李　慧　李　威　王　倩　宋和存　郭　毅

摘要：人胚胎干細(xì)胞的基因修飾對(duì)于干細(xì)胞在體外的調(diào)控及促進(jìn)干細(xì)胞在治療方面的應(yīng)用具有很高價(jià)值．探討了以艾滋病病毒－1為基礎(chǔ)的慢病毒栽體轉(zhuǎn)導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞，表達(dá)2種或3種轉(zhuǎn)移基因的可行性和功效。應(yīng)用腦心肌炎病毒的內(nèi)部核糖體進(jìn)入住點(diǎn)(IRES)序列和，或口蹄疫病毒(FMDV)裂解因子2A構(gòu)建雙順反子和三順反子慢病毒載體，綠色熒光蛋白(eGFP)和06-甲基鳥嘌呤－DNA．甲基轉(zhuǎn)移酶作為檢測(cè)基因．抗嘌呤基因(嘌呤－N－甲基轉(zhuǎn)移酶；PAC)作為選擇基因，轉(zhuǎn)染人胚胎干細(xì)胞后經(jīng)過嘌呤選擇．通過流式細(xì)胞技術(shù)和蛋白印跡雜交方法檢測(cè)eGFP和MGMT的表達(dá)．多基因慢病毒栽體可以同時(shí)將2或3個(gè)基因轉(zhuǎn)移到人胚胎干細(xì)胞．多順反子慢病毒栽體轉(zhuǎn)導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞后經(jīng)過嘌呤選擇，可以使轉(zhuǎn)移基因高效、均勻的表達(dá)。在人胚胎干細(xì)胞的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究方面具有重要意義。