楊曦亮　肖玉秀

(1.武漢科技大學醫(yī)學院，湖北 武漢 430065；2.武漢大學藥學院，湖北 武漢 430072)お

摘 要：目的：建立連錢草藥材中總黃酮成分含量的測定方法。方法：分光光度法。結(jié)果：7個湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量平均為64.78mg?g^-1，三個混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg?g^-1?？傸S酮含量的不同可在一定程度上區(qū)別連錢草和其混淆品。結(jié)論：連錢草的總黃酮含量與其栽培方式、采收時間密切相關；多數(shù)產(chǎn)地的連錢草與其混淆品相比，總黃酮含量顯著增加，故總黃酮的含量測定可作為連錢草真?zhèn)舞b別的參考依據(jù)。

關鍵詞：連錢草；分光光度法；黃酮；含量測定

中圖分類號：R284文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2009）01-0021-03オ

連錢草Herba Glechomae，別名活血丹、銅錢草等，《中國藥典》收載為唇形科植物活血丹Glechoma longituba(Nakai)Kupr的干燥地上部分，具有利濕通淋、清熱解毒、散瘀消腫的功能^[1]，主治尿路感染、尿路結(jié)石、胃及十二指腸潰瘍、黃疸性肝炎、肝膽結(jié)石等癥，在治療膽結(jié)石、跌打損傷及斷肢再造方面有獨特作用^[2-3]。我國連錢草資源極為豐富，除新疆、甘肅、青海、西藏以外其它各省均有連錢草分布^[4]。本實驗^[5-7]測定了10種不同來源連錢草藥材（7種湖北產(chǎn)地連錢草，3種連錢草的混淆品種）中總黃酮的含量，并進行了比較分析，為連錢草藥材的質(zhì)量控制提供了評價依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

UV-2101PC紫外可見分光光度計（日本島津）；CQ250超聲波清洗儀(上海超聲波儀器廠)。

1.2 試藥

蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0080-9705）；亞硝酸鈉(分析純，太倉化工二廠，批號20001201)；三氯化鋁（分析純，中國金山區(qū)興塔美興化工廠，批號990829）；氫氧化鈉（分析純，威爾昆化學試劑有限公司上海華美藥房經(jīng)銷，批號20020130）；連錢草樣品見表1。

2 方法

2.1 對照品溶液的配制

精密稱取120℃常壓干燥至恒重的蘆丁對照品0.0110g，置于100mL容量瓶中，用60mL 60%乙醇超聲溶解（容量瓶密塞），放冷，用60％乙醇定容，得到0.11mg?mL^-1蘆丁對照品溶液。

2.2 供試品溶液的配制

精密稱取經(jīng)干燥的連錢草粉末約0.5g，置100mL具塞容器中，精密加60mL 60%乙醇，密塞，稱重，超聲提取30min。放冷，密塞，再稱重，用60%乙醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

3 結(jié)果與討論

3.1 測定波長的選擇^[7]

精密稱取蘆丁對照品5mg，置于25mL容量瓶中，加60%乙醇約15mL，超聲使其溶解，放冷，加60%乙醇至刻度，搖勻，得蘆丁標準溶液（0.2mg?mL^-1）。精密吸取蘆丁標準溶液8mL，置于25mL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，加三氯化鋁試液1mL，搖勻，放置6min，再加5%的氫氧化鈉10mL，加水至刻度，搖勻，于波長200~800nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在510nm處有一最大吸收峰。精密稱取2g連錢草粗粉，置于具塞錐形瓶中，加50mL 60%乙醇，超聲50min，過濾，取續(xù)濾液，不顯色，直接于波長200~800nm范圍內(nèi)掃描；再取續(xù)濾液1mL，照對照品蘆丁一樣顯色后，于波長200~800nm范圍內(nèi)掃描，發(fā)現(xiàn)在504nm處有一最大吸收峰。見圖1。

3.2 標準曲線

精密量取蘆丁對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0mL，置于10mL容量瓶中，分別加入60%乙醇使成7mL，精密加入5%亞硝酸鈉0.3mL，搖勻，放置6min；精密加入10%三氯化鋁0.3mL，搖勻，放置6min；加入1mol/L的氫氧化鈉2mL，用60%乙醇定容，搖勻，以不加蘆丁對照品溶液其它同法操作得到的溶液作為空白對照，在504nm處測定吸光度。求得回歸方程為：C(mg?mL^-1)=0.075215A+0.001532(r=0.9996，n=6)；蘆丁對照品在0.01~0.07mg?mL^-1范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

