姚麗佳，冉海琳

（重慶市藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121）

反相高效液相色譜法測(cè)定防風(fēng)通圣丸中黃芩苷含量

姚麗佳，冉海琳

（重慶市藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121）

目的建立防風(fēng)通圣丸中黃芩苷的含量測(cè)定方法。方法采用反相高效液相色譜法，以Kromacil C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5!m）為色譜柱，以甲醇－水－磷酸(45∶55∶0.2)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為315 nm，柱溫為30℃。結(jié)果黃芩苷進(jìn)樣量在0.030 66～0.490 6!g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r=0.999 97(n=8)，平均加樣回收率為99.11%，RSD為1.10%（n=6）。結(jié)論該方法靈敏、簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于防風(fēng)通圣丸的質(zhì)量控制。

防風(fēng)通圣丸；黃芩苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

防風(fēng)通圣丸由防風(fēng)、梔子、當(dāng)歸、川芎、白芍等17味藥物組方，具有解表通里、清熱解毒功效，用于治療外寒內(nèi)熱、表里俱實(shí)、惡寒壯熱、頭痛咽干、小便短赤、大便秘結(jié)、瘰癘初起、風(fēng)疹濕瘡等證。筆者采用反相高效液相色譜（RP－HPLC）法對(duì)防風(fēng)通圣丸中黃芩苷的含量進(jìn)行了測(cè)定[1]，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，2487型紫外檢測(cè)器。黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0844－200003，供含量測(cè)定用）；防風(fēng)通圣丸（太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠）；甲醇為色譜純?cè)噭溆嘣噭┚鶠榉治黾?，水為去離子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromacil C18不銹鋼柱（250 mm ×4.6 mm,5!m）；流動(dòng)相：甲醇 －水 －磷酸(45 ∶55 ∶0.2)；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：315 nm；進(jìn)樣量：10!L。理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2 500。

2.2 溶液制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含15!g的溶液，即得對(duì)照品溶液。取重量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，混勻，取約0.2 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，精密加入70%乙醇適量，超聲

處理30 min，放冷，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。按處方比例及工藝制備不含黃芩的樣品適量，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各10!L，注入液相色譜儀，測(cè)定。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜圖中在黃芩苷峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無(wú)干擾峰出現(xiàn)。色譜圖見圖1。

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0.030 66 mg/mL）1，2，4，6，8，10，12，16!L，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進(jìn)樣量 C為橫坐標(biāo)、峰面積 A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=3 030.422 C － 12.639，r=0.999 97（n=8）。結(jié)果表明黃芩苷進(jìn)樣量在0.03066～0.4906!g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果平均峰面積的 RSD=0.39%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于常溫條件放置0，1，2，4 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD=0.5%（n=4），表明供試品溶液至少在4 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品(批號(hào)為77050001)，平行制備5份供試品溶液，測(cè)定黃芩苷的含量。結(jié)果的 RSD為1.0%（n=5），表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品(批號(hào)為77050001，含量3.45 mg/g)粉末約0.1 g，共6份，分別置50 mL量瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為0.038 9 mg/mL)10 mL，同供試品溶液的制備方法制備，依法測(cè)定含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10!L，分別注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果3批樣品（批號(hào)為77050001，77050002，77050003）含量分別為 3.45，3.62，3.56 mg/g。

3 討論

防風(fēng)通圣丸收載于2005年版《中國(guó)藥典（一部）》，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有防風(fēng)、荊芥穗、連翹等藥物的顯微鑒別及大黃的薄層色譜鑒別，無(wú)含量測(cè)定方法。該方中黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒等作用，為方中主藥之一。2005年版《中國(guó)藥典（一部）》對(duì)黃芩藥材選用了黃芩苷含量作為質(zhì)量評(píng)價(jià)的檢測(cè)指標(biāo)，故選擇了測(cè)定黃芩苷的含量作為評(píng)價(jià)防風(fēng)通圣丸中黃芩的依據(jù)。對(duì)樣品提取溶劑種類、提取溶劑用量及提取時(shí)間均進(jìn)行了考察，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，擬訂了上文所述供試品溶液的制備方法。對(duì)多個(gè)品牌的色譜柱進(jìn)行考察，含量測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異，表明該方法靈敏、簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于防風(fēng)通圣丸的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：233.

Determination of Baicalin in Fangfeng Tongsheng Pills by RP－HPLC

Yao Lijia,Ran Hailin
(Chongqing Institute for Drug Control,Chongqing,China 401121)

ObjectiveTo establish a RP －HPLC method for the determination of baicalin in Fangfeng Tongsheng Pills.MethodsRP －HPLC method was adopted and the C18column (250 mm ×4.6 mm,5!m)was used.The mobile phase was methanol－water－phosphoric acid(45∶55∶0.2),with the flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was at 315 nm and the column temperature was 30℃.ResultsThe calibration curve of baicalin was linear in the range of 0.030 66－0.490 6!g,r=0.999 97(n=8).The average recovery rate was 99.11%,RSD=1.10%(n=6).ConclusionThe method is highly sensitive,quick and accurate with good repeatability,which can be used for the quality control of Fangfeng Tongsheng Pills.

Fangfeng Tongsheng Pill;baicalin;HPLC;content determination

R284.1；R286.0

A

1006－4931(2010)04－0021－02

2009－04－15)