[摘要] 目的 研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C（VEGF-C）及Podoplanin在食管癌組織中的表達(dá)及意義。方法 取臨床手術(shù)切除的50例食管癌組織，用免疫組化方法檢測(cè)食管癌中VEGF-C及Podoplanin的表達(dá)情況。結(jié)果 在食管癌的癌細(xì)胞中可見(jiàn)VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性顆粒主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿內(nèi)，并且進(jìn)展期食管癌中VEGF-C表達(dá)明顯高于早期，VEGF-C的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05），而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0.01）。Podoplanin只表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)展期食管癌組織微淋巴管密度（LMVD）明顯高于早期食管癌組織（P＜0.01）。結(jié)論食管癌癌細(xì)胞VEGF-C的表達(dá)與腫瘤進(jìn)展呈正相關(guān)，提示VEGF-C可促進(jìn)食管癌組織淋巴管生成，從而引起癌細(xì)胞經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移。Podoplanin可作為淋巴管的特異性標(biāo)記物之一。

[關(guān)鍵詞] VEGF-C；Podoplanin；食管鱗癌

[中圖分類號(hào)] R735.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2009）12-05-02

VEGF-C and Podoplanin in Expressing of Esophageal Carcinoma Organization

JI Liang1 SHA Feng1 MA Wenhao2 XU Hao1 ZHANG Peng1YAO Lije1LI Yulan3JI Haibo3△HUANG Wei4△

1. Qiqihar Medical University Anthropology Institute，Heilongjiang 161006； 2. The First Stomatological Hospital of Qiqihar City，Heilongjiang 161006； 3. Haerbin Medical University Anthropology Institute， Haerbin 150086； 4. Qiqihar Medical University Grade-06，Heilongjiang 161006

[Abstract] Objective To Study the expression and clinical significance of VEGF-C and Podoplanin in esophageal carcinoma organizations. Methods Taking 50 examples esophageal carcinoma organizations of clinical surgery，and making use of immunohistochemistry measures to detect VEGF-C and podoplanin of esophageal carcinoma. Results Positive expression of VEGF-C can be found in cancer cell of esophageal carcinoma，positive particles lies mainly in ndochylema of tumour cell，further expression of VEGF-C obviously top the nonage in advanced esophageal carcinoma， expression of VEGF-C have nothing to do with gender and age（P＞0.05）， but was closely related to have the lymph node metastasis or not（P＜0.01）. Podoplanin is expressed only in lymph-vessel bast cell， the advanced time cancer of the esophagus progressing organizes obvious tiny lymph-vessel density（LMVD） cancer of the esophagus higher than early phase organization（P＜0.01）. Conclusion The expression of VEGF-C in the esophagus cancer cell and tumour developing have positive relevance，that shows VEGF-C can promote the lymph-vessel generation in cancer of the esophagus organizes，so to bring cancer cell metastasis through the lymph-vessel.Podoplanin may be one of the lymphatic peculiarity markers.

[Key Words] VEGF-C；Podoplanin；Esophageal squamous cell carcinomas

食管癌是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其最重要的轉(zhuǎn)移途徑是淋巴道轉(zhuǎn)移，但是淋巴道轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚未完全清楚。因此，本文對(duì)食管癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C（Vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）及Podoplanin的表達(dá)進(jìn)行研究，為防治食管癌淋巴道轉(zhuǎn)移提供科學(xué)的理論基礎(chǔ)，從而使其具有很高的實(shí)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料與試劑

取齊齊哈爾市第一醫(yī)院2006~2008年經(jīng)手術(shù)切除并證實(shí)為食管鱗癌的標(biāo)本50例，其中早期22例，進(jìn)展期28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例；男性41例，女性9例；年齡最小35歲，最大82歲。

兔抗人VEGF-C多克隆抗體，兔抗人Podoplanin單克隆抗體，PV9000二步法免疫組化試劑盒均購(gòu)自武漢博士得生物工程有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

將食管癌標(biāo)本在癌周邊區(qū)取材，經(jīng)4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，石蠟切片機(jī)連續(xù)4μm厚度切片，免疫組化染色，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，光學(xué)顯微鏡觀察。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與整理。

2結(jié)果

2.1VEGF-C的表達(dá)

在早期食管癌組織中VEGF-C表達(dá)于癌細(xì)胞胞漿，呈散在的棕黃色顆粒狀，陽(yáng)性率為22.73%（5/22）。在進(jìn)展期食管癌中，VEGF-C也表達(dá)在癌細(xì)胞胞漿，其表達(dá)明顯增強(qiáng)，呈片狀棕黃色顆粒狀（封三圖1），陽(yáng)性率為67.86%（19/28），明顯強(qiáng)于早期食管癌。同時(shí)，經(jīng)χ2檢驗(yàn)證實(shí)，VEGF-C的表達(dá)與患者的性別、年齡無(wú)明顯關(guān)系（P＞0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0.01）。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，VEGF-C的表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。見(jiàn)表1。

