指標(biāo)，研究銀杏葉提取物類(lèi)脂質(zhì)體在體內(nèi)的藥效學(xué)，并研究其體外釋放度。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters 600高效液相色譜儀(Waters2487雙通道檢測(cè)器，JS23030色譜工作站)(美國(guó)沃特斯公司)，高效液相輸液泵(LC-10ATVP)(日本島津公司)，高效液相檢測(cè)器(SPD-10AVP)(日本島津公司)，N2000色譜工作站(浙江大學(xué)智達(dá)信息工程有限公司)，BS224S電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，BT-300型血液流變儀(北京博萊特通科技有限公司)，GF-D800型全自動(dòng)生化分析儀(武漢海諾醫(yī)療器械有限公司)，5810R型冷凍離心機(jī)(德國(guó)eppendorf公司)。

1.2 試藥

銀杏葉提取物類(lèi)脂質(zhì)體(自制);乙腈為色譜純，甲醇、鹽酸、磷酸均為分析純，槲皮素對(duì)照品(批號(hào):110861-200406，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所)，山柰素對(duì)照品(批號(hào):110861-200406，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所)，異鼠李素對(duì)照品(批號(hào):110860-200406，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所)，銀杏葉片(總黃酮醇苷9.6 mg/片、萜類(lèi)內(nèi)酯2.4 mg/片)(批號(hào)080801，石家莊以嶺藥業(yè)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 GbEN凍干粉的制備方法

本文采用改良薄膜分散-勻化法進(jìn)行制備GbEN混懸液，取吐溫80、司盤(pán)80、膽固醇，加入二氯甲烷-甲醇(1∶3)的混合溶劑，使溶解，37℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)形成薄膜。將干燥的薄膜溶于60 mL乙醚中，加入10 mL藥物的溶液和PBS溶液中，超聲10 min，將超聲后的溶液中再加入20 mL PBS溶液，水合10 min，置于30℃恒溫水浴振蕩器中振蕩過(guò)夜，制成類(lèi)脂質(zhì)體混懸液;將類(lèi)脂質(zhì)體混懸液通過(guò)高壓均質(zhì)機(jī)，制備GbE類(lèi)脂質(zhì)體混懸液，加入處方量的凍干保護(hù)劑，于-80℃冰箱預(yù)凍24 h，冷凍干燥，即得。

2.2 體外釋放度的測(cè)定

2.2.1 黃酮醇苷掃描波長(zhǎng)的選擇

配制槲皮素、山柰素、異鼠李素混合對(duì)照品溶液，按紫外分光光度法(《中國(guó)藥典》2005年版附錄［4］)以甲醇為空白，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。由掃描結(jié)果可知黃酮醇苷在360 nm處有最大吸收，故選擇360 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2.2 色譜條件

色譜柱:Agilent HC-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相:乙腈 -0.4%磷酸溶液 =28∶72，流速:1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):360 nm，柱溫:40℃，進(jìn)樣量:20 μL。

2.2.3 供試品溶液的制備

取凍干后粉末，精密稱(chēng)定，加15 mL甲醇洗游離藥物，于6 000 r/min離心10 min，取上清液濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液，加甲醇-25%鹽酸(4∶1)的混合溶液10 mL，置水浴中加熱回流30 min，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.4 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱(chēng)取105℃干燥至恒重的槲皮素5.025 mg，山柰素 2.515 mg，異鼠李素 0.64 mg，加甲醇制成每1 mL含分別含槲皮素0.100 5 mg、山柰素0.050 3 mg、異鼠李素0.012 8 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密量取對(duì)照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1、1.5、2 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;各精密量取20 μL進(jìn)樣，分別以槲皮素、山柰素、異鼠李素的峰面積Y為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得槲皮素回歸方程為 Y=35 419X-9 073.2，r=0.999 9，在 2.01 μg/mL～20.1 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。得山柰素回歸方程為 Y=34 672X-2 204.1，r=0.999 9，在1.006 ～10.06 μg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。得異鼠李素回歸方程為Y=38 896X-404.38，r=0.999 9，在0.256 ～2.56 μg/mL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 精密度試驗(yàn)

