張宇思,龔祝南,石雪萍
(1.南京師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,江蘇南京 210046;南京野生植物綜合利用研究院,江蘇南京 210042)
銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物 (Ginkgo biloba)銀杏樹(shù)的葉,根據(jù)現(xiàn)有科學(xué)報(bào)道,銀杏葉中含有藥用有效成分達(dá) 170多種,其中黃酮類約有 40余種,按化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為 3類,即單黃酮類 32種,雙黃酮類 6種,兒茶素類 4種[1-5]。國(guó)內(nèi)外對(duì)銀杏的化學(xué)成分、藥理作用已進(jìn)行了廣泛的研究,現(xiàn)已報(bào)道銀杏葉有抗氧化作用、促智功能、抗焦慮作用及鎮(zhèn)靜作用、調(diào)節(jié)血脂功能、抑制血小板的功能、擴(kuò)張腦血管防止血拴形成、參與腎上腺皮質(zhì)類固醇的調(diào)節(jié),對(duì)腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用,對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用等。國(guó)內(nèi)對(duì)銀杏葉的研究和開(kāi)發(fā)亦已做了大量的工作,以銀杏葉為原料的藥物和保健食品等已經(jīng)上市[6-10]。我院對(duì)銀杏葉食用毒理學(xué)安全性也有了全面評(píng)價(jià)的報(bào)道[11]。本文旨在就銀杏葉對(duì)調(diào)節(jié)血脂作用進(jìn)行探討。為銀杏葉在預(yù)防高脂蛋白血癥和心血管疾病方面提供科學(xué)的依據(jù)。
1.1.1 樣品
南京野生植物綜合利用研究院提供銀杏葉樣品,鑒定種為 Ginkgo biloba。
高脂飼料:按衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司頒布的《保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序和檢驗(yàn)方法》中的方法配制,基礎(chǔ)飼料 93.8%、膽固醇 1%、豬油 5%、膽鹽0.2%。
1.1.2 主要儀器
電子天平 (SL-1001型,上海民橋電子儀器廠)、分光光度計(jì) (722型,上海第三分析儀器廠)。
1.1.3 試驗(yàn)動(dòng)物
昆明雄性 SD大鼠,由南京江寧青龍動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供。生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(蘇)2001-0010:使用許可證號(hào):SYXK(蘇)2001-0017。
1.2.1 樣品處理
銀杏葉粉狀樣品 20 g,常壓下,在溫度 80~90℃的蒸餾水中浸泡 50 min,每次浸泡的蒸餾水量為 400 mL,浸泡 2次,合并浸泡液并濃縮至150 mL,備用,用于動(dòng)物灌胃。
1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
將健康成年昆明雄性 SD大鼠 50只,平衡喂養(yǎng)5 d后,取尾血,測(cè)定血清總膽固醇 (TCH)、血清甘油三酯(TG)和血清高密度脂蛋白膽固醇 (HDLCH)。篩選出體重為 150~200 g的 40只進(jìn)行分組,按 TCH值隨機(jī)分為 4組,每組 10只。設(shè)高脂對(duì)照組,低劑量組,中劑量組和高劑量組。
1.2.3 高脂血癥大鼠造型及給藥
從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始到結(jié)束,高脂對(duì)照組用蒸餾水灌胃;銀杏葉茶低劑量組,用上述浸泡濃縮液稀釋 4倍灌胃,相當(dāng)于 0.33 g/kg·bw/d;銀杏葉中劑量組,用上述浸泡濃縮液稀釋 2倍灌胃,相當(dāng)于 0.67 g/kg·bw/d;銀杏葉高劑量組,用上述浸泡濃縮液灌胃,相當(dāng)于1.33/kg·bw/d。灌胃體積為 2.0 mL/200 g·bw,每日一次,動(dòng)物單籠飼養(yǎng),自由攝取高脂飼料。連續(xù)灌胃30 d后,取尾血,測(cè)定血清 TCH、血清 TG和血清HDL-CH。[12-13]
1.2.4 檢測(cè)方法
血清 TCH、TG、HDL-CH采用酶法測(cè)定,試驗(yàn)前測(cè)定使用由上海榮盛生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測(cè)定,批號(hào)為 20020228。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)使用日立 -7150全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行測(cè)定。
1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理方法[12]
采用 SAS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析,用Dunnett’s T檢驗(yàn)進(jìn)行各試驗(yàn)組與對(duì)照組的比較。
銀杏葉對(duì)各組動(dòng)物血清中 TCH的影響見(jiàn)表1。
表1 銀杏葉對(duì)大鼠血清 TCH的影響(mmol/L)
如表1所示,試驗(yàn)前各組動(dòng)物血清 TCH的檢測(cè)值無(wú)顯著性差異,試驗(yàn)后各組動(dòng)物血清 TCH水平差異有非常顯著意義。經(jīng) Dunnet’s T檢驗(yàn),銀杏葉中劑量組和高劑量組血清 TCH水平與高脂對(duì)照組的差異有顯著性 (P<0.05)。說(shuō)明銀杏葉在 0.67 g/kg·bw/d和 1.33 g/kg·bw/d的劑量時(shí) ,具有降低實(shí)驗(yàn)大鼠血清 TCH的作用。
