[摘要] 目的 探索紅細(xì)胞在冰凍解凍過(guò)程中形態(tài)體積的動(dòng)態(tài)變化情況，尋求科學(xué)的冰凍解凍程序。方法 通過(guò)測(cè)定觀察紅細(xì)胞在冰凍、解凍洗滌過(guò)程中的體積和形態(tài)，并運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，研究紅細(xì)胞的變化規(guī)律。結(jié)果 紅細(xì)胞在冰凍解凍過(guò)程中體積由大逐漸變小直至恢復(fù)正常，形態(tài)由大刺毛細(xì)胞或大球形細(xì)胞逐漸恢復(fù)正常紅細(xì)胞的圓盤狀。結(jié)論 隨著紅細(xì)胞冰凍解凍過(guò)程的順次進(jìn)行，紅細(xì)胞體積和形態(tài)逐漸恢復(fù)正常。

[關(guān)鍵詞] 紅細(xì)胞冰凍; 紅細(xì)胞解凍; 細(xì)胞體積; 洗滌

[中圖分類號(hào)] R197.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2009)23-113-02

紅細(xì)胞的冰凍保存解決了特殊血型血液和自體血液長(zhǎng)期儲(chǔ)存的問(wèn)題，加入細(xì)胞內(nèi)冰凍保護(hù)劑甘油后，紅細(xì)胞在-80℃條件下可保存10年，臨床使用前要做復(fù)蘇、洗滌去除冰凍保護(hù)劑的處理[1]。本研究著重于觀察分析紅細(xì)胞冰凍解凍過(guò)程中各步驟細(xì)胞形態(tài)體積的動(dòng)態(tài)變化情況，為紅細(xì)胞解凍過(guò)程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的操作提供事實(shí)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

衡水市中心血站Rh陰性紅細(xì)胞冰凍保存、Rh陰性冰凍紅細(xì)胞解凍后供應(yīng)臨床各20例。

1.2 工藝流程

1.2.1 紅細(xì)胞的冰凍 加入57.1%的甘油，使甘油在紅細(xì)胞中的濃度達(dá)40%，于-80℃冰箱冰凍保存。

1.2.2 一洗(第一遍洗滌紅細(xì)胞) 于38～40℃水浴解凍紅細(xì)胞，然后依次加入濃鹽水、羥乙基淀粉，離心棄去上清液。

1.2.3 二洗(第二遍洗滌紅細(xì)胞) 依次加入羥乙基淀粉、生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.4 三洗(第三遍洗滌紅細(xì)胞)加入生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.5 四洗(第四遍洗滌紅細(xì)胞) 加入生理鹽水洗滌，離心棄去上清液。

1.2.6 懸浮 紅細(xì)胞用生理鹽水懸浮后供應(yīng)臨床。

1.3 方法

在工藝過(guò)程中紅細(xì)胞冰凍前、各洗滌過(guò)程離心棄去上清液前、生理鹽水懸浮后分別取樣，用顯微鏡和血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀觀察檢測(cè)紅細(xì)胞形態(tài)體積的動(dòng)態(tài)變化，各樣本相互對(duì)照研究并與正常紅細(xì)胞對(duì)照研究。

2 結(jié)果

流程各階段取樣，與正常人紅細(xì)胞體積(90fL)[2]作對(duì)比分析，結(jié)果見表1。將各階段紅細(xì)胞體積相互對(duì)比觀察，分析細(xì)胞大小變化的顯著性差異，結(jié)果見表2，3。

3 討論

紅細(xì)胞的冰凍、解凍過(guò)程是一個(gè)比較復(fù)雜的過(guò)程，涉及細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)的變化、功能的恢復(fù)等。通過(guò)與正常紅細(xì)胞對(duì)照分析，紅細(xì)胞在加入冰凍保護(hù)劑和解凍洗脫甘油過(guò)程一洗——三洗后的紅細(xì)胞體積都大于正常，四洗和懸浮后的紅細(xì)胞體積恢復(fù)正常。通過(guò)顯微鏡觀察，紅細(xì)胞的形態(tài)由加入甘油后的大刺毛細(xì)胞或大球形細(xì)胞逐漸恢復(fù)至圓盤狀。形態(tài)大小的恢復(fù)是決定其輸入人體后發(fā)揮正常生理功能的基礎(chǔ)。

紅細(xì)胞在加入甘油后體積與解凍第一次洗滌后的體積無(wú)明顯變化，顯微鏡下，其形態(tài)也無(wú)明顯變化。在這個(gè)過(guò)程中，紅細(xì)胞內(nèi)的滲透壓變化很大，但形態(tài)體積基本無(wú)變化，說(shuō)明紅細(xì)胞在加入甘油后已處于高度膨脹狀態(tài)，所以在甘油的加入過(guò)程和解凍時(shí)第一次洗滌過(guò)程，液體的加入速度一定要慢，并有足夠的平衡時(shí)間，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的平衡，避免造成紅細(xì)胞的破裂。一洗——四洗過(guò)程中相互之間細(xì)胞體積的變化比較顯著，在此過(guò)程中紅細(xì)胞體積由大逐漸變小，四洗和懸浮后紅細(xì)胞之間，體積無(wú)明顯差異，說(shuō)明四洗后紅細(xì)胞體積已恢復(fù)正常。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 王培華. 輸血技術(shù)學(xué)[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社，1998:68-70.

[2] 全國(guó)衛(wèi)生專業(yè)資格考試專家委員會(huì). 2008年全國(guó)衛(wèi)生資格考試指導(dǎo)——臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與技術(shù)(中級(jí))[M]. 北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:20.

(收稿日期:2009-03-14)