陳　穎

（上海市普陀區(qū)人民醫(yī)院，上海 200060）お

摘 要：痤瘡為常見的慢性毛囊皮脂腺炎癥性皮膚病，發(fā)病率達(dá)15％以上。青春期男女，可有不同程度的皮損，其臨床表現(xiàn)為黑頭、粉刺、丘疹、膿疤、囊腫、結(jié)節(jié)，并可見癱痕形成。病情較重者需要治療，然而迄今尚無理想的治療藥物，尋找治療痤瘡的有效藥物，成為皮膚美容方面的熱門課題之一。筆者采用高效液相色譜法（HPLC）測定消痤寧乳膏中主要有效成分克林霉素和甲硝哇的含量，并擬定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，進(jìn)行藥效學(xué)研究。

關(guān)鍵詞：消痤寧乳膏；痤瘡；藥效

中圖分類號：R969文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1673-2197（2009）01-0019-02オ

1 材料

1.1 動(dòng)物

昆明小鼠（KM），體重18～22g，雌雄各半；新西蘭大白兔，體重1.5～2.0kg，均由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 儀器

電子分析天平、普通培養(yǎng)箱、厭養(yǎng)發(fā)生袋、厭養(yǎng)發(fā)生罐、病理圖像分析儀、玻璃涂棒。

1.3 試劑

氧氣指示劑、營養(yǎng)肉湯、厭養(yǎng)肉湯、金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌、消痤寧乳膏、巴豆油、瓊脂粉、營養(yǎng)瓊脂、濃媒焦油溶液、維胺酷維E乳膏。

2 方法

2.1 消痤寧乳膏的體外抗菌實(shí)驗(yàn)

2.1.1 藥物的配制 取適量的消痤寧乳膏，精密稱量，吐溫-80溶解，滅菌的營養(yǎng)肉湯稀釋，經(jīng)無菌的0.22 μm過濾器過濾除菌后，無菌的營養(yǎng)肉湯進(jìn)行對倍稀釋法，配制成濃度為0.003～6.25mg含藥培養(yǎng)液。

2.2.2 對金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌的抑菌和殺菌實(shí)驗(yàn) 將金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌分別從斜面培養(yǎng)基接種到肉湯培養(yǎng)液中，置于普通的培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)16～18h；用麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管調(diào)整菌液濃度為1.5×10⁸gCFU/mL，無菌的生理鹽水稀釋成1×10⁶CFU/mL備用。分別取上述濃度的金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌0.1mL分別加至1mL，含不同濃度藥液的試管中于培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)24h后觀察有無渾濁，以不出現(xiàn)渾濁的最低濃度為觀察最小抑菌濃度（MIC），再依次取未渾濁的各管培養(yǎng)物0.1mL分別加入無菌的培養(yǎng)皿中，用玻璃涂棒均勻地涂布，倒置于培養(yǎng)箱35℃培養(yǎng)24h，菌落數(shù)小于5個(gè)的平板中所含最低藥物濃度為最小殺菌濃度（MBC），共做3次平行實(shí)驗(yàn)。

2.2.3 對痤瘡丙酸桿菌（P.Acne）作用的研究 用上述方法將藥物配成 4.9～625μg/mL含藥濃度培養(yǎng)液。將P.Acne在35℃厭氧發(fā)生罐中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)48h，用無菌的生理鹽水稀釋到所需的濃度，取菌液0.1mL加入到體積為1mL的不同濃度的無菌藥液的試管中。置厭氧罐中35℃培養(yǎng)48h，用氧氣指示劑來指示厭氧罐內(nèi)的氧氣含量（當(dāng)氧氣的濃度大于0.5％時(shí)，氧氣指示劑由紫色或紫紅色變成藍(lán)色）。觀察有無渾濁，以不出現(xiàn)渾濁的最低濃度為觀察最小抑菌濃度（MIC），再依次取未見渾濁的試管的培養(yǎng)液0.1mL分別加入到含有6％羊血的厭氧培養(yǎng)基中，用玻璃涂棒將液體均勻地涂布在平皿表面，倒置厭氧罐中，在35℃進(jìn)行培養(yǎng)48h，平板上菌落數(shù)小于5個(gè)的平板中所含最小藥物濃度為最小殺菌濃度（MBC）。