2.2.6.1 日內(nèi)與日間精密度試驗(yàn)結(jié)果 日內(nèi)精密度:按“2.2.4”項(xiàng)下配制低(分別含槲皮素2.01 μg/mL，山柰素1.006 μg/mL，異鼠李素0.256 μg/mL)、中(分別含槲皮素 4.02 μg/mL，山柰素 2.012 μg/mL，異鼠李素 0.512 μg/mL)、高(分別含槲皮素6.03 μg/mL，山柰素 3.018 μg/mL，異鼠李素 0.768 μg/mL)三種不同濃度的黃酮醇苷混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，低濃度槲皮素峰面積積分平均值為64 433.199，RSD=1.2%;中濃度槲皮素峰面積積分平均值為134 352.906，RSD=1.1%;高濃度槲皮素峰面積積分平均值為202 337.203，RSD=1.3%;低濃度山柰素峰面積積分平均值為33 323.617，RSD=1.7%;中濃度山柰素峰面積積分平均值為68 032.297，RSD=1.2%;高濃度山柰素峰面積積分平均值為101 777.898，RSD=1.6%;低濃度異鼠李素峰面積積分平均值為9 774.567，RSD=1.8%;中濃度異鼠李素峰面積積分平均值為19 149.201，RSD=1.8%;高濃度異鼠李素峰面積積分平均值為29 303.000，RSD=1.7%;日內(nèi)精密度良好。

日間精密度:按“2.2.4”項(xiàng)下配制低、中、高3種不同濃度的黃酮醇苷混合對(duì)照品溶液，每天進(jìn)樣1次，連續(xù)6 d，記錄峰面積，以峰面積計(jì)算日間精密度。低濃度槲皮素峰面積積分平均值為64 279.133，RSD=1.2%;中濃度槲皮素峰面積積分平均值129 907.839，RSD=1.0%;高濃度槲皮素峰面積積分平均值為200 965.186，RSD=1.3%;低濃度山柰素峰面積積分平均值為33 194.238，RSD=1.6%;中濃度山柰素峰面積積分平均值為67 127.425，RSD=1.3%;高濃度山柰素峰面積積分平均值為101 828.553，RSD=1.9%;低濃度異鼠李素峰面積積分平均值為9 816.127，RSD=1.7%;中濃度異鼠李素峰面積積分平均值19 257.391，RSD=1.6%;高濃度異鼠李素峰面積積分平均值為28 814.725，RSD=1.6%。日間精密度良好。

2.2.6.2 中間精密度考察結(jié)果 在不同時(shí)間，不同分析人員在Waters 600和島津高效液相色譜儀檢測(cè)黃酮醇苷對(duì)照品溶液，記錄峰面積。槲皮素、山柰素、異鼠李素峰面積的RSD值分別為0.6%、0.4%、0.6%，n=9。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批供試品溶液，在室溫下放置0，2，4，6，12，24 h后分別精密吸取20 μL進(jìn)樣，測(cè)定槲皮素、山柰素、異鼠李素的峰面積，考察其穩(wěn)定性。槲皮素、山柰素、異鼠李素在24 h內(nèi)峰面積的RSD值分別為0.5%，0.5%，0.2%。結(jié)果表明槲皮素、山柰素、異鼠李素至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn)

稱(chēng)取同一批號(hào)已知含量的類(lèi)脂質(zhì)體凍干粉末0.2 g，自“2.2.3”項(xiàng)下“加甲醇-25%鹽酸……搖勻”法操作，分別加入槲皮素、山柰素、異鼠李素對(duì)照品溶液濃度分別為4.020、2.012、0.512 μg/mL 的混合溶液0.5、1、1.5 mL，按“2.2.2”項(xiàng)色譜條件下，依法測(cè)定，記錄峰面積。按公式R%=(A-B)/C×100%(A:加入對(duì)照品后測(cè)得總量，B:樣品中所含被測(cè)組分量，C:加入對(duì)照品量)計(jì)算回收率。槲皮素的低、中、高3種濃度的回收率分別為99.80%、99.93%、100.08%;山柰素的低、中、高3種濃度的回收率分別為99.40%、100.20%、99.83%;異鼠李素的低、中、高3種濃度的回收率分別為100.78%、100.78%、99.48%。

2.2.9 釋藥特性研究

采用透析法，分別考察溫度為(37±1)℃，轉(zhuǎn)速為75 r/min時(shí)，在3種不同釋放介質(zhì)磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)、醋酸緩沖液(pH=4.0)、HCl溶液(9→1 000)中黃酮醇苷的釋放情況。精密稱(chēng)取類(lèi)脂質(zhì)體凍干粉末，放入含有10 mL釋放介質(zhì)的透析袋中(分子量8 000-10 000)，將透析袋放入90 mL的釋放介質(zhì)中，分別在 10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h 取 5 mL 外液(同時(shí)補(bǔ)充等溫新鮮介質(zhì)5 mL)。外液蒸干，加甲醇-25%鹽酸(4∶1)的混合溶液20 mL，置水浴中加熱回流30 min，將回流液蒸干，加甲醇溶解，置于5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，HPLC測(cè)定槲皮素、山柰素、異鼠李素的峰面積，分別帶入槲皮素、山柰素、異鼠李素標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算槲皮素、山柰素、異鼠李素的含量，按下式換算成總黃酮醇苷的含量。

