黃莉莉,于 爽,李秋紅,李廷利

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理教研室,黑龍江哈爾濱 150040)

柴胡加龍骨牡蠣湯為張仲景《傷寒論》中為傷寒八九日,誤用攻下致變證而設(shè)。本證以“胸滿煩驚,小便不利,譫語(yǔ),一身盡重,不可轉(zhuǎn)側(cè)者”為主要臨床表現(xiàn),以病邪內(nèi)陷、彌漫全身、表里俱病、虛實(shí)錯(cuò)雜而至少陽(yáng)樞機(jī)不利為主要病機(jī),包括了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)的部分疾病,以及某些精神疾病的臨床表現(xiàn)。近些年臨床報(bào)道,柴胡加龍骨牡蠣湯在治療更年期綜合征以及睡眠障礙等方面取得了很好的療效[1～3]。為此,本實(shí)驗(yàn)采用大鼠皮層腦電圖描記技術(shù),研究柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)去卵巢大鼠睡眠時(shí)相的影響,以期為中醫(yī)臨床應(yīng)用提供現(xiàn)代藥理基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥物

柴胡加龍骨牡蠣湯各藥材均購(gòu)自哈藥集團(tuán)人民同泰藥店,并經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教研室鑒定,分別為人參 Panax Ginseng C.A.Mey.;肉桂Cinnamomum casia Presl(嫩枝);半夏 Pinellia temate(Thunb.)Breit.r;茯苓 Poria c0o0s(Schw.)Wolf.;黃芩 Scutellaria baicalensis Georgi;柴胡 Bupleurum chinense IX;.;掌葉大黃 Rheum palmatum L.;姜Zingiber officinale Rose.(新鮮根莖);棗 Ziziphus juiuba Mil1.的干燥成熟(果實(shí));長(zhǎng)牡蠣等貝殼Concha Ostreae;三趾馬等骨骼化石 Os Draconis。各藥按原方用量比例(除大黃)加適量的水浸泡 2h,煮沸 30min過(guò)濾,將濾渣再加適量水煎煮 10min后,加入大黃共煎 10min,合并 2次濾液,濃縮至每毫升煎液相當(dāng)于原藥材 1g。

1.2 動(dòng)物

Wistar大鼠,雌性,體重 200g～ 240g,黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,許可證號(hào)黑動(dòng)字第P00101006。

1.3 儀器

16道生理信號(hào)記錄儀(美國(guó) Stoelting公司),大鼠腦立體定位儀(美國(guó) Stoelting公司),有機(jī)玻璃籠(自制),恒溫恒濕自動(dòng)光控電子屏蔽室。

1.4 方法

1.4.1 手術(shù)操作 戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉(40mg/kg),腦立體定位儀固定,頭部剪毛與消毒后,剪開(kāi)頭部皮膚,分別于冠狀縫前 1mm及人字縫前 1mm與顱骨中線右側(cè)旁開(kāi) 1mm交叉點(diǎn)處,用特制的止血鉗夾住 2個(gè)螺絲釘入顱骨內(nèi),使之與硬腦膜接觸,但不穿透硬腦膜,為皮層電極,用于記錄腦電。在兩側(cè)頸肌內(nèi)分別插入銀絲電極以記錄肌電,4個(gè)電極分別焊至 4線微型插座上,借牙科水泥固定于顱骨上[5],同時(shí)無(wú)菌操作行雙側(cè)卵巢切除術(shù)[6]。假手術(shù)組安裝電極后僅切除約 1g重脂肪,不切除卵巢。術(shù)后放在特制的有機(jī)玻璃筒內(nèi)單籠飼養(yǎng),去卵巢大鼠 3d后進(jìn)行陰道涂片,連續(xù) 5d,以證明去勢(shì)是否徹底。各組大鼠每天保證明暗交替 12h。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)步驟 實(shí)驗(yàn)分為 3組,每組 8只,分別為手術(shù)組、假手術(shù)組和給藥組。手術(shù)組和給藥組為篩選合格的埋好記錄電極的去卵巢大鼠。術(shù)后1周,給藥組按 10g/kg(生藥量)的劑量灌胃給予柴胡加龍骨牡蠣湯,手術(shù)組和假手術(shù)組灌胃給予等容量蒸餾水,共 7d。末次給藥 30min后,頭部的記錄電極通過(guò)微型插座和連接線連接到 16道生理信號(hào)記錄儀上,記錄腦電和肌電(每日 9∶00～17∶00間進(jìn)行,計(jì)算機(jī)自動(dòng)連續(xù)記錄 8h)。

2 結(jié)果

柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)自由活動(dòng)去卵巢大鼠睡眠時(shí)相的影響

表1 柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)自由活動(dòng)去卵巢大鼠睡眠時(shí)相的影響(±s,n=8)

