[摘要] 目的 重組構(gòu)建hING4(人ING4)氨基酸序列。方法 運(yùn)用定點(diǎn)突變技術(shù)，在鼠ING4的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)兩對(duì)突變引物P1、P2和P3、P4及全長(zhǎng)ING4上下游引物P5、P6，通過(guò)四輪PCR，將mING4基因序列進(jìn)行人源化改造，獲得了編碼hING4氨基酸的基因序列。將獲得酶切目的基因片段，連接到轉(zhuǎn)移載體pAdTrack-CMV上，形成重組轉(zhuǎn)移載體pAdTrack -CMV-ING4。重組轉(zhuǎn)移載體經(jīng)PmeI酶切后與pAdEasy-1腺病毒載體在BJ5183大腸桿菌中同源重組，得到重組腺病毒載體pAdeasy-1-pAdTrack-CMV-ING4，經(jīng)PacI酶切后脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染QBI-293A包裝細(xì)胞，獲得重組腺病毒Ad-ING4。結(jié)果 測(cè)序和RT-PCR結(jié)果表明hING4基因構(gòu)建成功。結(jié)論 hING4基因重組腺病毒載體構(gòu)建成功。

[關(guān)鍵詞] ING4基因;點(diǎn)突變;腺病毒;載體;基因治療

[中圖分類號(hào)] R34[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-9701(2009)32-18-03