總黃酮醇苷含量=(槲皮素含量+山柰素含量+異鼠李素含量)×2.51

計(jì)算釋放的游離藥物總量，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)類(lèi)脂質(zhì)體的釋放度。結(jié)果見(jiàn)圖1。

由圖1可看出，GbEN在PBS(pH6.8)中的釋放度較好，在12 h內(nèi)累計(jì)釋放率達(dá)到80%以上，在HCl(9→1 000)和醋酸緩沖液(pH4.0)中釋放48 h其累計(jì)釋放率在20%左右。

2.3 GbEN與銀杏葉片主要藥效試驗(yàn)比較研究

2.3.1 GbEN對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的作用［5］

圖1 GbEN在PBS(pH6.8)、HCl(9→1 000)、醋酸緩沖液(pH 4.0)中的累計(jì)釋放率

從72只Wistar雄性大鼠中按體重隨機(jī)選取12只大鼠作為空白對(duì)照組，其余60只大鼠用于造高脂血癥模型。造模28 d后，全部大鼠尾靜脈采血，測(cè)血脂，并按血脂水平將高脂組大鼠隨機(jī)分為五組，分別為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組 、GbEN高劑量組、GbEN中劑量組、GbEN小劑量組、銀杏葉片組;隨機(jī)分組后，每天上午8:00～9:00，GbEN高、中、低劑量組和銀杏葉片組分別按上述劑量灌胃給予GbEN和銀杏葉片混懸液，空白對(duì)照組及模型對(duì)照組給予同體積蒸餾水，每日給藥1次，連續(xù)7 d。于每天18:00～19:00，除空白對(duì)照組大鼠外，其余大鼠給予高脂飼料，每只鼠平均20 g，白天補(bǔ)充足量的普通飼料，正常給水。空白對(duì)照組每日給予普通飼料，連續(xù)28 d。第7天給藥后1 h，大鼠以烏拉坦1 g/kg腹腔注射麻醉，腹主動(dòng)脈采血，血液用肝素抗凝，并充分混勻，不得凝血。高脂飼料的配方:1%膽固醇、0.2%6-甲基-2-硫代四氧嘧啶、0.5%膽酸鈉、2%豬油、5%黃豆、0.5%蛋清、0.5%魚(yú)粉、2%蛋黃粉、88.3%基礎(chǔ)飼料。

2.3.1.1 血液生化指標(biāo)的測(cè)定 取血2 mL，并分離血漿，用生化分析儀檢測(cè)血漿中的總膽固醇(TG)、總甘油三酯(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)后，通過(guò)TC及 HDL-C計(jì)算動(dòng)脈硬化指數(shù) AI(AI=(TCHDL-C)/HDL-C)。

2.3.1.2 對(duì)大鼠血漿TG的影響 見(jiàn)表1。

從表1可以看出，與空白組比較，模型組在給予高脂飼料后可見(jiàn)血漿TG含量明顯升高，具有顯著性差異(P＜0.001)，表明大鼠高脂血癥造模成功。與模型組相比，GbEN各劑量組在給藥7 d后可明顯降低血漿中TG含量(P＜0.001)。

2.3.1.3 對(duì)大鼠血漿TC的影響 見(jiàn)表2。

從表2可以看出，與空白組比較，模型組在給予高脂飼料后可見(jiàn)血漿TC含量極顯著升高(P＜0.001)，表明大鼠高脂血癥造模成功。與模型組相比，GbEN各劑量組在給藥7 d后可極顯著降低血漿中TG含量(P＜0.001)。

表1 對(duì)大鼠血漿TG的影響結(jié)果(±s，n=12)

表1 對(duì)大鼠血漿TG的影響結(jié)果(±s，n=12)

注:與空白組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01，***P ＜0.001;給藥前與給藥后比較，▲P＜0.05，▲▲P ＜0.01，▲▲▲P ＜0.001;與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01，△△△P＜0.001(下同)。

