中圖分類號(hào):S858.28;S858.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):1007-273X(2010)01-0029-02

黔西縣林泉鎮(zhèn)韋寨村3組有10戶人家，從2003年4月到2009年7月共死亡耕牛24頭，豬近20頭。死亡耕牛多在4～10月發(fā)生，耕牛死前癥狀相似，且一般在較為封閉的圈內(nèi)飼養(yǎng)。耕牛發(fā)病后，主要癥狀為不食草料、不愿走動(dòng)、四肢無(wú)力、肌肉顫抖、口有白沫和神經(jīng)癥狀等;多數(shù)耕牛發(fā)病后迅速倒地死亡，少數(shù)病例病程稍長(zhǎng)，可達(dá)到12h;耕牛死后尸僵正常。同戶飼養(yǎng)的豬也有死亡現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為興奮、不吃飼料、皮膚發(fā)紅等，而家禽無(wú)異?，F(xiàn)象。為查清死亡原因，我們對(duì)送檢的豬血清樣本12份、牛血清樣本13份及相應(yīng)血推片、1頭病死牛臟器病料等樣品進(jìn)行了一系列化驗(yàn)，現(xiàn)將診斷情況介紹如下。

1病理剖檢觀察情況

對(duì)1頭發(fā)病死亡耕牛進(jìn)行剖解病變觀察，主要表現(xiàn)為:肝臟表面散布較多的壞死結(jié)節(jié)灶;腸內(nèi)容為黑綠色，散發(fā)出惡臭味。

2實(shí)驗(yàn)室診斷情況

2.1送檢豬牛血樣的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

(1)血推片染色鏡檢:將送檢的豬血推片和牛血推片分別進(jìn)行姬姆薩氏染色和瑞氏染色后，于光學(xué)顯微鏡下觀察，未發(fā)現(xiàn)血液原蟲。

(2)血清樣本抗體檢測(cè):根據(jù)流行病學(xué)與臨床癥狀特征，對(duì)送檢豬血清樣本主要進(jìn)行了豬偽狂犬病(PR)和豬乙型腦炎(JE)抗體的檢測(cè)。采用的試劑盒是豬偽狂犬病乳膠凝集試驗(yàn)(LAT)診斷試劑盒和豬乙型腦炎病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自武漢科前生物技術(shù)有限公司;檢測(cè)方法和結(jié)果判定按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。檢測(cè)結(jié)果見表1。由表1可見，該自然村豬群存在不同程度的豬偽狂犬病和豬乙型腦炎感染，其感染抗體的陽(yáng)性率分別達(dá)到25.0%和33.3%。

由于目前實(shí)驗(yàn)室沒有檢測(cè)牛偽狂犬病和乙型腦炎的抗體檢測(cè)試劑盒，因此本次未對(duì)牛血清樣本進(jìn)行檢測(cè)。

2.2送檢牛組織病料的實(shí)驗(yàn)室診斷

(1)腸黏膜寄生蟲檢查。取送檢病死牛的腸黏膜進(jìn)行觸片，于光學(xué)顯微鏡(40×)下觀察，可見到蛔蟲和肝片吸蟲等寄生蟲的蟲卵。

(2)送檢腦組織病原檢測(cè)。PCR檢測(cè):取送檢牛腦組織，加入適量滅菌生理鹽水，研磨成勻漿，

10 000r/min離心10min，收集上清液，采用SDS-蛋白酶K法提取DNA樣本，以針對(duì)豬偽狂犬病病毒(PRV)gD基因引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果見圖1。

動(dòng)物接種試驗(yàn):分別取牛腦組織勻漿液0.1mL和0.2mL，腹腔注射兩只健康小白鼠。小白鼠于注射后呈現(xiàn)短暫的興奮癥狀，但不久可恢復(fù)正常。