2.2Podoplanin的表達(dá)

在食管癌組織中，Podoplanin呈棕黃色線狀陽(yáng)性表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)的管道具有典型毛細(xì)淋巴管的形態(tài)學(xué)特征：由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成、管壁較薄、形態(tài)不規(guī)則，并可見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞核突向腔內(nèi)，可以判定Podoplanin主要表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上，這些陽(yáng)性表達(dá)的淋巴管多位于癌組織周邊區(qū)的間質(zhì)中（封三圖2）。Podoplanin在微血管中未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)。我們?cè)诘捅剁R下先選取早期食管癌組織和進(jìn)展期食管癌組織中微脈管豐富的區(qū)域，然后在200倍視野下計(jì)數(shù)5個(gè)視野的Podoplanin標(biāo)記為陽(yáng)性淋巴管的數(shù)量，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（χ±s）表示，取均值作為微淋巴管密度（LMVD）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，進(jìn)展期食管癌組織LMVD（5.92±1.04）明顯高于早期食管癌組織（2.28±0.67），兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3討論

惡性腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移是腫瘤轉(zhuǎn)移的一種重要方式。VEGF-C作為VEGF家族的重要因子由Joukov[1]等率先報(bào)道，F(xiàn)urodoi等[2]應(yīng)用免疫組化檢測(cè)152例進(jìn)展期大腸癌最深處組織的VEGF-C表達(dá)，多因素分析表明VEGF-C表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響5年生存率的獨(dú)立因素。Jussila[3]認(rèn)為VEGF-C表達(dá)的增多可引起淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的異常分裂和增殖，從而誘導(dǎo)了癌周淋巴管的增生。Isaka等[4]將高表達(dá)VEGF-C的B16F10惡性黑色素瘤細(xì)胞接種到小鼠背部皮膚，發(fā)現(xiàn)瘤灶周邊形成新生淋巴管。有研究認(rèn)為，在食管癌臨床病理因素中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與VEGF表達(dá)有顯著關(guān)系[5]。本文將早期食管癌組織和進(jìn)展期食管癌組織進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)兩者VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率有顯著性差異，表明VEGF-C的表達(dá)隨著食管癌的發(fā)生和進(jìn)展逐漸增強(qiáng)。本文還發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌中VEGF-C的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，而淋巴道轉(zhuǎn)移是食管癌轉(zhuǎn)移的主要途徑。因此，以上提示VEGF-C表達(dá)增強(qiáng)可能導(dǎo)致食管癌組織內(nèi)淋巴管數(shù)量的增加，進(jìn)而VEGF-C的高表達(dá)促進(jìn)癌細(xì)胞的淋巴道轉(zhuǎn)移。

Podoplanin是一種膜性粘蛋白，最初于腎小球足細(xì)胞表面被發(fā)現(xiàn)。牟江洪等[6]研究表明，大腸組織中Podoplanin與CD34沒(méi)有交叉反應(yīng)，證實(shí)兩者分別具有極高的淋巴管和血管特異性；大腸癌邊緣區(qū)域Podoplanin陽(yáng)性的脈管密度與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。周顯禮等[7]認(rèn)為Podoplanin可作為獨(dú)立的癌淋巴管內(nèi)皮特異性標(biāo)記物使用。Veikkola等[8]研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C能促進(jìn)VEGFR-3過(guò)表達(dá)的內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，因此，VEGF-C也具有誘導(dǎo)淋巴管發(fā)生的作用。本研究中觀察到Podoplanin主要表達(dá)食管癌組織周邊區(qū)，陽(yáng)性標(biāo)記為棕黃色的管道，管壁較薄且不規(guī)則，其內(nèi)無(wú)紅細(xì)胞，單層內(nèi)皮細(xì)胞核大且向腔內(nèi)突出，這符合毛細(xì)淋巴管的典型形態(tài)特征。而Podoplanin表達(dá)陰性的管道管壁較厚且規(guī)則，呈圓形或橢圓形，內(nèi)含大量紅細(xì)胞，符合毛細(xì)血管的基本形態(tài)學(xué)特征。我們還觀察到進(jìn)展期食管癌組織周邊微淋巴管密度明顯高于早期食管癌組織，差異有顯著性（P＜0.01），提示腫瘤邊緣增多的淋巴管是癌細(xì)胞經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移的主要通道。

綜上所述，VEGF-C在食管癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，癌細(xì)胞產(chǎn)生的VEGF-C誘導(dǎo)腫瘤周邊區(qū)淋巴管數(shù)量增加，為癌細(xì)胞的淋巴道轉(zhuǎn)移提供必要條件。因此，尋找直接下調(diào)VEGF-C表達(dá)的方法來(lái)抑制腫瘤的淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移，為腫瘤治療提供了新的研究方向，因此Podoplanin可作為淋巴管的特異性標(biāo)記物使用。

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（收稿日期：2009-01-14）