組別TG/(mmol/L)給藥前 給藥7 d空白組(蒸餾水)1.251±0.36 1.691±0.20模型組(蒸餾水) 5.897±1.21*** 6.411±1.48***GbEN(20 mg/kg) 5.886±0.97 3.102±0.86△△△▲▲▲GbEN(10 mg/kg) 5.949±1.14 2.813±0.89△△△▲▲▲GbEN(5 mg/kg) 5.761±0.87 2.991±0.73△△△▲▲▲銀杏葉片(5 mg/kg) 5.682±1.20 3.214±0.53△△△▲▲▲

表2 對(duì)大鼠血漿TC的影響結(jié)果(±s，n=12)

表2 對(duì)大鼠血漿TC的影響結(jié)果(±s，n=12)

組別TC/(mmol/L)給藥前 給藥7 d空白組(蒸餾水)0.695±0.24 0.719±0.11模型組(蒸餾水) 2.945±0.59*** 3.158±0.48***GbEN(20 mg/kg) 2.518±1.02 0.505±0.07△△△▲▲▲GbEN(10 mg/kg) 2.196±0.73 0.531±0.10△△△▲▲▲GbEN(5 mg/kg) 2.089±0.58 0.626±0.14△△△▲▲▲銀杏葉片(5 mg/kg) 2.142±0.64 0.759±0.16△△△▲▲▲

2.3.1.4 對(duì)大鼠血漿HDL-C的影響 見(jiàn)表3。

從表3可以看出，與空白組比較，模型組在給予高脂飼料后可顯著使血漿HDL-C含量降低(P＜0.05)。與模型組相比，GbEN各劑量組在給藥7 d后可顯著升高血漿中HDL-C含量(P＜0.01)。

表3 對(duì)大鼠血漿HDL-C的影響結(jié)果(±s，n=12)

表3 對(duì)大鼠血漿HDL-C的影響結(jié)果(±s，n=12)

組別HDL-C/(mmol/L)給藥前 給藥7 d空白組(蒸餾水)0.855±0.24 0.945±0.17模型組(蒸餾水) 0.628±0.19* 0.754±0.59 GbEN(20 mg/kg) 0.611±0.17 0.978±0.12▲▲▲GbEN(10 mg/kg) 0.620±0.11 0.805±0.13▲▲GbEN(5 mg/kg) 0.618±0.14 0.788±0.11▲▲銀杏葉片(5 mg/kg) 0.615±0.12 0.783±0.11▲▲

2.3.1.5 對(duì)大鼠血漿LDL-C的影響 見(jiàn)表4。

從表4可以看出，與空白組比較，模型組在給予高脂飼料后血漿HDL-C含量極顯著升高(P＜0.001)。與模型組相比，GbEN各劑量組在給藥7 d后可極顯著降低血清中LDL-C含量(P＜0.001)。

2.3.1.6 對(duì)大鼠血漿AI的影響 見(jiàn)表5。

從表5可以看出，與空白組比較，模型組在給予高脂飼料后可見(jiàn)血漿 AI含量極顯著升高(P＜0.001)。與模型組相比，GbEN各劑量組在給藥7 d后可極顯著降低血漿中AI含量(P＜0.001)。

表4 對(duì)大鼠血漿LDL-C的影響結(jié)果(±s，n=12)

表4 對(duì)大鼠血漿LDL-C的影響結(jié)果(±s，n=12)

組別LDL-C(mmol/L)給藥前 給藥7 d空白組(蒸餾水)0.628±0.24 0.891±0.13模型組(蒸餾水) 4.253±0.89*** 4.854±1.61***GbEN(20 mg/kg) 4.969±0.97 2.371±0.59△△△▲▲▲GbEN(10 mg/kg) 4.857±0.71 1.834±0.68△△△▲▲▲GbEN(5 mg/kg) 4.974±0.75△ 2.091±0.65△△△▲▲▲銀杏葉片(5 mg/kg) 4.623±0.84 2.563±0.58△△△▲▲▲

表5 對(duì)大鼠血漿AI的影響結(jié)果(±s，n=12)

表5 對(duì)大鼠血漿AI的影響結(jié)果(±s，n=12)

組別AI給藥前 給藥7 d空白組(蒸餾水)0.657±0.63 0.789±0.38模型組(蒸餾水) 8.369±1.52*** 5.585±1.03***GbEN(20 mg/kg) 8.104±1.18 2.184±1.11△△△▲▲▲GbEN(10 mg/kg) 7.942±1.42 2.474±1.09△△△▲▲▲GbEN(5 mg/kg) 8.115±0.99 2.539±0.58△△△▲▲▲銀杏葉片(5 mg/kg) 8.007±0.97 3.125±0.89△△△▲▲▲