2.3細(xì)菌分離鑒定

(1)細(xì)菌分離培養(yǎng)。用接種環(huán)取送檢牛肝、脾和腸內(nèi)容物劃線接種于鮮血瓊脂平板，分別進(jìn)行需氧和厭氧培養(yǎng)，24h培養(yǎng)后肝和腸內(nèi)容物病料均能生長(zhǎng)出三種不同的菌落:一是灰白色、圓形、濕潤(rùn)、邊緣整齊、凸起、溶血的菌落，染色鏡檢為G+球菌;二是灰白色、濕潤(rùn)、邊緣整齊、凸起、不完全溶血的菌落，染色鏡檢為G-球桿菌;三是白色、濕潤(rùn)、邊緣整齊、凸起、完全溶血的菌落，染色鏡檢為G-小桿菌。

(2)細(xì)菌分離物鑒定。①G+球菌的鑒定:用煮沸法提取G+球菌分離物的DNA樣本，分別以針對(duì)鏈球菌和葡萄球菌的特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果未擴(kuò)增出鏈球菌特異性DNA片段，但可見到葡萄球菌的特異性DNA片段，即可判定該G+球菌分離物為葡萄球菌。②G-球桿菌的鑒定:取G-球桿菌分離物接種麥康凱培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h未見細(xì)菌生長(zhǎng);可發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖和乳糖，不分解菊糖、鼠李糖和尿素，不產(chǎn)生靛基質(zhì)和硫化氫，不液化明膠，能還原硝酸鹽，結(jié)合菌體形態(tài)和培養(yǎng)特性，初步判定為溶血性巴氏桿菌。③G-小桿菌的鑒定:取G-小桿菌分離物接種麥康凱培養(yǎng)基，培養(yǎng)24h后可見生長(zhǎng)出粉紅色小菌落;生化試驗(yàn)結(jié)果顯示，該分離菌在尿素、西蒙氏枸櫞酸鹽、硫化氫試驗(yàn)中均為陰性，而對(duì)氧化酶試驗(yàn)呈陰性;取該菌分離物與沙門氏菌屬A-F多價(jià)血清進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)，結(jié)果為陰性。綜上所述，即可判定該G-小桿菌為大腸桿菌。

(3)細(xì)菌動(dòng)物接種試驗(yàn)。取上述3種細(xì)菌的純培養(yǎng)物各0.2mL，以腹腔注射法接種到健康小白鼠體內(nèi)，24h后大腸桿菌組和葡萄球菌組小白鼠即可見明顯的臨床癥狀，如視覺模糊、精神不振、不愿走動(dòng)、厭食等;36～48h后大腸桿菌組小白鼠發(fā)生死亡，并能從死亡鼠肺、肝和腹腔中分離到大腸桿菌，即可判定該細(xì)菌為致病性大腸桿菌。

連續(xù)觀察5d，葡萄球菌組小白鼠雖有精神委頓等癥狀，但不發(fā)生死亡;而溶血性巴氏桿菌組小白鼠無(wú)明顯的臨床表現(xiàn)，也不發(fā)生死亡現(xiàn)象。

(4)細(xì)菌分離物藥敏試驗(yàn)。取致病性大腸桿菌的純培養(yǎng)物進(jìn)行抗生素敏感性試驗(yàn)，結(jié)果見表2。

3結(jié)果與分析

(1)從送檢豬血清樣本的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果來(lái)看，該自然村豬群存在不同程度的豬偽狂犬病和豬乙型腦炎感染，其感染抗體的陽(yáng)性率分別達(dá)到25.0%和33.3%(該村養(yǎng)豬戶從未免疫過(guò)豬偽狂犬病和豬乙型腦炎疫苗)。但由于武漢科前生物技術(shù)公司生產(chǎn)的檢測(cè)試劑盒不能檢測(cè)牛偽狂犬病和牛乙型腦炎抗體，因此目前還不能判定牛群是否存在上述兩種疫病的感染。

