時(shí)衛(wèi)東　袁步娟

【摘要】 目的 建立高效液相色譜法測定咪康唑酊含量的方法。方法 采用Shim-packCLC-ODS十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(6.0 mm ×150 mm，5μm),柱溫30℃，以乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液（42.55∶42.55∶15）為流動(dòng)相，流速為1.0 ml/min，檢測波長為230 nm。結(jié)果 在40~800 μg/ml濃度范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 7。平均回收率為99.87%，RSD為0.46%。硝酸咪康唑與其他雜質(zhì)峰的分離度均符合要求。結(jié)論 本方法簡便專屬，準(zhǔn)確可靠，適用于咪康唑酊的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；咪康唑酊；含量測定 お

Determination the content of miconazole tincture by HPLC SHI Wei-dong，YUAN Bu-juan. Jiangsu Institute of Drug Control, Yancheng224002, China

【Abstract】 Objective To establish a practical reversed-phase high performance liquid chromatography method to determine miconazole tincture. Methods A Shim-pack CLC-ODS C18column(6.0 mm ×150 mm，5 μm) was adopted and the column temperature was maintained at 30℃. The mobile phase was a mixture of acetonitrile-methanol-0.5% ammonium acetate(42.5:42.5:15) and the flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was at 230 nm. Results The calibration curves were linear within the range of 40~800 μg/ml(r=0.999 7)respectively. The average recoveries of miconazole nitrate were 99.87% respectively, relared standard deviation(RSD) were 0.46%. The resolution between the respective peaks of Miconazole Nitrate and the other peaks conformed to the requirements. Conclusion This method is simple, sensitive, accurate, and suitable for the quality control of miconazole tincture.

【Key words】 HPLC； Miconazole tincture；Determination

咪康唑酊是醫(yī)院臨床常用的外用制劑,其主要成分為硝酸咪康唑。硝酸咪康唑具有廣譜抗真菌作用，具有抗皮膚真菌、酵母菌活性，對某些革蘭氏陽性球菌和桿菌也有效。咪康唑?qū)ζつw真菌和酵母菌感染中常出現(xiàn)的瘙癢癥狀具有非常迅速的作用,其作用機(jī)制為此藥與真菌細(xì)胞膜結(jié)合，能抑制真菌麥角甾醇的生物合成，從而改變細(xì)胞膜脂質(zhì)成分的組成，改變了真菌細(xì)胞的通透性從而發(fā)揮其抗真菌的作用。咪康唑的局部用藥可用于治療皮膚念珠菌病、念珠菌外陰陰道炎、體癬、股癬、足癬、花斑癬等^[1]。外用可治療皮膚癬菌引起的淺部真菌感染, 經(jīng)過20余年的使用，其臨床療效已得到廣大患者的認(rèn)可。本制劑中的主要輔料二甲基亞砜（DMSO）作為硝酸咪康唑的溶媒，能充分溶解硝酸咪康唑，同時(shí)也是一種滲透性保護(hù)劑，能夠降低細(xì)胞冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，減輕自由基對細(xì)胞損害，改變生物膜對電解質(zhì)、藥物、毒物和代謝產(chǎn)物的通透性，有助于藥物向人體滲透，可見使用咪康唑酊比搽咪康唑霜或硝酸咪康唑乳膏(達(dá)克寧)療效要快，效果要好。原標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀和鑒別等質(zhì)量控制項(xiàng)目，沒有含量測定項(xiàng)^[2]，國內(nèi)外文獻(xiàn)也未見報(bào)道。為了控制咪康唑酊的質(zhì)量，確保該制劑的療效，本研究以處方中的主要有效成分硝酸咪康唑?yàn)槎靠刂浦笜?biāo)，參照中國藥典2005年版采用反相高效液相色譜法測定咪康唑酊的含量，方法簡便專屬，準(zhǔn)確可靠，精密度和穩(wěn)定性均良好^[3]。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀(美國Waters公司)，Waters 2996型PDA檢測器，Empower數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；乙腈、甲醇為色譜純，醋酸銨為分析純；水為超純水（南京易普易達(dá)科技發(fā)展有限公司純水機(jī)生產(chǎn)）；硝酸咪康唑?qū)φ掌?中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100213-200705，105℃干燥2 h后使用，含量為99.7％)；咪康唑酊(某疾病預(yù)防控制中心，批號(hào)為070312，070313，070314，070927，071028)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件 色譜柱Shim-pack CLC-ODS 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(6.0 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨溶液（42.55∶42.55∶15），流速為1.0 ml/min；檢測波長為230 nm；進(jìn)樣量為20 μl；柱溫為30℃。理論塔板數(shù)按硝酸咪康唑峰計(jì)算不低于2000。

