[摘要] 目的 比較ELISA和ECL兩種檢測(cè)方法對(duì)AFP檢測(cè)的穩(wěn)定性、敏感性及重復(fù)性。方法 對(duì)200例患者血標(biāo)本同時(shí)采用ELISA和ECL兩種方法進(jìn)行AFP檢測(cè)，對(duì)同一標(biāo)本連續(xù)測(cè)定20次進(jìn)行批內(nèi)變異的比較;同時(shí)對(duì)標(biāo)本每天測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定20天進(jìn)行批間變異比較。采用方差分析比較兩種方法敏感性;并對(duì)兩種方法進(jìn)行線性回歸分析，評(píng)價(jià)兩種方法相關(guān)性。結(jié)果 ECL批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)均較ELISA小，具有較好的重復(fù)性及穩(wěn)定性;當(dāng)AFP<500μg/L時(shí)，ELISA和ECL法檢測(cè)AFP敏感性相似，當(dāng)AFP>500μg/L時(shí)，ECL法敏感性高于ELISA(P<0.05)。結(jié)論 ECL較ELISA穩(wěn)定性好、敏感性高、重復(fù)性好，而ELISA具有經(jīng)濟(jì)、在AFP濃度值低于500μg/L時(shí)也具有較好的敏感性。

[關(guān)鍵詞] 甲胎蛋白;酶聯(lián)免疫吸附法;電化學(xué)發(fā)光法

[中圖分類號(hào)] R392-33 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1004-8650(2009)08-024-02

腫瘤已成為當(dāng)今世界嚴(yán)重危害人類的疾病，死亡率僅次于心血管疾病居全球第二。每年有成千上萬(wàn)新診斷腫瘤患者，當(dāng)中不少患者由于就診時(shí)已出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或是已出現(xiàn)全身嚴(yán)重癥狀，導(dǎo)致治療效果不佳、遠(yuǎn)期預(yù)后差[1，2]。隨著近幾十年各種生化檢測(cè)儀器的發(fā)展以及腫瘤標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，使得對(duì)腫瘤的早期篩查和診斷成為可能。腫瘤標(biāo)志物是腫瘤組織和細(xì)胞由于其癌基因異常表達(dá)所分泌的、存在于腫瘤組織及全身血液和體液中的明顯高于正常值的一類物質(zhì)。如甲胎蛋白(alpha fetal protein， AFP)被公認(rèn)為是診斷原發(fā)性肝癌的重要腫瘤標(biāo)志物[3]。

目前臨床檢驗(yàn)中AFP的檢測(cè)方法有幾種，如酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immuno-sorbent assay ，ELISA)和電化學(xué)發(fā)光法(electro-chemi-luminescence ，ECL)等。本研究主要比較近年來(lái)我院常用的ELISA和ECL兩種檢測(cè)方法，評(píng)價(jià)兩種檢測(cè)方法對(duì)AFP的診斷的穩(wěn)定性、敏感性及重復(fù)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1一般資料

本研究收集了從2007年12月-2008年12月在我院住院及門診患者200例，男103例，女97例，年齡(40.5±3.8)歲。

1.2試劑與儀器

1.2.1 方法:對(duì)同一患者靜脈血分別用ELISA和ECL法進(jìn)行AFP檢測(cè)，每份標(biāo)本每天檢測(cè)1次，連續(xù)檢測(cè)20天，比較ELISA和ELC在AFP檢測(cè)上的重復(fù)性和穩(wěn)定性，同時(shí)比較ELISA和ECL檢測(cè)AFP的敏感性。

1.2.2試劑:ELISA檢測(cè)使用鄭州博賽生物工程股份有限公司AFP診斷試劑盒，操作步聚均嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;ECL檢測(cè)試劑從羅氏公司購(gòu)買并按照儀器的使用說(shuō)明及操作規(guī)程進(jìn)行。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器:采用EXL-800全自動(dòng)酶標(biāo)儀、ELP-40全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)進(jìn)行ELISA檢測(cè);KLI 2010型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀進(jìn)型ECL檢測(cè);質(zhì)控品由羅氏公司提供。

1.3數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)方法

1.3.1 AFP<20μg/L 為陰性、AFP >20μg/L為陽(yáng)性，陽(yáng)性中分為20-500μg/L和>500μg/L為強(qiáng)陽(yáng)性(原發(fā)性肝癌診斷界值)。

1.3.2 采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。采用χ2 檢驗(yàn)或ANOVA方差分析對(duì)資料進(jìn)行比較敏感性和穩(wěn)定性比較，同時(shí)采用Pearson相關(guān)對(duì)ELISA和ECL進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1敏感性比較

ELISA和ECL對(duì)AFP檢測(cè)敏感性比較見(jiàn)表1。

由表1可見(jiàn)當(dāng)AFP<500μg/L時(shí)，ELISA和ECL對(duì)AFP檢測(cè)敏感性差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;當(dāng)AFP>500μg/L時(shí)，ECL(54例)檢測(cè)敏感性高于ELISA(44例)，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2重復(fù)性和穩(wěn)定性測(cè)定