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒引起多種家畜的一種急性傳染病。感染豬主要表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎及公豬睪丸腫脹等繁殖障礙，新生仔豬大量死亡和哺乳仔豬拉稀、嘔吐和神經(jīng)癥狀。感染牛主要表現(xiàn)為局部皮膚瘙癢，體溫升高;病情加深時(shí)可見麻痹、呼吸困難、磨牙吼叫等癥狀;部分牛發(fā)病后數(shù)小時(shí)死亡，不表現(xiàn)奇癢癥狀。

乙型腦炎是由乙型腦炎病毒引起的一種人畜共患病。豬感染后主要表現(xiàn)為體溫升高呈稽留熱，精神沉郁，食欲減少，飲欲增加;有的病豬可見視力障礙、亂沖亂撞，最后后軀麻痹，倒地而亡;母豬妊娠后期流產(chǎn)和新產(chǎn)仔豬發(fā)生痙攣。牛感染后主要表現(xiàn)為發(fā)熱、食欲廢絕、磨牙呻吟、轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)、四肢僵直等，病程少則1～2d，多則10～15d。

(2)根據(jù)送檢病死牛組織病料的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，該村死亡牛感染有致病性大腸桿菌、葡萄球菌和溶血性巴氏桿菌，同時(shí)還有蛔蟲、肝片吸蟲等寄生蟲的感染，但主要病原還是致病性大腸桿菌和葡萄球菌。

由于送檢的病死牛在死前沒有發(fā)現(xiàn)神經(jīng)癥狀，與該村自2003年4月以來(lái)發(fā)生的病牛癥狀不盡一致。經(jīng)對(duì)其腦組織進(jìn)行偽狂犬病病毒核酸的PCR檢測(cè)后，結(jié)果亦未檢出偽狂犬病病毒的特異性DNA片段，即可判定該病死牛不是牛偽狂犬病病毒感染所致。

(3)根據(jù)該村居民講述和三下鄉(xiāng)的調(diào)查報(bào)告，該村耕牛死前大多表現(xiàn)出相同的神經(jīng)癥狀，如極度興奮、亂沖亂撞、肌肉震顫和后軀無(wú)力等，且病程較短(1～5h)。能引起牛發(fā)生神經(jīng)癥狀的病原較多，有病毒(如偽狂犬病病毒、乙型腦炎病毒、朊病毒等)、細(xì)菌(如A型產(chǎn)氣莢膜梭菌、產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌、致病性大腸桿菌等)和寄生蟲(如新孢子蟲、旋毛蟲、弓形蟲等)。一般來(lái)說(shuō)，新孢子蟲、旋毛蟲、弓形蟲等寄生蟲可寄生于牛腦組織內(nèi)而引起神經(jīng)癥狀，但一般不會(huì)發(fā)生急性死亡;朊病毒引起的牛海綿狀腦病(瘋牛病)在我國(guó)尚未見到報(bào)道，且該村耕牛來(lái)源和飼料種類等不具備朊病毒傳播的可能性。因此，可以排除寄生蟲病和牛海綿狀腦病。

4建議

綜上分析，引起黔西縣林泉鎮(zhèn)韋寨村3組近年來(lái)豬牛發(fā)病死亡的主要病原，可能是偽狂犬病病毒、乙型腦炎病毒、A型產(chǎn)氣莢膜梭菌、產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌、致病性大腸桿菌等。因此，建議:

(1)定期對(duì)該村的豬牛實(shí)施偽狂犬病疫苗、乙型腦炎疫苗和A型產(chǎn)氣莢膜梭菌菌苗的免疫接種，以預(yù)防偽狂犬病、乙型腦炎和A型產(chǎn)氣莢膜梭菌病。

(2)定期采用敏感的抗生素如磺胺嘧啶鈉、氨芐青霉素、頭孢菌素等對(duì)該村豬牛進(jìn)行注射，以預(yù)防產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌病和大腸桿菌病。

(3)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格消毒措施，適時(shí)驅(qū)鼠滅蚊和清除豬牛體內(nèi)外寄生蟲，科學(xué)處理病死豬牛，防止病原體在該村的存在與傳播。