魯 凱， 劉燕文， 朱正秋

胃癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率及死亡率居全國(guó)惡性腫瘤第二位[1]。有文獻(xiàn)報(bào)道，胃癌5年生存率只有5%～20%[2]，嚴(yán)重威脅人類(lèi)的健康，其遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)是生存率低的主要原因。survivin是一個(gè)新克隆的細(xì)胞凋亡抑制基因，近年研究提示其可引起腫瘤細(xì)胞凋亡的喪失并參與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化，是預(yù)后不良的因素之一。本文通過(guò)檢測(cè)Survivin蛋白在胃癌組織中的表達(dá)情況以了解其臨床意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

收集我院2006—2007年手術(shù)切除的胃癌石蠟標(biāo)本46例及完整臨床病理資料，所有患者術(shù)前均經(jīng)胃鏡病理確診且未行化療。男性27例，女性19例；年齡39～78歲，平均61歲。胃體癌+胃竇癌28例，食管-胃結(jié)合部癌18例。組織分型(按WHO胃癌組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn))：黏液腺癌41例，印戒細(xì)胞癌5例。分化程度：高中分化21例，低分化及未分化25例。TNM分期(按UICC分期標(biāo)準(zhǔn))：Ⅰ+Ⅱ期17例，Ⅲ+Ⅳ期29例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移11例。高危因素按胃癌NCCN2008指南標(biāo)準(zhǔn)：有高危因素36例，無(wú)高危因素10例。高危因素包括：腫瘤低分化，組織學(xué)分級(jí)高，脈管浸潤(rùn)，切除淋巴結(jié)數(shù)<15枚，切緣陽(yáng)性。

1.2 方法

1.2.1 石蠟切片 常規(guī)脫蠟梯度水化后,加入內(nèi)源性過(guò)氧化物酶抑制劑，室溫孵育以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS(pH 7.2)振洗后置pH 6.0檸檬酸中微波抗原修復(fù),滴加正常動(dòng)物非免疫血清封閉非特異性抗原，傾去血清，依次滴加一抗4℃過(guò)夜，生物素標(biāo)記的二抗37℃ 15 min，滴加鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶37℃ 15 min，PBS振洗后顯色，流水沖洗終止反應(yīng),以蘇木素復(fù)染,脫水透明封固，0.3%甲醇雙氧水去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。

1.2.2 免疫組化染色 采用鏈霉菌素-生物素(SP)免疫組化技術(shù)，一抗Survivin羊抗人多克隆抗體(sc-8806),Survivin試劑為即用型。實(shí)驗(yàn)步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，將已知的胃癌陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

陽(yáng)性為細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒，結(jié)果以陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比表示。光鏡下(40倍)隨機(jī)抽取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，取其均值，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<25%為(-)，25%～50%為(+)，51%～75%為(++)，>75%為(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。組間分析采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Survivin蛋白在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為50.00%，其中低分化及未分化(13/25，59.09%)高于高、中分化(10/21，47.62%)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。黏液腺癌(23/41，56.10%)高于印戒細(xì)胞癌(0/5，0)，食管-胃結(jié)合部癌(10/18，57.89%)高于胃體及胃竇癌(13/28，46.42%)，TNM分期Ⅲ、Ⅳ期(17/29，58.62%)高于Ⅰ、Ⅱ期(6/17，35.29%)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(22/35，62.85%)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(4/11，36.36%)，有高危因素者(21/36，58.33%)高于無(wú)高危因素者(2/10，20.00%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表1)。

表1 Survivin表達(dá)與胃癌病理特點(diǎn)的關(guān)系

3 討論

凋亡抑制蛋白家族(ihibitor apoptosis family of protein, IAP)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)新的細(xì)胞凋亡抑制蛋白,在進(jìn)化過(guò)程中高度保守，與其他IAP相比，Survivin只在胚胎及腫瘤組織中表達(dá)，在正常成人分化組織中(胸腺、生殖器除外)檢測(cè)不到[3]。近年來(lái)，對(duì)Survivin的分子生物學(xué)、組織分布特征、凋亡抑制機(jī)制及其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的研究已取得了一定進(jìn)展，也是目前發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制作用最強(qiáng)的因子之一，并參與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化及侵襲，也是提示預(yù)后不良的因素之一。