采用批內(nèi)和批間差異進(jìn)行確定。ELISA和ECL兩種檢測(cè)方法分別對(duì)低、中、高值質(zhì)控品進(jìn)行精密度試驗(yàn)，每份標(biāo)本連續(xù)測(cè)定20 次，計(jì)算均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，求批內(nèi)變異系數(shù)(coefficient variable，CV)值。每份標(biāo)本每日測(cè)定1 次，連續(xù)測(cè)定20 天，計(jì)算均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差，求批間CV 值，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)在AFP檢測(cè)上，ECL較ELISA重復(fù)性好、穩(wěn)定性高。

2.3ELISA和ECL相關(guān)性分析

對(duì)200例患者分別同時(shí)采用ELISA和ECL檢測(cè)AFP，結(jié)果表明ELISA和ECL兩種檢測(cè)方法在AFP<500μg/L相關(guān)性好(r=0.955，95%CI 0.943-0.968);當(dāng)AFP>500μg/L時(shí)，兩種相關(guān)性差(r=0.401，95%CI 0.343-0.455)。

3討論

近幾十年來(lái)由于環(huán)境污染以及不健康的生活方式，癌癥發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。目前對(duì)惡性腫瘤防治的首要原則為早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。血清腫瘤標(biāo)志物含量的檢測(cè)是一項(xiàng)非侵襲性檢查方法，日益受到醫(yī)學(xué)界的廣泛重視，成為腫瘤患者早期診斷的重要輔助檢查手段之一，故腫瘤標(biāo)志物測(cè)檢方法的敏感性、穩(wěn)定性和重復(fù)性對(duì)早期腫瘤的篩查和診斷至關(guān)重要。

本研究比較了ELISA和ECL對(duì)AFP檢測(cè)的穩(wěn)定性、敏感性、重復(fù)性及兩者的相關(guān)性。兩法比較，ECL具有如下優(yōu)點(diǎn):

3.1ECL具有較好的穩(wěn)定性:ECL 是一種特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng)， 包括了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光2個(gè)過(guò)程。發(fā)光底物以二價(jià)的三聯(lián)吡啶釕作為標(biāo)記物，在三丙胺反應(yīng)物參與下，被電極激發(fā)而迅速發(fā)光，因此具有較好的穩(wěn)定性。

3.2ECL具有較高的敏感性:在AFP<500μg/L時(shí)，ELISA和ECL檢測(cè)法對(duì)AFP的檢測(cè)敏感性的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并且兩者相關(guān)性好(r=0.9553);當(dāng)AFP>500μg/L時(shí)，ECL敏感性好于ELISA，兩者差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。近年來(lái)ECL檢測(cè)采用磁珠包被技術(shù)，由于磁珠體積小，可以吸附更多的抗體和抗原，使得ECL的檢測(cè)靈敏度得到進(jìn)一步的提高。

3.3ECL具有較好的重復(fù)性:由表2可見(jiàn)ECL在質(zhì)控品低、中、高三個(gè)級(jí)別中批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于ELISA，提示ECL與ELISA相比，具有較好的重復(fù)性。在臨床檢驗(yàn)中采用ECL檢測(cè)AFP，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線可以穩(wěn)定大約20天，無(wú)需如ELISA每批檢測(cè)都需要重新制作檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，且ELISA存在受人工操作影響大的問(wèn)題[4]。

隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，以及生化檢測(cè)儀器和技術(shù)的更新，電化學(xué)發(fā)光法的應(yīng)用實(shí)現(xiàn)了免疫測(cè)定的自動(dòng)化，具有結(jié)果穩(wěn)定可靠、敏感性高、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)，顯示出具有良好的應(yīng)用前景。本研究提示在早期原發(fā)性肝癌篩查時(shí)，可采用ECL檢測(cè)法，同時(shí)對(duì)于基層醫(yī)院，對(duì)AFP濃度值較低者，也可采用經(jīng)濟(jì)、敏感性好的ELISA法。

參考文獻(xiàn):

[1] Okura H.Usefulness of tumor marker in early diagnosis. Nippon Naika Gakkai Zasshi， 2005，94:2479-2485.

[2] Duffy MJ. Role of tumor markers in patients with solid cancers: A critical review. Eur J Intern Med， 2007，18:175-184.

[3] Wiwanitkit V. Alpha fetoprotein for screening for hepatocellular cancer in populations with viral hepatitis B: an appraisal of Thai reports. Asian Pac J Cancer Prev， 2005，6:535-536.

[4] 林英，柳麗娟，林秀珍.熒光酶免定量測(cè)定甲胎蛋白的臨床評(píng)價(jià).國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，27(2):182-184.

(收稿日期2009-05-13)