2.1.4 對照管 配成含1％吐溫-80的培養(yǎng)液、含菌液的吐溫-80培養(yǎng)液，含基質(zhì)的培養(yǎng)液、含菌液的基質(zhì)培養(yǎng)液，含藥的培養(yǎng)液以及含菌液的培養(yǎng)液對照管，觀察各對照管是否有細(xì)菌生長。

2.2 對巴豆油致小鼠耳廓炎癥的影響

將昆明小鼠40只，雌雄各半，體重為18～22g，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為：基質(zhì)組、維胺酷維E乳膏（1次/d）、消痤寧乳膏高劑量組（2次/d）、消痤寧乳膏低劑量組（1次/d）。將藥物涂于小鼠右耳廓，左耳作對照，連續(xù)給藥7d，末次給藥后1h，用溫水洗去藥膏，將2％巴豆油混合致炎劑（2％巴豆油、20％無水乙醇、5％蒸餾水和73％乙醚）0.05mL涂在各組小鼠右耳廓以引起炎癥。致炎4h后將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下左右兩耳，6mm打孔器將雙耳相同的部位等面積打下圓耳片，用電子天平稱重，以右耳片重-左耳片重之差為腫脹度，比較組間差異，來評價(jià)藥物對巴豆油混合致炎劑所致耳廓炎癥的影響，用下面公式并計(jì)算用藥組腫脹抑制率。

抑制率=基質(zhì)空白組腫脹度-實(shí)驗(yàn)組腫脹度基質(zhì)空白組腫脹度×100%

2.3 對兔耳實(shí)驗(yàn)性痤瘡模型的治療作用

取新西蘭白兔30只，第一組6只為正常組，不涂任何藥物；余下24只家兔，在左右耳內(nèi)側(cè)面耳管開口處ZcmXZcm范圍，每日涂煤焦油1次，每次0.5mL，連續(xù)2周。將24只大白兔隨機(jī)分為4組，分別為：模型對照組（局部外涂賦形劑，2次/d），消痤寧乳膏高劑量組（局部外涂消痤寧乳膏，2次/d）、消痤寧乳膏低劑量組（局部外涂消痤寧乳膏，1次/d），陽性對照組（維胺酷維E乳膏，2次/d），連續(xù)用藥2周。每日除給藥外，應(yīng)肉眼觀察局部給藥處皮膚的變化：耳厚薄、硬度、粗燥程度、毛囊口有無黑角栓等。末次給藥后24h，用溫水洗去藥膏，取下每只兔耳基本相同的部位皮膚（全層），10％福爾馬林溶液固定后，HE染色后，光鏡下觀察病理組織學(xué)改變，并進(jìn)行顯微照相觀察組織學(xué)變化。

組織學(xué)判定標(biāo)準(zhǔn)：“0”為無粉刺；“＋”為毛囊漏斗部可見少量致密角化物質(zhì)；“＋＋”為毛囊漏斗部可見中等量致密角化物質(zhì)，并向皮脂腺延伸；“＋＋＋”為擴(kuò)張毛囊內(nèi)有廣泛的角化物質(zhì)，與人類開放性粉刺相似。

2.4 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示，SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P＜0.05表示有顯著性意義，P＜0.01表示差異有明顯的顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 消痤寧乳膏體外抗菌作用

（1）對照管細(xì)菌生長情況結(jié)果見表1。

注：-：無細(xì)菌生長；＋：有細(xì)菌生長

說明吐溫-80、培養(yǎng)基液和含藥的培養(yǎng)液都沒有被細(xì)菌污染，細(xì)菌分別能在培養(yǎng)液和含吐溫-80培養(yǎng)液中正常繁殖。