本研究結(jié)果顯示Survivin蛋白在胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為50.00%，其陽(yáng)性表達(dá)率在TNM分期Ⅲ、Ⅳ期患者中高于Ⅰ、Ⅱ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，有高危因素的高于沒(méi)有高危因素的(均P<0.05)。Survivin高表達(dá)提示癌細(xì)胞的侵襲能力及增殖能力增強(qiáng)，更易侵襲周?chē)M織而發(fā)生轉(zhuǎn)移，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及高危因素密切相關(guān)，同時(shí)與疾病的進(jìn)展密切相關(guān)。Li等[4]發(fā)現(xiàn)Survivin過(guò)度表達(dá)可以加速細(xì)胞周期的S期轉(zhuǎn)換，抑制G1期，并激活Cdk2/CyclinE復(fù)合物，導(dǎo)致Rb蛋白磷酸化，從而啟動(dòng)有絲分裂，通過(guò)有絲分裂促進(jìn)轉(zhuǎn)化的腫瘤細(xì)胞異常增殖。Survivin通過(guò)抑制腫瘤組織中正常細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖，進(jìn)而增強(qiáng)癌細(xì)胞的侵襲能力，使其更易侵襲周?chē)M織而發(fā)生轉(zhuǎn)移。由Survivin等凋亡抑制基因過(guò)度表達(dá)引起的凋亡調(diào)控機(jī)制失常而發(fā)生凋亡受阻，對(duì)于癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移無(wú)疑是十分重要的。Zembowicz等[5]定量分析Survivin蛋白發(fā)現(xiàn)其與軟組織肉瘤腫瘤分級(jí)及侵襲性顯著相關(guān)，而Tkegnchi等[6]和Tanaka等[7]分別在食管癌和乳腺癌研究中指出Survivin陽(yáng)性表達(dá)患者的5年生存率低于陰性表達(dá)者，提示Survivin是預(yù)后不良標(biāo)志之一。

食管-胃結(jié)合部癌是指在食管下段復(fù)層鱗狀上皮與胃的單層柱狀上皮呈鋸齒狀交界處(Z形線(xiàn))，即賁門(mén)部附近發(fā)生的癌。本研究結(jié)果顯示食管-胃結(jié)合部癌Survivin陽(yáng)性表達(dá)率為57.89%，而胃體及胃竇癌Survivin陽(yáng)性表達(dá)率為46.42%，P<0.05，與傅仲學(xué)等[8]指出由于其病變部位的特殊性，預(yù)后遠(yuǎn)不及胃竇部的觀點(diǎn)一致。有文獻(xiàn)報(bào)道此部位切除術(shù)后5年生存率比食管癌和胃竇癌低1倍，1年生存率僅55%，提示食管-胃結(jié)合部癌預(yù)后較胃體及胃竇癌差，分析其原因可能由于食管-胃結(jié)合部癌基因表型為A/A型與胃體及胃竇癌G/G、G/A型不同，由此導(dǎo)致對(duì)化療的敏感性不同。Liu等[9]在鉑類(lèi)相關(guān)基因與胃癌含鉑化療預(yù)后的關(guān)系研究中指出A/A型對(duì)化療的敏感性降低，預(yù)后較G/G、G/A型差。

本研究結(jié)果顯示低分化及未分化癌組織Survivin表達(dá)率高于高、中分化癌，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析其原因可能由于樣本分類(lèi)存在偏差，組織分型中印戒細(xì)胞癌只有5例，同時(shí)組織類(lèi)型與惡性腫瘤細(xì)胞的起源及腫瘤細(xì)胞的排列方式、細(xì)胞異型程度密切相關(guān)，當(dāng)組織惡變后，細(xì)胞的多種表型又回到胚胎細(xì)胞的表型，是腫瘤細(xì)胞所固有的特點(diǎn)，而與腫瘤的進(jìn)展程度無(wú)關(guān)。Survivin只在胚胎及腫瘤組織中表達(dá)，Lu等[10]用免疫組化法分析了174例Ⅰ～Ⅲ期胃癌，其中60例Survivin在腫瘤組織中表達(dá)陽(yáng)性，癌旁組織表達(dá)陰性。畢青等[11]報(bào)道Survivin在腫瘤組織中高表達(dá)，而在癌旁組織表達(dá)陰性，其高表達(dá)與腫瘤大小、組織類(lèi)型、分化程度等惡性生物學(xué)行為無(wú)關(guān)。說(shuō)明Survivin與胃癌的發(fā)生無(wú)關(guān)，而與疾病進(jìn)展密切相關(guān)，是提示預(yù)后不良的因素之一。

以上研究表明，Survivin蛋白表達(dá)與腫瘤的發(fā)展及病情進(jìn)展相關(guān)，且其高表達(dá)提示腫瘤的不良預(yù)后，提示Survivin是一個(gè)有潛在價(jià)值的腫瘤標(biāo)志，與腫瘤預(yù)后密切相關(guān)，可作為預(yù)測(cè)腫瘤預(yù)后的新標(biāo)志。

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