2.3.1.7 對(duì)大鼠血漿LDL-C/HDL-C的影響 見(jiàn)表6。

從表6可以看出，與空白組比較，模型組在給予高脂飼料后可見(jiàn)血漿中LDL-C/HDL-C比值極顯著升高(P＜0.001)。與模型組相比，GbEN各劑量組在給藥7 d后可極顯著降低血漿中LDL-C/HDL-C比值(P＜0.001)。

表6 對(duì)大鼠血清LDL-C/HDL-C比值的影響結(jié)果(±s，n=12)

表6 對(duì)大鼠血清LDL-C/HDL-C比值的影響結(jié)果(±s，n=12)

組別LDL-C/HDL-C給藥前 給藥7 d空白組(蒸餾水)0.867±0.49 1.047±0.61模型組(蒸餾水) 6.271±1.36*** 6.299±1.90***GbEN(20 mg/kg) 8.385±2.04△△ 3.003±0.77△△△▲▲▲GbEN(10 mg/kg) 8.214±1.95△△ 2.262±0.98△△△▲▲▲GbEN(5 mg/kg) 8.149±1.26△△ 2.610±0.85△△△▲▲▲銀杏葉片(5 mg/kg) 7.903±1.43△△△ 2.771±0.86△△△▲▲▲

2.3.2 GbEN對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠全血及血漿黏度的影響

見(jiàn)表7。

取72只Wistar♂性大鼠，分組及給藥情況同上，血樣采集同上。

取經(jīng)1%肝素抗凝的全血5 mL，1 mL加入血液流變儀中測(cè)定不同切變率(3 s-1、30 s-1、100 s-1、180 s-1)下的黏度。其余4 mL，于2 000 r/min離心10 min，取上層血漿，測(cè)血漿黏度。從表13可以看出，與空白組比較，模型組的血漿黏度和全血在3 s-1、30 s-1、100 s-1、180 s-1切變下均極顯著升高(P＜0.001)，表明大鼠高脂血癥造模后血液黏滯性增高。與模型組比較，GbEN各劑量組在給藥7 d后，可極顯著降低 30 s-1、100 s-1、180 s-1切變黏度及降低血漿黏度(P＜0.001)。

表7 對(duì)大鼠全血及血漿黏度的影響結(jié)果(±s，n=12)

表7 對(duì)大鼠全血及血漿黏度的影響結(jié)果(±s，n=12)

組別 全血黏度/(mPa·s)3 s-1 30 s-1 100 s-1 180 s -1血漿黏度/(mPa·s)空白組 10.138±1.61 4.683±0.98 3.730±0.75 3.145±0.31 1.500±0.43模型組 23.579±1.98*** 8.509±1.69*** 6.273±0.97*** 5.589±0.61*** 1.601±0.29 GbEN組20 mg/kg 11.891±0.66△△△ 5.155±0.58△△△ 4.110±0.55△△△ 3.743±0.42△△△ 1.294±0.14△△10 mg/kg 13.464±1.28△△△ 5.600±0.39△△△ 4.956±0.94△△ 4.318±0.79△△△ 1.308±0.14△△5 mg/kg 16.368±2.11△△△ 5.850±0.68△△△ 4.992±0.82△△ 4.244±0.67△△△ 1.300±0.23△銀杏葉片組5 mg/kg 12.349±1.56△△△ 5.910±0.98△△△ 5.150±0.85△△ 4.343±0.52△△△ 1.276±0.20△△

3 小結(jié)與討論

3.1 目前常用的測(cè)定類(lèi)脂質(zhì)體釋放度的方法有溶出度測(cè)定法及透析法。本試驗(yàn)曾經(jīng)嘗試用溶出度測(cè)定法，但此法需要類(lèi)脂質(zhì)體量大，且粒徑小的類(lèi)脂質(zhì)體易混合于游離藥物，測(cè)定不準(zhǔn)確。故采用透析-HPLC法，利用透析膜根據(jù)分子量大小不同對(duì)不同分子截留的原理，能將分子量大的類(lèi)脂質(zhì)體及其載體完全截留，而小分子藥物可以透過(guò)。此法操作簡(jiǎn)單，且重現(xiàn)性好。

3.2 本試驗(yàn)通過(guò)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠模型，考察了GbEN對(duì)血脂代謝及對(duì)全血黏度和血漿黏度的影響。證明GbEN和銀杏葉片均可改善高脂血大鼠的血脂代謝紊亂，提高血漿HDL-C含量，降低TC、TG、LDL-C含量、AI及LDL-C/HDL-C的比值。并可以降低高脂血大鼠的全血及血漿黏度。

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