王德才 鄂春華

[摘要] 建立注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法研究.參照《中國藥典》2005年版二部附錄"細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法"進(jìn)行干擾試驗(yàn)和結(jié)果判斷.樣品最大無干擾濃度為10mg/ml。注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉可采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] 注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法;凝膠法;稀釋倍數(shù);限值;干擾試驗(yàn)

[中圖分類號] R978.1+1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1004-8650(2009)05-115-02

注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉是一種廣譜抗菌新藥,活性強(qiáng)。現(xiàn)參照《中國藥典》2005年版二部附錄XIE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和附錄XLXF細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則,研究注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉中細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)的干擾情況,建立其細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法。

1試藥與儀器

注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉供試品(批號:20080106,20080107,20080108。規(guī)格,1.0g/瓶,×××藥業(yè)有限公司)。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(WSE,批號:2008-2。效價(jià):180EU/支。中國藥品生物制品檢定所。鱟試劑TALA(批號:20080414,λ=0.25 EU/ml,規(guī)格:0.1ml/支,廈門鱟試劑廠);TALB(批號:20080205,λ=0.25 EU/ml,規(guī)格:0.1ml/支,湛江博康海洋生物制品有限公司);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(批號:20080301,內(nèi)毒素含量低于0.015 EU/ml,規(guī)格:10ml/支,上海信誼制藥廠)。超凈工作臺(蘇州凈化設(shè)備有限公司)。ZH-2型漩渦混合器(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。試驗(yàn)所用玻璃器皿均經(jīng)250℃干烤1小時(shí)以清除可能存在的內(nèi)毒素。

2方法與結(jié)果

2.1鱟試劑靈敏度復(fù)核

按《中國藥典》2005年版二部附錄XIE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行。結(jié)果見表1,兩批鱟試劑的靈敏度測定值λc均在0.5λ-2.0λ之間,符合規(guī)定。

2.2供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)確定

L=K/M。式中K為按規(guī)定的給藥途徑不同,人每千克體重每小時(shí)可接受的內(nèi)毒素最大劑量,注射劑的K=5EU/(kg·h)。M為人體每千克體重每小時(shí)給藥的最大劑量。參考使用說明書以頭孢哌酮鈉計(jì)。人用最大劑量為3g/(kg·h)。人體重按60kg計(jì),M=3g/(kg·h)/60kg=50mg/(kg·h),L=K/M=5EU/(kg·h)/50mg/(kg·h)=0.1 EU/mg。所以從嚴(yán)確定為L=0.025 EU/mg(以頭孢哌酮鈉計(jì))。

2.3最大有效稀釋倍數(shù)

供試品稀釋倍數(shù)計(jì)算;按公式MVD=CL/λ計(jì)算,其中L為細(xì)菌內(nèi)毒素限值0.025 EU/mg,λ為鱟試劑的標(biāo)示靈敏度,目前市售鱟試劑靈敏度在0.5-0.03 EU/ml,MVD在20.0-1.5 mg/ml之間。

2.4供試品干擾試驗(yàn)

2.4.1供試品干擾試驗(yàn)取供試品,加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水使溶解,分別制成含頭孢哌酮鈉80、40、20、10、5、2.5mg/ml的溶液(記此系列溶液為NPC),并用其分別將細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成含0.5 EU/ml的系列濃度(記此系列溶液為PPC),用兩批鱟試劑(λ=0.25EU/ml)考察每個(gè)供試品濃度下的干擾情況,并設(shè)陰性對照和陽性對照。結(jié)果見表2。預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明頭孢哌酮鈉在20mg/ml以下濃度時(shí),對鱟試劑的凝集反應(yīng)無增強(qiáng)或抑制作用。

2.4.2供試品干擾試驗(yàn)根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果,用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和10mg/ml供試品(以頭孢哌酮鈉計(jì))分別將內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成0.5、0.25、0.125、0.0625 EU/ml的一系列濃度,分別用2個(gè)廠家的鱟試劑同時(shí)考察3批供試品每個(gè)濃度下的干擾情況,每一濃度做4管,同時(shí)作陰性對照和供試品陰性對照,結(jié)果見表3、表4,干擾試驗(yàn)結(jié)果表明;注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉10mg/ml(以頭孢哌酮鈉計(jì))對鱟試劑的凝集反應(yīng)無增強(qiáng)或抑制作用。

3討論

TAL用于細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測具有操作簡單,靈敏度高,重現(xiàn)性好,實(shí)用性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。一種新藥是否可用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法替代熱原檢查法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測,首先要證實(shí)該樣品本身是否存在干擾因素,進(jìn)行干擾試驗(yàn)的目的就是要確定該品種在何種有效濃度范圍內(nèi)進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時(shí)既可克服干擾因素,又能客觀反映其所含的細(xì)菌內(nèi)毒素量是否符合規(guī)定限值。

本試驗(yàn)用2個(gè)廠家的TAL對3批注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉供試品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn),結(jié)果表明其最大不干擾濃度為10mg/ml,其內(nèi)毒素限值為以頭孢哌酮鈉計(jì)每1mg含內(nèi)毒素量應(yīng)小于0.025 EU/mg。試驗(yàn)中3批供試品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果符合規(guī)定。

因此我認(rèn)為注射用頭孢哌酮鈉舒巴坦鈉可以用細(xì)菌內(nèi)毒素法進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測。

參考文獻(xiàn):

[1] 中國藥典[s]二部.2005:附錄XIE

[2] 中國藥典[s]二部.2005:附錄XIXF

(收稿日期2009-03-20)