2．2 對照品溶液與供試品溶液的制備

2．2．1 對照品溶液 取硝酸咪康唑?qū)φ掌?05℃干燥2 h，精密稱定適量，置50 ml量瓶中，加甲醇適量振搖溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取適量置量瓶中，加甲醇制成1 ml含0.4 mg的溶液，搖勻，作為對照品溶液。

2．2．2 供試品溶液 精密量取本品2 ml（相當(dāng)于硝酸咪康唑40 mg），置100 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2．2．3 空白對照溶液 以相同的處方比例，制得不含硝酸咪康唑的空白樣品。按“2．2．2”項(xiàng)下方法制成空白對照溶液。

2．2．4 測定方法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μl按“2．1”色譜條件注入液相色譜儀進(jìn)行分析，根據(jù)色譜峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品含量。結(jié)果表明供試品色譜圖中呈現(xiàn)與硝酸咪康唑?qū)φ掌繁Ａ魰r(shí)間相應(yīng)的色譜峰，而空白對照無干擾。見圖1。

2．3 線性關(guān)系考察 精密稱取硝酸咪康唑?qū)φ掌?0 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；精密量取對照品貯備液1，1，2，5，8，10 ml分別置20，10，10，10， 10，10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，進(jìn)樣，記錄峰面積。以對照品濃度（C）為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=4.304×104C+1.171×105，r=0．9997。結(jié)果表明硝酸咪康唑在40~800 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2．4 精密度試驗(yàn) 精密量取線性關(guān)系考察項(xiàng)下的對照品貯備液4，5，6 ml，分別置于10 ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，在上述色譜條件下，分別連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的RSD(n=5)分別為0．62％，0．35％，0．71％。表明該方法精密度良好。

2．5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 將對照品溶液及供試品溶液室溫放置，分別在0，1，2，4，6，8 h進(jìn)樣20 μl測定1次，結(jié)果表明對照品溶液及供試品溶液在8 h內(nèi)峰面積無明顯變化，RSD均小于1．5％。溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2．6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同批號(hào)樣品6份，按“2．2．2”項(xiàng)下方法操作,制得6份同批樣品的供試品溶液，各吸取20 μl進(jìn)樣，計(jì)算含量，RSD為0．83％，結(jié)果表明重現(xiàn)性較好。2．7 回收率試驗(yàn) 精密量取同一已知含量樣品(批號(hào)為070312)適量加甲醇制成每毫升含4 mg的溶液，精密量取1 ml共6份分別加入10 ml的量瓶中，再分別精密加入上述對照品貯備液(803 μg/ml) 1．0,2．0，3．0，4．0，5．0，6．0 ml，照“2．2．2”項(xiàng)下操作，并按“2．1”色譜條件測定。結(jié)果見表1，平均回收率為99．87％，RSD為0．46％(n=6)。

3 樣品測定

按“2．2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定咪康唑酊(批號(hào)為070312，070313，070314，070927，071028)中硝酸咪康唑含量，色譜圖見圖1，含量測定結(jié)果見表2。五批樣品中硝酸咪康唑的標(biāo)示百分含量均在95.0％~105.0％范圍內(nèi)，RSD均小于1．5％。見表2。

4 討論

本文所述反相高效液相色譜法簡便專屬，不受輔料及其他成分影響。

咪康唑酊的乙醇含量對硝酸咪康唑的溶解、成品的性質(zhì)穩(wěn)定以及治療效果等有重要影響。為保證該制劑的質(zhì)量，制備過程中應(yīng)注意乙醇濃度，而且要嚴(yán)格操作，一定要先把硝酸咪康唑溶解在處方量的二甲基亞砜中，如果不能完全溶解，那就采用長時(shí)間振蕩溶解的辦法，只有當(dāng)硝酸咪康唑完全溶解于二甲基亞砜后，才能加入甘油、乙醇等。

咪康唑酊應(yīng)是澄明液體,久置后易發(fā)生變化,如成品顏色和含量的變化、溶劑濃度的變化、臭和味的變化、產(chǎn)生沉淀等，所以，一般將其分裝在棕色玻璃容器中，密封貯藏于陰涼處^[4]。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 國家藥典委員會(huì).臨床用藥須知（化學(xué)藥與生化藥卷）.人民衛(wèi)生出版社,2005：12.

［2］ 南京市醫(yī)院制劑規(guī)范,1989：9.

［3］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典.化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

［4］ 中國醫(yī)院制劑規(guī)范.中國醫(yī)藥科技出版社,1994.