鐘麗娟　趙新?！垜c華　徐　沖

摘要：為了篩選有效控制甘薯軟腐病的藥劑，采用生長速率法測定了5種市售藥劑對甘薯軟腐病菌的抑菌作用。結(jié)果表明，80％多菌靈可濕性粉劑和70％甲基托布津超微可濕性粉劑對甘薯軟腐病菌有較明顯的抑制作用，其它藥劑無明顯防治效果。

關(guān)鍵詞：甘薯軟腐?。毁橹Ω?；殺菌劑；抑菌試驗

中圖分類號：S435.313⁺.2文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942(2009)07-0087-03

甘薯軟腐病(Rhizopus aolonifer)，是甘薯貯藏期的主要病害之一，在全國各甘薯生產(chǎn)區(qū)均有發(fā)生。該病由接合菌亞門的匍枝根霉(黑根霉)Rhi-wpus aolonifer(Ehr.ex.Fr.)Vuill，引起，在適宜條件下病情發(fā)展較快，往往導(dǎo)致甘薯全窖腐爛，因此在甘薯人窖前應(yīng)先做好相應(yīng)的預(yù)防工作。從收獲時避免傷口，淘汰病薯，到入窖前清理、熏蒸薯窖，甘薯藥劑處理乃至貯藏期間管理等各個步驟都要嚴(yán)格把關(guān)，才能保證甘薯安全貯藏，其中篩選防治甘薯軟腐病的有效藥劑對甘薯貯藏尤為重要。關(guān)于軟腐病的防治藥劑多數(shù)是網(wǎng)頁資料，未清楚表明藥劑的種類及使用濃度，并且即使同一主要成分的農(nóng)藥，由于其生產(chǎn)工藝的差別、加入助劑的不同、防治對象的不同，都可能導(dǎo)致防治效果的差別。本試驗即對5種常用市售藥劑對甘薯軟腐病菌的抑菌能力進(jìn)行了研究，旨在為甘薯貯藏前的藥劑處理提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1甘薯軟腐病病原菌分離及鑒定

取薯皮有白色霉層，薯肉稍腐爛，表現(xiàn)明顯軟腐癥狀的甘薯，采用組織分離法，在無菌操作條件下，取已滅菌的培養(yǎng)皿，將甘薯病健交接處切成1cm³大小，放入培養(yǎng)皿中，先倒入70％酒精，進(jìn)行表面潤洗幾秒鐘，倒出酒精，再倒入0.1％升汞液適量作表面消毒1min。消毒后倒出升汞液，用無菌水沖洗2～3次。用滅菌的鑷子夾取剪好的材料，過火焰去些水分后，放入培養(yǎng)基平板上，輕輕按壓。每個培養(yǎng)皿4～5塊，排放均勻。用記號筆在培養(yǎng)皿上注明分離代號、日期、名稱，將培養(yǎng)皿用紗布包好，翻轉(zhuǎn)放置于23～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2d后挑選由分離材料上長出的典型而無雜菌的菌落，在顯微鏡下鏡檢，確定為黑根霉后，在菌落邊緣用移菌針挑取帶有菌絲的培養(yǎng)基一小塊，轉(zhuǎn)入試管斜面培養(yǎng)基中央，于25℃溫箱中培養(yǎng)，待生長好后放入冰箱保藏。

1.2甘薯軟腐病病原菌的致病性驗證

由于根霉在空氣中廣泛存在，是實驗室最常見的污染菌之一，為了證明所分離的根霉確實是甘薯軟腐病的致病菌，需要通過柯赫氏證病法則進(jìn)行驗證，即進(jìn)行病菌的回接試驗。

取同一品種的健康甘薯洗凈去皮，表面用70％酒精消毒，然后用無菌的解剖刀將甘薯切成1.5cm厚的甘薯片，用打孔器打取已經(jīng)活化的病菌菌苔，菌絲面朝下接種于薯片中央位置，將薯片置于培養(yǎng)皿中，于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，2～3d后觀察發(fā)病情況。再次采用常規(guī)組織分離法，進(jìn)行分離，培養(yǎng)后于顯微鏡下觀察，比較兩次分離所得的菌株形態(tài)上是否一致。

1.3.5種常用藥劑對甘薯軟腐病病菌的室內(nèi)抑菌試驗

1.3.1供試藥劑及使用濃度80％多菌靈可濕性粉劑800倍液(上海龍燈化工有限公司，市售)；50％多菌靈可濕性粉劑800倍液(英國LK作物科學(xué)有限公司，市售)；70％甲基托布津可濕性粉劑800倍液(江蘇龍燈化學(xué)有限公司，市售)；純品佳托70％可濕性粉劑800倍液(陜西上路之格生物科學(xué)有限公司，市售)；甲托70％超微可濕性粉劑800倍液(西安美邦藥業(yè)有限公司，市售)。

