王 瑤, 富徐燕， 王 霞， 白 巖，楊賽賽， 潘蘭英， 田 薇

(1.浙江農(nóng)林大學 林業(yè)與生物技術學院,浙江 臨安 311300；2.山東省分析測試中心，山東 濟南 250000)

我國是生產(chǎn)和使用化學農(nóng)藥的大國,長期使用農(nóng)藥對生態(tài)環(huán)境及人體健康的危害和影響已經(jīng)引起人們的高度關注.多菌靈(carbendazol，N-(2-苯并咪唑基)氨基甲酸甲酯)，又叫苯并咪唑 44 號、棉萎靈等，是一種廣譜內(nèi)吸性殺菌劑，能防治水稻、棉花、蔬菜、果樹等多種作物的多種病害，尤其對子囊菌和半知菌引起的病害有較好的防治效果[1]，但它的殘效期比較長，對哺乳動物有一定的毒性[2].因此,農(nóng)產(chǎn)品中多菌靈殘留量的測定越來越受到重視.近年來,有關多菌靈在多種作物上的殘留分析方法有許多報道，如熒光分析法[3]、紅外光譜法[4]、氣相色譜法[5]、薄層掃描法[6]及紫外光譜法[7]等,其中:薄層掃描法靈敏度較低、氣相色譜法需要對樣品進行衍生化處理.因此，目前多菌靈的殘留分析一般采用液相色譜法[8-11]，如Amadeo等用液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)法[12]測定水果蔬菜中多菌靈的殘留;Rodney[13]等用液相色譜法測定藍莓中多菌靈的殘留.有關多菌靈在白術果實上的殘留研究尚未見報道.本文建立了用高效液相色譜法測定白術中多菌靈農(nóng)藥殘留量的方法.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters 2487型高效液相色譜儀;Waters 515 HPLC Pump;MILLIPORE超純水器;DZG-6050型真空干燥箱;KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器.

石油醚、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺均為分析醇;甲醇為色譜醇.多菌靈對照品(純度≥99%)由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研檢測所研制.

多菌靈標準溶液的配制：準確量取0.90 mL 100 μg/mL的多菌靈標準品溶液，置于10 mL容量瓶中，以N,N-二甲基甲酰胺溶解并定容至刻度，搖勻后即為標準溶液.

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品的處理

作物白術(Atractylodesmacrocephala)采自浙江農(nóng)林大學百草園白術基地.農(nóng)藥為50%的多菌靈可濕性粉劑.原藥劑用水稀釋500倍，于6月5日進行噴灑施藥.噴藥后按一定時間間隔隨機采樣，采樣后立即干燥，貯藏于陰涼處備用.

精確稱取制備好的白術樣品2.000 g于三角瓶中，加入20 mL甲醇和5 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液，超聲提取1 h，抽濾，再用15 mL甲醇洗殘渣，合并濾液于平底燒瓶中，在40 ℃水浴減壓濃縮至15～20 mL.將濃縮后的提取液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入10 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液和50 mL 0.1 g/L NaCl溶液后，再加入25 mL石油醚劇烈振蕩1 min，靜置分層后棄去石油醚層.下層水相用2 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5，再用二氯甲烷萃取3次，每次15 mL，合并二氯甲烷萃取液于平底燒瓶中,經(jīng)無水Na2SO4干燥，減壓濃縮至近干，再用氮氣吹干，以N,N-二甲基甲酰胺定容至2 mL,即得樣品溶液.

1.2.2 色譜條件

色譜柱：4.6 mm×150 mm，TRACE EXCEL ODS不銹鋼柱，粒徑5 μm.流動相：V(甲醇)∶V(水)=35∶65,流速1.0 mL/min.檢測波長：281 nm.

2 結(jié)果與討論

2.1 樣品提取凈化

多菌靈不溶于水，微溶于常用的有機溶劑.因此,常規(guī)方法用有機溶劑很難將多菌靈從白術樣品中提取出來.本實驗利用多菌靈在酸性條件下成鹽而易溶于水的特性，使用甲醇和0.1 mol/L鹽酸溶液，在超聲提取器上超聲1 h，提取白術中殘留的多菌靈，凈化后直接用液相色譜儀檢測.

2.2 流動相選擇

分別吸取對照品和樣品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件檢測，以樣品溶液中多菌靈的分離度作為指標，對所得譜圖進行分析，進而確定合適的流動相.

流動相AV(甲醇)∶V(水)=45∶55，所得多菌靈色譜圖見圖1.結(jié)果顯示目標峰基部未完全分離，即峰分離度不夠.

流動相BV(甲醇)∶V(水)=35∶65,所得色譜圖見圖2.圖2顯示多菌靈的峰形及分離度良好.

因此,本實驗選用V(甲醇)∶V(水)=35∶65的流動相系統(tǒng).

2.3 精密度和重復性測定

精密度實驗 分別取對照品溶液(9 μg/mL)20 μL，重復進樣5次，測定每次進樣后多菌靈的峰面積值,其相對標準偏差(RSD)為2.203%，表明儀器的精密度良好.

圖1 流動相A條件下所得多菌靈色譜圖

圖2 流動相B條件下所得多菌靈色譜圖

重復性實驗 取同一個樣品5份,按供試品制備方法制備后，重復進樣5次，測定每次進樣后多菌靈的峰面積值.結(jié)果顯示：其RSD為3.18%，表明重現(xiàn)性良好.

2.4 線性關系和檢出限測定

在上述色譜條件下，測定了HPLC/UV對多菌靈響應的線性關系.檢測線性范圍為0.45～108 ng，其線性回歸方程式為

Y=8 886.7X-8 875.2,R=0.999 7.

表明對照品溶液在0～5.4 μg/mL與峰面積呈良好的線性關系.

2.5 穩(wěn)定性檢測

取新鮮配制的樣品溶液，分別在0，2，4，8，16，24 h進樣20 μL,測定峰面積，其RSD為3.97%，表明穩(wěn)定性良好.

2.6 樣品分析及回收率檢測

在上述色譜條件下,準確吸取已制備好的樣品溶液20 μL，注入高相液相色譜儀中，用外標法定量，根據(jù)公式計算殘留量,結(jié)果見表1.

表1 多菌靈在白術中的含量隨時間呈遞減關系

回收率實驗：精密稱取已知含量的樣品2 g，加入一定量的多菌靈標準品，按上述方法對樣品進行提取、凈化和色譜測定后，計算添加回收率,結(jié)果見表2.多菌靈在樣品中的添加回收率在94.57%～103.33%，RSD為3.75%.

3 結(jié) 論

1)本文采用反相高效液相色譜法分析白術中的多菌靈殘留，利用高效液相色譜儀的洗脫功能，使殘留的多菌靈在7.5 min時流出，而其他基質(zhì)共提物則在其前流出，對多菌靈不產(chǎn)生干擾，從而使得定性定量結(jié)果更趨準確和真實.檢測線性范圍為0.45～108 ng，加樣回收率在94.57%～103.33%，最低檢出量3.6×10-10g，最低檢測質(zhì)量濃度為0.022 5 μg/mL.方法定量準確、快捷，操作簡便，靈敏度高，滿足農(nóng)藥殘留分析的要求.

2)國家生產(chǎn)安全標準規(guī)定無公害藥材中多菌靈的殘留量應小于0.5 mg/kg，根據(jù)本實驗結(jié)果，多菌靈在白術上最后一次施藥到采收應不少于30 d，最好不少于40 d.

表2 多菌靈殘留分析方法的添加回收率

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