表1 柴胡加龍骨牡蠣湯對(duì)自由活動(dòng)去卵巢大鼠睡眠時(shí)相的影響(±s,n=8)

注:與手術(shù)組比較:＊P<0.05

組別SWS1(min)SWS2(min)REM(min) WAKE(min)手 術(shù) 組 153.33±42.39 27.83±9.83 3.83±4.67 295.00±46.42假 手 術(shù) 組 153.41±40.83 49.24±11.42＊ 2.71±2.13 274.63±38.7柴胡加龍骨牡蠣湯 125.25±34.43 82.22±39.56＊ 2.11±1.22 270.42±65.80

表1顯示,去卵巢大鼠與假手術(shù)組比較,SWS2明顯縮短,柴胡加龍骨牡蠣湯灌胃 7d后能延長(zhǎng)去卵巢大鼠 SWS2,對(duì) SWS1和 REM沒(méi)有明顯影響。

3 討論

圍絕經(jīng)期綜合征是指婦女在絕經(jīng)前后,由于卵巢功能退行性改變、雌激素水平低下、神經(jīng)內(nèi)分泌功能失調(diào)、免疫功能下降所導(dǎo)致的以植物神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂為主并伴有心理癥狀的一組證候群。主要癥狀按系統(tǒng)分為精神神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、血管舒縮失調(diào)癥狀、泌尿系統(tǒng)、生殖道及第二性征改變等[7]。

目前西醫(yī)治療上主要有激素替代法和以鎮(zhèn)靜催眠藥作為主要治療藥物,同時(shí)配合非藥物治療(如睡眠衛(wèi)生教育、光照治療、心理和認(rèn)知行為治療)等療法。鎮(zhèn)靜安眠藥物作用特點(diǎn)在于使失眠者入睡快,淺睡眠時(shí)間延長(zhǎng),中間不易醒,但都(95%以上)程度不等地縮短了 SWS2和 REMS睡眠,從而產(chǎn)生了嚴(yán)重的不良反應(yīng),如宿醉、耐受性及依賴型等,使其應(yīng)用受到限制。隨著激素替代治療使用的不斷增加,其副作用受到越來(lái)越多的重視,如誘發(fā)乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、肝腎功能異常等風(fēng)險(xiǎn)增加。

近年來(lái),許多醫(yī)家以治療主癥睡眠障礙為主,采用中藥及復(fù)方治療圍絕經(jīng)期綜合征均取得了滿意的臨床療效,且副作用少,故中醫(yī)藥治療本病已成為關(guān)注的焦點(diǎn)。因此,以治療睡眠障礙為切入點(diǎn),對(duì)傳統(tǒng)的中醫(yī)藥進(jìn)行挖掘研究將對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征的治療提供有效藥物。近些年臨床報(bào)道,柴胡加龍骨牡蠣湯在治療更年期綜合征以及睡眠障礙等方面取得了很好的療效。

本實(shí)驗(yàn)采用大鼠皮層腦電圖描記技術(shù),首先對(duì)去卵巢大鼠的腦電圖進(jìn)行描記。結(jié)果發(fā)現(xiàn),去卵巢大鼠在睡眠時(shí)相上表現(xiàn)為 SWS2明顯縮短。SWS2在整個(gè)睡眠時(shí)相中稱為慢波睡眠深睡期,是最重要的睡眠成分。據(jù)此,國(guó)內(nèi)學(xué)者提出新型催眠藥物應(yīng)選擇性地延長(zhǎng)慢波睡眠深睡期,同時(shí)保證REM正常比例[8]。國(guó)內(nèi)學(xué)者還研究發(fā)現(xiàn)[9],慢波失眠者有深睡眠減少甚至缺乏,REM(快動(dòng)眼睡眠)活動(dòng)度和密度低改變等。多項(xiàng)圍絕經(jīng)期綜合征流行病學(xué)調(diào)查表明,我國(guó)圍絕經(jīng)期癥狀中尤以睡眠障礙發(fā)生率高[10]。本研究結(jié)果表明,去卵巢大鼠與假手術(shù)組在睡眠時(shí)相上表現(xiàn)為 SWS2明顯縮短,與圍絕經(jīng)期患者主要癥狀為睡眠障礙相一致,從腦電圖方面為圍絕經(jīng)期患者的臨床表現(xiàn)提供了依據(jù)。柴胡加龍骨牡蠣湯灌胃 7d后能延長(zhǎng)去卵巢大鼠 SWS2,對(duì) SWS1和 REM沒(méi)有明顯影響。此研究結(jié)果在一定程度上明確了柴胡加龍骨牡蠣湯改善由于卵巢衰退而引起的睡眠障礙的藥理作用,為中醫(yī)臨床應(yīng)用其治療更年期綜合征以及睡眠障礙提供了現(xiàn)代藥理基礎(chǔ)。

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