王常禹， 單寅鑫

(1.黑龍江省食品藥品檢驗(yàn)檢測所，黑龍江 哈爾濱150001;2.黑龍江畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱150111)

隨著我國人民生活水平的提高，食品及藥品的安全性問題越來越受到人們的關(guān)心與重視。2010年版《中國藥典》一部及二部均增加了藥品安全性指標(biāo)的檢測。為適應(yīng)市場需要，保證人民用藥安全，對中藥，尤其是含有礦物藥的中成藥，應(yīng)盡快建立重金屬及有害元素的殘留檢測方法及合理的限量標(biāo)準(zhǔn)。

骨折挫傷膠囊是由豬骨、黃瓜子(炒黃)、土鱉蟲、自然銅(煅)、乳香(制)、沒藥(制)、血竭、紅花、大黃和當(dāng)歸制成的中藥復(fù)方制劑，具有舒筋活絡(luò)，接骨止痛的功效，用于治療跌打損傷，消腫散瘀，扭腰岔氣等癥，被譽(yù)為“跌打損傷之良藥”。由于該藥品除豬骨制膠，黃瓜子去油外，其余各味藥材均為原粉入藥，且處方中含有礦物藥自然銅，為控制重金屬及有害元素的含量，保證患者用藥安全、有效，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)骨折挫傷膠囊的用藥特點(diǎn)，分別模擬人工胃液及1%鹽酸超聲提取酸可溶性重金屬及有害元素作為毒性指標(biāo)［1］，參考《中國藥典》2005 年版［2］一部附錄“鉛、鎘、砷、汞、銅檢查法”測定骨折挫傷膠囊中鉛、鎘、砷、汞、銅。結(jié)果發(fā)現(xiàn)人工胃液與1%鹽酸提取之間測定的結(jié)果差異很小，而1%鹽酸操作更為簡便，因此，選擇以1%鹽酸作為提取溶媒，測定骨折挫傷膠囊中酸可溶性重金屬及有害元素。

1 儀器與試劑

原子吸收光譜儀:MARS型微波消解/萃取系統(tǒng)(美國CEM公司);HVG-1型氫化物發(fā)生器及AA-6800型原子吸收分光光度計(jì)(日本島津公司);控溫電熱板:DKQ-4型(上海);標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):鉛、鎘、砷、汞、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心;試劑:硝酸及鹽酸為優(yōu)級純、其它試劑為分析純;實(shí)驗(yàn)用水均為高純水。樣品:遠(yuǎn)大藥業(yè)集團(tuán)哈爾濱中藥六廠有限公司;黑龍江烏蘇里江制藥有限公司哈爾濱分公司;哈藥集團(tuán)中藥三廠;哈高科佳木斯中藥有限公司。

2 方法和結(jié)果

2.1 樣品制備方法 取本品內(nèi)容物約0.5 g，精密稱定，加1%鹽酸5 mL，超聲1 h，過濾至聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，殘?jiān)?%鹽酸5 mL分3次洗滌，合并濾液，置控溫電熱板上，110℃加熱揮至約1～2 mL，加硝酸5 mL，浸過夜，密閉，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置微波消解爐內(nèi)，進(jìn)行消解，第1步溫度120℃，保持1 min，第2步溫度160℃，保持1 min，第3步溫度180℃，保持15 min。消解完全后，放冷，取消解內(nèi)罐于電熱板上緩緩加熱至120℃揮酸，放冷，殘?jiān)铀芙獠⒍ㄈ葜?5 mL，作為供試品溶液(直接測定鉛、鎘、銅)。同時制備空白對照溶液。精密吸取供試品溶液及空白對照溶液各10 mL，分別加25%碘化鉀1 mL，10%抗壞血酸1 mL，搖勻，加鹽酸(20→100)定容至25 mL，80℃水浴加熱3 min，放冷，作為砷的測定溶液。消解揮酸后樣品溶液及空白溶液分別加4%硫酸約至7 mL，加5%高錳酸鉀0.5 mL，滴加5%鹽酸羥胺至紫紅色恰消失，加4%硫酸定容至10 mL，作為汞的測定溶液。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法 鉛、鎘采用石墨爐原子吸收法，砷采用氫化物-原子吸收法，汞采用冷蒸汽-原子吸收法，銅測定采用火焰原子吸收法。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.3.1 鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液 取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)1.0 mL，加 2% 硝酸定容至 100 mL(1 μg/mL)。取0、0.5、2.0、4.0、6.0、8.0 mL，加 2% 硝酸定容至100 mL。測定。

2.3.2 鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液 取鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 μg/mL)4.0 mL，加 2%硝酸定容至 100 mL(40 μg/mL)取1.0 mL，加2%硝酸定容至100 mL(400 ng/mL)。取0、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，加 2% 硝酸定容至100 mL。測定。

2.3.3 砷標(biāo)準(zhǔn)溶液 取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)1.0 mL，加 2% 硝酸定容至 100 mL(1 μg/mL)。取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，加 2% 硝酸定容至100 mL。精密吸取10 mL，加25%碘化鉀1 mL，10%抗壞血酸1 mL，搖勻，加鹽酸(20→100)定容至25 mL，80℃水浴加熱3 min，放冷，測定。

