朱坤杰， 宋 娟， 沈云虹， 邢煥煥， 王 潔

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161006)

蘆薈多糖(Aloe polysaccharide，AP)是蘆薈凝膠部分除去水分以外的主要成分，在新鮮的凝膠中含量約為0.27%～0.5%，AP作為藥用品種蘆薈的主要活性物質(zhì)之一，已經(jīng)受到人們的高度重視。研究證明，AP具有殺菌、消炎、抗輻射、抗艾滋病病毒、抗腫瘤和調(diào)節(jié)免疫［1］等多種藥理作用，其中它的抗腫瘤作用更是備受關(guān)注。以往進(jìn)行的觀察主要以粗多糖(純度約為30% ～50%)為基礎(chǔ)。本實驗主要對純度約為88%和75.6%的木立蘆薈多糖和庫拉索蘆薈多糖的體內(nèi)抗腫瘤作用做了進(jìn)一步的觀察。

1 實驗材料

1.1 動物 昆明種小鼠80只，♀♂兼用，由黑龍江省腫瘤研究所提供，動物合格證號:醫(yī)動字9-3-2。

1.2 藥品 純度75.6%庫拉索蘆薈多糖及88.0%木立蘆薈多糖，由中科院上海藥物研究所提供。S180、H22荷瘤小鼠均購于黑龍江省腫瘤研究所;5-Fu上海旭東海普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號:200211。

1.3 儀器 血球計數(shù)板，上海市求精生化儀器廠生產(chǎn)，電子天平。

2 實驗方法

2.1 蘆薈多糖對S180小鼠的腫瘤抑制率 將傳代8～10 d健康狀況良好的S180荷瘤小鼠脫頸處死，酒精浸泡消毒，無菌狀態(tài)下取出腹水，并用無菌生理鹽水按一定的比例稀釋成瘤細(xì)胞懸液(瘤細(xì)胞含量約為2×107/mL)。取純系昆明種小鼠80只，每只小鼠右腋窩皮下接種0.2 mL，接種24 h后，隨機(jī)分成8組，每組10只:1組為生理鹽水對照組;2組為5氟尿嘧啶陽性對照組(15 mg/kg·d);3、4、5組為木立蘆薈多糖高、中、低劑量組(100 mg/kg·d，50 mg/kg·d，25 mg/kg·d);6、7、8組為庫拉索蘆薈多糖高、中、低劑量組，給藥劑量和木立蘆薈多糖相同。于腫瘤接種后24 h灌胃給藥，給藥容量0.2 mL/10 g，療程10 d。另設(shè)空白對照組(10只)同步灌胃同容量的生理鹽水。停藥后24 h稱量小鼠體重，然后脫頸處死小鼠，剖取瘤體、脾臟、胸腺，稱取其重量，計算抑瘤率、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)。

腫瘤抑制率=1-實驗組平均瘤重/對照組平均瘤重［2］

免疫器官指數(shù)=免疫器官重量(mg)/小鼠體重(g)

我們同時觀察了不同藥物對小鼠荷瘤期間體重的影響。以給藥結(jié)束后同給藥前小鼠體重的差值進(jìn)行組間比較，觀察抗腫瘤治療期間小鼠體重的變化。

2.2 兩種蘆薈多糖對H22荷瘤小鼠生存期的影響 無菌條件下抽取傳代7 d的H22荷瘤小鼠腹水，無菌生理鹽水溶液按一定比例稀釋成瘤細(xì)胞懸液(瘤細(xì)胞含量約為2×107/mL)。取純系昆明種小鼠80只，每鼠腹腔接種H22瘤細(xì)胞懸液0.2 mL。分組及給藥途徑同前，連續(xù)給藥14 d，然后繼續(xù)觀察30 d，記錄小鼠的生存時間，計算生命延長率。生命延長率(%)=(用藥組平均生存天數(shù)-對照組平均生存天數(shù))/對照組平均生成天數(shù)×100%。

3 結(jié)果

3.1 蘆薈多糖對S180荷瘤小鼠的腫瘤抑制率 不同劑量的庫拉索蘆薈多糖及木立蘆薈多糖對S180荷瘤小鼠腫瘤生長的抑制作用見表1。對荷瘤小鼠體重及胸腺和脾指數(shù)的影響見表2。

由表1可知，低劑量的木立蘆薈和庫拉索蘆薈多糖對S180荷瘤小鼠體內(nèi)的腫瘤生長具有明顯的抑制作用，其腫瘤抑制率和5-FU相似，但兩種多糖的中高劑量組的腫瘤抑制作用不明顯。可見，兩種蘆薈多糖在25 mg/kg時發(fā)揮較好的抗腫瘤作用，抑瘤率為40%以上，隨著劑量的增加，抑瘤作用并不增強(qiáng)。