3.3 精密度實驗

取蘆丁對照品溶液適量，配成高、中、低三個濃度，每個濃度3份，分別顯色后測定吸收度。結(jié)果表明，測定方法的精密度良好（表2）。

3.4 穩(wěn)定性試驗

取對照品溶液3.0mL，進行顯色，每隔5min測定一次吸收度，共測定至40min，計算總黃酮的平均含量為0.0297mg?mL^-1，RSD=0.96%(n=9)，結(jié)果表明顯色后的溶液在40min內(nèi)穩(wěn)定。

3.5 重復性試驗

取同一產(chǎn)地（湖北武漢）的連錢草粉末5份，每份約0.5g，精密稱定，按“2.2供試品溶液配制”項下的方法提取。精密量取供試品溶液0.5mL，顯色后測定吸收度，測得總黃酮的平均含量為56.67mg?g^-1，RSD=0.68%(n=5)，結(jié)果表明該方法重復性良好。

3.6 加樣回收率試驗

取3批已知總黃酮含量的連錢草粉末（恩施）約0.1g，加入蘆丁對照品適量，精密稱定，按“2.2供試品溶液配制” 項下的方法提取。精密量取供試品溶液1mL，按“3.2”項下方法測定總黃酮的含量，結(jié)果見表3。實驗結(jié)果表明，該測定方法準確性高。

3.7 不同產(chǎn)地連錢草中總黃酮含量測定

取不同產(chǎn)地的連錢草約5g，按“2.2供試品溶液配制”項下的方法提取。精密吸取供試品溶液0.5mL，按“3.2”項下方法測定不同產(chǎn)地連錢草中總黃酮的含量，結(jié)果見表4。

從表4可知，除荊州2外，湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量均高于連錢草混淆品種的總黃酮含量；7個湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量平均為64.78mg?g^-1，三個混淆品的總黃酮含量平均為34.37mg?g^-1?？傸S酮含量的不同可在一定程度上區(qū)別連錢草和其混淆品。

兩種湖北荊州連錢草的產(chǎn)地相同，栽培方式和采收時間不同（家種，5月；野生，8月），但在7個湖北產(chǎn)地連錢草中，荊州1(92.85mg?g^-1)總黃酮含量最高，而荊州2（36.35mg?g^-1）最低。兩個采收時間不同（5月，9月）的湖北恩施野生連錢草中總黃酮含量也有較大差異。除武漢和丹江產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量比較接近外，其它湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量都有一定差異。這說明栽培方式、采收時間和湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長環(huán)境均影響連錢草的總黃酮含量。

4 結(jié)論

七種湖北產(chǎn)地連錢草的總黃酮含量差異較大。連錢草的總黃酮含量不僅與栽培方式、采收時間密切相關，而且湖北省內(nèi)不同地區(qū)的生長環(huán)境對連錢草的總黃酮含量也有影響。 因此在選用連錢草時一定要注意具體產(chǎn)地和用量，以確保療效；同時要合理栽培、采收連錢草。多數(shù)產(chǎn)地的連錢草與其混淆品相比，總黃酮含量顯著增加，故總黃酮的含量測定可作為連錢草真?zhèn)舞b別的參考依據(jù)，對保證其藥材質(zhì)量、指導其栽培生產(chǎn)，以及相關制劑產(chǎn)品的質(zhì)量控制具有重要意義和應用價值。

參考文獻：

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典（一部）［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2005：117.

［2］ 曾細生.用連錢草斷指(肢)再植30例［J］.中國中醫(yī)藥科技，2004,11（2）:125.

［3］ 曹萍,褚小蘭,范崔生.金錢草類中藥的研究概論［J］.江西醫(yī)學院學報，2005，45（1）：110-113.

［4］ 宋?唐慎微.證類本草［M］.北京：華夏出版社,1993：265.

［5］ 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.分光光度法測定連錢草中熊果酸的含量［J］.藥學服務與研究,2003,3(4):268-269.

［6］ 王慶，段金慶，錢大瑋.不同產(chǎn)地連錢草中三菇酸類及黃酮類成分的分析與評價［J］.南京中醫(yī)藥大學學報，2006，2（1）：44-46.

［7］ 祝德秋,羅啟劍,崔嵐.連錢草中總黃酮的含量測定［J］.藥學服務與研究，2003,3(1):62-63.（責任編輯：姜付平）