（2）抗菌作用。

表2 消痤寧乳膏的體外抗菌作用

菌種MIC（mg/mL）MBC（mg/mL）

含黃色葡萄球菌0.0240.048

白色葡萄球菌0.0060.098

痤瘡丙酸桿菌0.0200.156

結(jié)果表明，消痤寧乳膏對痤瘡的主要致病菌金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌和痤瘡丙酸桿菌均有一定的抑制和殺滅作用。

3.2 消痤寧乳膏對小鼠耳廓炎癥的抑制作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3所示，低劑量組可明顯抑制巴豆油誘發(fā)小鼠耳片的腫脹；高劑量組對小鼠耳片腫脹抑制率達(dá)41.18％；陽性對照組對小鼠耳片腫脹抑制率為23.53％。

表3消痤寧乳膏對小鼠耳廓炎癥的抗炎作用

菌種腫脹度（mg）抑制率（%）

基質(zhì)空白組18.1±2.70

維胺酯維E乳膏14.4±1.2*15.29

消痤寧乳膏低劑量13.0±2.7*23.53

消痤寧乳膏高劑量10.1±0.6*41.18

注：與基質(zhì)空白組比較：*P＜0.01。

3.3 對兔耳實(shí)驗(yàn)性痤瘡模型的治療作用

（1）正常組。肉眼所見：正常兔耳菲薄、柔軟，有良好的透光度，可見清晰的毛細(xì)血管網(wǎng)，兔耳管開口處可見整齊排列的毛囊和纖細(xì)的毛發(fā)；組織學(xué)：正常兔耳表皮較薄，一層顆粒層，約2～4層棘細(xì)胞層，可見毛囊，真皮、表皮交界清楚，由于毛管較小，切面中常見不到。

（2）模型組。肉眼所見：在涂煤焦油過程中，局部組織明顯增厚、變硬，毛囊口有黑色角拴，成黑頭粉刺狀，揭開涂厚的煤焦油痂時(shí)，可見附著其上毛囊角栓，其下可見開放增大的毛囊口，隆起呈丘疹狀；組織學(xué)：表皮增厚，出現(xiàn)角化過度，棘細(xì)胞層肥厚，毛囊皮脂腺增大明顯，可見角化物質(zhì)，毛囊漏斗部充滿角化物質(zhì)并擴(kuò)大成壺狀，真皮上層明顯毛細(xì)血管擴(kuò)張，彌漫散在炎性細(xì)胞浸潤，另有游離的炎癥細(xì)胞。

（3）基質(zhì)組。不管是肉眼還是組織學(xué)，與模型組相似，皮膚病變也無明顯改善，局部組織明顯增厚、變硬，毛囊口有黑色角拴，表皮增厚，毛囊口擴(kuò)張，毛囊有大量角化物。

（4）給藥組。肉眼所見：整個(gè)皮片厚度可見變薄，柔軟度有所增加，局部毛囊口角栓及粉刺減少，丘疹變平減少，且改善程度呈劑量依賴性。

（5）胺醋維E乳膏陽性對照組。與給藥組在肉眼和組織學(xué)上大部分相似，毛囊口縮小，有疏松角化物質(zhì)充填，真皮炎癥細(xì)胞浸潤也有所減少。

3.4 在整個(gè)兔耳痤瘡造模過程中組織學(xué)改變

表4和表5結(jié)果表明消痤寧乳膏涂搽兔耳角化部位的皮膚，可減輕皮膚毛囊皮脂腺導(dǎo)管的過度角化和表皮層的增厚，組織病理學(xué)改善呈劑量依賴性。

4 結(jié)論

經(jīng)過藥效學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證，表明消痤寧乳膏可抑制兔耳實(shí)驗(yàn)性痤瘡模型的毛囊上皮角化過度和皮脂腺增生；可抑制引起痤瘡的白色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌和痤瘡丙酸桿菌等主要致病菌；也可抑制巴豆油混合致炎物質(zhì)引起的小鼠耳廓炎癥反應(yīng)。

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（責(zé)任編輯：姜付平）