表1 不同劑量的兩種蘆薈多糖對S180荷瘤小鼠的體內(nèi)抑瘤作用

表2 不同劑量的兩種蘆薈多糖對荷瘤小鼠體重及胸腺和脾指數(shù)的影響

從動物給藥期間體重的變化可見，同空白組比較，荷瘤組小鼠體重明顯增加，化療藥物5-FU可明顯降低荷瘤小鼠的體重，使小鼠體重呈負(fù)增長狀態(tài)。而不同劑量兩種蘆薈多糖對荷瘤小鼠體重的影響與5-FU有明顯差異。其中低劑量組小鼠體重變化和空白組相似?？梢?，兩種蘆薈多糖在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時對荷瘤機(jī)體的生長無明顯影響。

荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)有增加的趨勢，但脾指數(shù)顯著降低。5-FU可顯著降低荷瘤小鼠胸腺和脾臟的重量，使胸腺指數(shù)和脾指數(shù)明顯降低。兩種蘆薈多糖可降低荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)，但增加荷瘤小鼠的脾指數(shù)，和5-FU組比較具有顯著差異，特別是低劑量的庫拉索蘆薈多糖組，增加脾指數(shù)的作用更明顯，和模型組比較差異顯著，P＜0.05。

3.2 蘆薈多糖對H22荷瘤小鼠生存期的影響 兩種蘆薈多糖對H22荷瘤小鼠生存期影響的測定結(jié)果見表3。

從表3可見，兩種蘆薈多糖均可不同程度地延長H22腹水瘤小鼠的生存時間，以中、低劑量的作用較好，小鼠生命延長率達(dá)45%以上。高劑量組作用不明顯。

表3 兩種蘆薈多糖對H22荷瘤小鼠生存時間的影響

4 討論

我們的實驗結(jié)果顯示，化療藥物5-FU對S180荷瘤小鼠的腫瘤抑制率和生命延長率分別為49%和59.4%。低劑量(25 mg/kg·d)的兩種蘆薈多糖也顯示較好的體內(nèi)抗腫瘤作用，腫瘤抑制率為40%以上，中、低劑量的兩種蘆薈多糖對荷瘤小鼠的生命延長率為45%以上，且兩種蘆薈多糖的抗腫瘤作用無明顯差異，和文獻(xiàn)報道相似，不同的是，已有文獻(xiàn)報道的有效劑量多為100 mg/kg·d［3］。實驗還發(fā)現(xiàn)，模型組小鼠體重顯著增加，5-FU可使荷瘤小鼠體重明顯降低，可見5-FU在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時可能影響機(jī)體的生長從而給機(jī)體造成損傷。蘆薈多糖發(fā)揮明顯抗腫瘤作用的同時，對小鼠體重影響不明顯，蘆薈多糖給藥組小鼠體重變化和空白組小鼠的變化相似。提示兩種蘆薈多糖抗腫瘤作用的同時，對機(jī)體的生長影響較小，對機(jī)體的損傷小，或優(yōu)于5-FU。

對荷瘤小鼠免疫器官重量的檢測結(jié)果顯示，荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)有增加的趨勢，但脾指數(shù)顯著降低，提示荷瘤小鼠的免疫功能可能出現(xiàn)紊亂。5-FU可顯著降低荷瘤小鼠胸腺和脾臟的重量，使胸腺指數(shù)和脾指數(shù)明顯降低，加重荷瘤機(jī)體的免疫損傷。而兩種蘆薈多糖可降低荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)，增加荷瘤小鼠的脾指數(shù)，逆轉(zhuǎn)荷瘤小鼠的免疫器官指數(shù)的改變，和5-FU組比較具有顯著差異。提示改善荷瘤機(jī)體免疫功能紊亂可能是蘆薈多糖抗腫瘤作用的重要機(jī)制。

本次實驗提示，75.6%和88%的庫拉索蘆薈多糖和木立蘆薈多糖有效抗腫瘤劑量較以往文獻(xiàn)報道的劑量明顯降低，可能與多糖的純度提高有關(guān)。此外，蘆薈多糖對免疫系統(tǒng)的作用不能簡單地用增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能來描述，因為兩者均可抑制荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)的增加，這一結(jié)果和已有的研究結(jié)果不同［3］;低劑量庫拉索蘆薈多糖則可明顯增加荷瘤小鼠脾指數(shù)，其他各給藥組也表現(xiàn)一定的增加趨勢。因此，推測恢復(fù)荷瘤機(jī)體的免疫功能紊亂可能是其發(fā)揮抗腫瘤作用機(jī)制的一個重要方面，特別是兩者對脾臟功能的影響可能是其發(fā)揮抗腫瘤作用的主要免疫機(jī)制，相關(guān)進(jìn)一步的研究觀察工作正在進(jìn)行。

［1］Antoni F，Emma S.Sanchez S S.Compositional features of polysaccharides from Aloe Vera(Aloe barbadensis Miller)plant tissues［J］.Carbohydrate Polymers，1999，39:109-117.

［2］徐淑云，卞如濂，陳 修.藥理實驗方法學(xué)［M］.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1991.

［3］鄒 翔，汲晨鋒，高世勇，等.3種蘆薈多糖抗腫瘤作用的比較分析［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，2004，20(1):14-17.