何 青 徐國(guó)興 王婷婷 謝茂松

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華蟾素對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響

何 青1，2徐國(guó)興1，2王婷婷1，2謝茂松1，2

1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院眼科中心 2.福建省眼科研究所

目的:探討華蟾素對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。方法:40只新西蘭白兔隨機(jī)分為4組，每組10只，均施行小切口晶狀體摘除術(shù)，N組施行正常手術(shù)，a組、b組、c組分別在中央前囊膜截除后在周邊前囊膜和皮質(zhì)之間注入含0.1 mg·L-1、0.2 mg·L-1、0.3 mg·L-1華蟾素的平衡液0.2mL，5分鐘后用不含藥液的平衡液水分離。術(shù)后第90天，4組實(shí)驗(yàn)兔處死后周邊前囊膜行透射電鏡觀察。結(jié)果:周邊前囊膜電鏡檢查示N組表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞功能活躍狀態(tài)；a、b、c組晶狀體上皮細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡改變。結(jié)論:通過(guò)囊袋內(nèi)單劑量給藥的方式，0.1 mg·L-1、0.2 mg·L-1、0.3 mg·L-1的華蟾素誘導(dǎo)兔晶狀體上皮細(xì)胞凋亡，從而預(yù)防后發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)生。

華蟾素 晶狀體上皮細(xì)胞 凋亡 超微結(jié)構(gòu)

華蟾素（Cinobufotalin）為紗蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍（Bufobufo gargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍（B.melano stictus Schneider）等的全皮提取制劑, 具有清熱解毒，利水消腫，化瘀潰堅(jiān)等作用，已列為國(guó)家級(jí)中藥保護(hù)品種并已廣泛應(yīng)用于臨床[1]。本研究通過(guò)囊袋內(nèi)單劑量給藥的方式，觀察華蟾素對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)方法

1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器

穿刺刀、雙韌刀、隧道刀均為美國(guó)Sharpoint公司生產(chǎn)；手術(shù)顯微鏡（Zeiss 200P）為德國(guó)生產(chǎn)；透射電子顯微鏡（Hu—12A）為日本生產(chǎn)；所有手術(shù)器械均高溫高壓消毒。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及手術(shù)方法

健康普通級(jí)新西蘭白兔40只，體重2.54±0.32kg,雌雄不限，屈光間質(zhì)透明，裂隙燈檢查排除眼前節(jié)病變，散瞳間接眼底鏡排除玻璃體、眼底病變，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供。

新西蘭白兔稱重，20%烏拉坦1.0g/kg耳緣靜脈內(nèi)注射全身麻醉后右眼行常規(guī)小切口晶狀體囊外摘除術(shù)，左眼不予任何處理，按隨機(jī)表隨機(jī)分為4組,每組各10只：N組為正常平衡液（參天制藥株式會(huì)社，日本）水分離處理組，a組為含0.1 mg·L-1華蟾素的平衡液水分離處理組，b組為含0.2 mg·L-1華蟾素的平衡液水分離處理組，c組為含0.3 mg·L-1華蟾素的平衡液水分離處理組（華蟾素注射液：批號(hào)060228-1, 安徽金蟾生化股份有限公司提供）。

1.3 組織取材及標(biāo)本處理

術(shù)后第90天，4組實(shí)驗(yàn)兔用消毒空氣致死,迅速摘除眼球，周邊后囊膜3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1M PBS (pH 7.2) 4℃ 固定24h后透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)。

2 結(jié)果

周邊前囊膜電鏡檢查結(jié)果：

N組：體積較大，外形不規(guī)則，核內(nèi)染色質(zhì)以常染色質(zhì)為主，細(xì)胞漿內(nèi)見較多粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體，表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞功能活躍狀態(tài)，這種細(xì)胞三五成群聚集（見圖1、圖2）。

a、b、c組：部分晶狀體上皮上皮細(xì)胞體積變小，細(xì)胞器較少，染色質(zhì)靠邊聚集，細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡狀態(tài)（見圖3），部分細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、破裂、細(xì)胞質(zhì)崩解等繼發(fā)性壞死的形態(tài)改變（見圖4）。

圖1 （×4800）

圖2 （×4800）

圖3 （×6000）

圖4 （×4800）

3 討論

組織病理學(xué)已證實(shí)白內(nèi)障術(shù)后殘留的LECs在囊膜上轉(zhuǎn)分化、增生、移行，產(chǎn)生膠原，是發(fā)生后囊膜混濁的主要原因[2，3]，因此能有效抑制晶狀體上皮細(xì)胞增殖或抑制晶狀體上皮轉(zhuǎn)分化的藥物能有效預(yù)防PCO的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，0.1 mg·L-1、0.2mg·L-1及0.3mg·L-1濃度的華蟾素囊袋內(nèi)單劑量給藥能使手術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，出現(xiàn)凋亡的形態(tài)變化。

防治后發(fā)障需要解決的重要問(wèn)題是抑制晶狀體上皮細(xì)胞增殖和遷移[4]，該研究提示通過(guò)囊戴內(nèi)單劑量給藥的方式，一定濃度的華蟾素能通過(guò)誘導(dǎo)殘余晶狀體上皮細(xì)胞凋亡、抑制晶狀體上皮細(xì)胞增殖而預(yù)防后發(fā)性白內(nèi)障的形成。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部) [M ].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000; 附錄26.

[2] 徐國(guó)興,胡建章,鄭衛(wèi)東,等.基質(zhì)金屬蛋白酶2和金屬蛋白酶2組織抑制因子及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1在糖尿病性白內(nèi)障患者晶狀體上皮細(xì)胞的表達(dá)及意義[J].中華眼科雜志,2003,39(7):411-414.

[3] 徐國(guó)興,胡建章,王婷婷,等.熱休克蛋白-70在人類糖尿病性白內(nèi)障晶狀體上皮細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J].眼視光學(xué)雜志，2003,5(2):72-74.

[4] Marcantonio JM,Vrensen GF. Cell biology of posterior capsular opacification [J].Eye,1999;13(3B):484-488.

福建省中醫(yī)藥科研重點(diǎn)課題（基金編號(hào)：wzzb0606）、福建醫(yī)科大學(xué)教授發(fā)展基金課題（基金編號(hào)：2006-js6033）。

徐國(guó)興，zjfmuxgx@pub5.fz.fj.cn。