1.3.2不同藥劑對甘薯軟腐病病菌菌絲生長的影響采用生長速率法測定殺菌劑對甘薯軟腐病菌的毒力。將供試藥劑分別用定量無菌水稀釋成所需濃度，取1ml稀釋液放入滅菌培養(yǎng)皿(直徑為90mm)，加PDA培養(yǎng)基9ml，充分搖勻，制成含藥的培養(yǎng)基，以加入等體積的無菌水的PDA平板為對照。培養(yǎng)基凝固后，用打孔器(直徑為10mm)制取已活化的病菌菌餅，菌絲面朝下接種于含藥PDA培養(yǎng)基中央，每處理重復(fù)3次，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)黑暗培養(yǎng)，2d后交叉測量供試病菌在含不同藥劑培養(yǎng)基上的菌落直徑，與對照比較計算各藥劑處理對菌落擴(kuò)展的生長抑制率，分析比較不同殺菌劑對供試病菌菌絲生長的影響。

抑菌率(％)=[(對照菌落直徑－10)－(處理菌落直徑－10)]／(對照菌落直徑－10)×100

2結(jié)果與分析

2.1甘薯軟腐病病菌分離與鑒定結(jié)果

通過鏡檢發(fā)現(xiàn)，所分離的真菌菌絲無色，有匍匐根，根節(jié)處簇生直立暗褐色孢囊梗，頂端著生1個球狀孢子囊，囊內(nèi)產(chǎn)生很多暗色單胞圓形孢子，單胞大小為11－14μm，與根霉的形態(tài)特征一致，至于是空氣中的病菌還是甘薯軟腐病的致病菌需要經(jīng)柯赫氏法則的進(jìn)一步驗證。

2.2甘薯軟腐病病菌致病性驗證結(jié)果

柯赫氏法則規(guī)定：(1)在發(fā)病植物上常伴隨有一種病原生物存在；(2)該微生物可在離體的或人工培養(yǎng)基上分離純化而得到純培養(yǎng)；(3)將純培養(yǎng)接種到相同品種的健株上，表現(xiàn)出相同癥狀的病害；(4)從接種發(fā)病的植物上再分離到其純培養(yǎng)，性狀與原來的記錄相同。回接試驗的結(jié)果顯示，在接種菌苔周圍的薯塊表面長出白色棉狀菌絲，并生出灰黑色小粒，病情發(fā)展很快，到接種第3d時，薯塊已經(jīng)變軟，表現(xiàn)出黃褐色或淺褐色腐爛，并且有酒味或酸臭味。與試驗時所取病薯表現(xiàn)癥狀特點一致，然后將其再次分離，培養(yǎng)基上長出與第一次分離的病菌形態(tài)和顏色相同的病原菌；于顯微鏡下對病原菌形態(tài)進(jìn)行觀察，鑒定所分離的病菌即為甘薯軟腐病的病原菌匍枝根霉Rhizopm stolonifer(Ehr.ex.Fr.)Vuill。

2.3不同藥劑對甘薯軟腐病病菌菌絲生長的抑制效果

由表1可見，供試的5種藥劑中，上海龍燈化工有限公司生產(chǎn)的80％多菌靈和西安美邦藥業(yè)有限公司銷售的甲托70％超微粉對匍枝根霉的菌落生長有強(qiáng)的抑制作用，抑菌率達(dá)90％以上，而其它試劑對甘薯軟腐病病菌無明顯的抑制作用，抑制率僅在13.25％-21.69％之間。

3結(jié)論與討論

通過5種常用藥劑對甘薯軟腐病病菌抑菌效果的初步測定，篩選出抑菌效果較好的兩種藥劑，結(jié)果表明：80％多菌靈可濕性粉劑和甲托70％超微可濕性粉劑抑菌效果好，可以作為甘薯貯前處理藥劑。本試驗主要考察了苯并咪唑類廣譜性農(nóng)藥對軟腐病病菌的抑制效果，試驗結(jié)果也表明即使同一主要成分的農(nóng)藥，由于其生產(chǎn)工藝的差別、加入助劑的不同、防治對象的不同，都能導(dǎo)致抑菌效果的差別，當(dāng)然，由于試驗中所用的農(nóng)藥均購自農(nóng)藥市場，也不能排除存在假冒偽劣農(nóng)藥的可能，所以在甘薯貯前，進(jìn)行前期的藥劑篩選預(yù)備試驗也顯得尤其重要和必要。