銀杏葉對(duì)各組動(dòng)物血清中 TG的影響見(jiàn)表2。
表2 銀杏葉對(duì)大鼠血清 TG的影響 (mmol/L)
如表2示,試驗(yàn)前各組動(dòng)物血清 TG的檢測(cè)值無(wú)顯著性差異,試驗(yàn)后各組動(dòng)物血清 TG水平差異有顯著意義。經(jīng) Dunnett’s T檢驗(yàn),銀杏葉高劑量組血清 TG水平與高脂對(duì)照組的差異有顯著性 (P<0.05)。說(shuō)明銀杏葉在 1.33 g/kg·bw/d的劑量時(shí),具有降低實(shí)驗(yàn)大鼠血清 TG的作用。
從表2和表3可以看出,高脂對(duì)照組動(dòng)物試驗(yàn)后血清 TCH和 TG水平顯著高于試驗(yàn)前的水平 (t檢驗(yàn),P<0.05),說(shuō)明本次試驗(yàn)高脂模型是成立的。
銀杏葉對(duì)各組動(dòng)物血清中 HDL-CH的影響見(jiàn)表3。
表3 銀杏葉對(duì)大鼠血清 HDL-CH影響
如表3示,試驗(yàn)前各組動(dòng)物血清 HDL-CH的檢測(cè)值無(wú)顯著性差異,試驗(yàn)后各組動(dòng)物血清 HDLCH水平差異有顯著意義。經(jīng) Dunnett’s T檢驗(yàn),銀杏葉中劑量組和高劑量組血清 HDL-CH水平與高脂對(duì)照組的差異有顯著性 (P<0.05)。說(shuō)明銀杏葉在 0.67 g/kg·bw/d和 1.33 g/kg·bw/d的劑量時(shí) ,具有升高實(shí)驗(yàn)大鼠血清 HDL-CH的作用。
在 0.67、1.33 g/kg·bw/d劑量條件下 ,銀杏葉可有效降低高脂血癥大鼠血清 TCH,升高高脂血癥大鼠 HDL-CH水平。劑量 1.33 g/kg·bw/d劑量下,能夠降低大鼠血清 TG的含量。因此,銀杏葉茶在一定劑量條件下具有較好地調(diào)節(jié)高血脂動(dòng)物的血脂的功能。銀杏葉是純天然制劑,它不僅可以降低血清總膽固醇、甘油三酯,升高高密度脂蛋白含量,而且安全可靠,無(wú)毒副作用。對(duì)于防治老年人動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病有著重要意義。我國(guó)是銀杏的發(fā)源地,其資源占世界總量的 70%左右,因此,銀杏葉的開(kāi)發(fā)具有廣闊的市場(chǎng)前景,本研究為銀杏葉資源的合理利用以及功能保健茶的開(kāi)發(fā)提供了較好的理論依據(jù)。
[1] 鄧永強(qiáng),赫 慧,王 宏,等.銀杏葉及其提取物藥理作用研究進(jìn)展[J].藥物流行病學(xué)雜志,2004,13(1):10-14.
[2] Chen X,Chen W Z.Recent phremaeolgoieal progress of Ginkgo biloba extract for cardiovascular and neuronal disease[J].Chin Jlnteg Trad West Med,1996(2):300-302.
[3] Barkats M,Venault P,Christen Y,et a1.Effect of Longterm treatment with EGB761 on aeg-dependent structural changes in the hippocampi of three inbred mouse strains[J].Life Sci,1994,56(4):213-215.
[4] Satyan K S,Jaiswal A K,Ghosal S,et a1.Anxiolytic activity of ginkgolic acid conjugates fromIndina Ginkgo biloba[J].Psychophar maeology,1998,136(2):148-152.
[5] 周月蟬,胡怡秀,藏雪冰,等.銀杏茶調(diào)節(jié)血脂和抗氧化作用實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2000,7(2):135-136.
[6] 沈連忠,崔燕英,王淑仙,等.銀杏葉提取物血液流變學(xué)研究[J].中國(guó)中藥雜志,1998,23(10):622-623.
[7] 謝人明,湯臣康,馬樹(shù)德,等.銀杏葉注射液對(duì)動(dòng)物循環(huán)作用的研究[J].中草藥,1986,17(8):23-24.
[8] 丁勤學(xué).銀杏葉對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用及其分子機(jī)理[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊(cè)),1998,21(1):6-7.
[9] 周蘭蘭,明 亮,江 勤,等.銀杏葉提取物對(duì)反復(fù)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2000,20(5):356-357.
[10] 廖 璞,王淑琴,廖血松,等.銀杏葉提取物對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)藥房,2000,11(3):114-115.
[11] 張衛(wèi)明,顧龔平,史勁松.銀杏葉食用安全性的毒理學(xué)評(píng)價(jià)[J].南京師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2005,28(1):28-30.
[12] 明道續(xù).生物統(tǒng)計(jì)附試驗(yàn)設(shè)計(jì)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2002:67-89.