2.3.4 汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)1.0 mL，加 2% 硝酸定容至 100 mL(1 μg/mL)。取0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mL，加 4% 硫酸約至40 mL，加5%高錳酸鉀0.5 mL，滴加5%鹽酸羥胺至紫紅色恰消失，加4%硫酸定容至50 mL。

2.3.5 銅標(biāo)準(zhǔn)溶液 取銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL)5.0 mL，加 2% 硝酸定容至 50 mL(10 μg/mL)取 0、0.25、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，加 2%硝酸定容至50 mL。測定。

以吸光度(A)為縱坐標(biāo)、濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果線性關(guān)系良好，見表1。

表1 回歸方程

2.4 檢出限 將空白溶液連續(xù)測定11次，計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率(靈敏度)，得出儀器檢出限=3標(biāo)準(zhǔn)偏差/靈敏度。結(jié)果鉛、鎘、砷、汞、銅儀器檢出限分別為0.002 1、0.000 04、0.000 2、0.000 1、0.004 9 μg/mL。按取樣 0.5 g 計(jì)算，則樣品中鉛、鎘、砷、汞、銅檢出限分別為 0.104 4、0.002 0、0.028 2、0.001 4、0.243 1 μg/g。

2.5 精密度試驗(yàn) 分別取鉛、鎘、砷、汞、銅的同一標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)測定11次，方法條件同上，計(jì)算鉛RSD為 1.21%，鎘 RSD為 0.92%，砷 RSD為0.96%，汞RSD為1.56%，銅RSD為1.92%。表明儀器的精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號為080501001的骨折挫傷膠囊，按上述方法平行制備5份樣品測定，計(jì)算RSD。結(jié)果鉛RSD為2.45%，鎘RSD為3.44%，砷RSD為 5.61%，汞 RSD為 4.21%，銅 RSD為2.35%。表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 回收率試驗(yàn) 取批號為080501001的骨折挫傷膠囊做加樣回收率試驗(yàn)。精密稱取本品約0.25 g，共5份，分別精密加入鉛標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 μg/mL)1.0 mL，鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.4 μg/mL)0.25 mL，砷標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 μg/mL)0.5 mL，汞標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.0 μg/mL)0.1 mL，銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(10 μg/mL)1.0 mL 按樣品制備方法對樣品進(jìn)行處理，測定，測得回收率結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(yàn)

2.8 樣品測定 取骨折挫傷膠囊，按樣品制備方法及上述儀器分析參數(shù)進(jìn)行測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1 之前，筆者曾采用原子熒光光譜法僅對骨折挫傷膠囊中酸可溶性砷進(jìn)行了測定［3］，方法可行。為更有效地控制該藥品中重金屬及有害元素，本實(shí)驗(yàn)采用原子吸收光譜法分別測定骨折挫傷膠囊中酸可溶性鉛、砷、鎘、汞和銅。方法有良好的檢出限、精密度及回收率，方法準(zhǔn)確可靠，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好。

3.2 骨折挫傷膠囊為中成藥，成分復(fù)雜，且含有礦物藥自然銅。其中含有的金屬元素可能對重金屬及有害元素的痕量分析測定造成干擾［4-5］。本實(shí)驗(yàn)采用1%鹽酸超聲提取骨折挫傷膠囊中的酸可溶性重金屬及有害元素，是模擬口服狀態(tài)下的中成藥，測定其中可能被人體吸收的酸可溶性重金屬及有害元素。從方法學(xué)考察結(jié)果看基本可行，對含有礦物藥的中成藥中的重金屬及有害元素的測定有一定的參考意義。但尚需收集更多的口服中成藥測定數(shù)據(jù)。

3.3 WHO(世界衛(wèi)生組織)和FAO(糧農(nóng)組織)下屬的食品添加劑與污染物專業(yè)委員會JECFA提供的安全限量為每日允許攝入限量(ADI)(按平均體重60kg計(jì)):Pb0.214 mg/(人·d)，Cd0.06 mg/(人·d)，As0.128 mg/(人·d)，Hg0.013 7 mg/(人·d)，Cu30 mg/(人·d)。根據(jù)骨折挫傷膠囊的用法用量(每粒裝0.29 g;1次4～6粒，1日3次)，計(jì)算每人每日的最高攝入量。結(jié)果4個生產(chǎn)企業(yè)的13批樣品中有些批次的鉛及銅超出每人每日的最高攝入量，鎘、砷及汞均符合JECFA及FDA安全限量規(guī)定。

［1］季 申.中藥中重金屬和有害元素質(zhì)控方法的研究［C］∥藥品質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)，第三屆中美藥典高層論壇，2008.

［2］中國藥典［S］.一部.2005.

［3］王常禹，張麗英.微波消解-原子熒光光譜法測定骨折挫傷膠囊中砷的含量［J］.中南藥學(xué)，2009，7(8):598-600.

［4］任 睿，羅卓雅，金宏宇.三種中成藥中鉛鎘砷汞殘留量測定方法研究［J］.中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006，7(6):27-29.

［5］曹小勇，李新生，馮曉東.原子吸收法測定3種中成藥中銅鉛砷汞的含量［J］.中成藥，2004，26(5):附9.