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(1.中山大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心,廣東 廣州 510089;2.中山大學(xué) 中山醫(yī)學(xué)院2004級(jí),廣東 廣州 510089；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)與寄生蟲學(xué)教研室,廣東 廣州 510006)

根據(jù)中醫(yī)理論，過量或長(zhǎng)期服用苦寒的清熱解毒的中藥將損傷脾胃、耗傷正氣，本研究嘗試從腸黏膜組織結(jié)構(gòu)角度探討“苦寒傷胃”藥的機(jī)制，以期為臨床合理使用清熱解毒中藥提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，由中山大學(xué)北校區(qū)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重18～22 g,雌雄不限。

1.1.2 藥物與試劑 鹽酸林可霉素注射液(天方藥業(yè)股份有限公司出品)、黃連解毒湯(黃連、黃芩、黃柏、梔子，中山一院藥房提供，常規(guī)煎制，濃縮至1 g/mL生藥量,4℃保存?zhèn)溆?。

1.1.3 主要設(shè)備 YXQ-LS-50SⅡ立式壓力蒸汽滅菌器、潔凈工作臺(tái)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、FA2004N電子天平、BX51型熒光明場(chǎng)數(shù)碼顯微鏡，以上設(shè)備由中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心提供。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組及給藥 昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為4組：正常組、抗生素組、黃連解毒湯高劑量組、黃連解毒湯低劑量組，每組10只?？股亟M給予鹽酸林可霉素灌胃，每日60 mg；黃連解毒湯高劑量組給予黃連解毒湯灌胃，每日0.15 g；黃連解毒湯低劑量組給予黃連解毒湯灌胃，每日0.075 g；正常組給予生理鹽水灌胃,每日0.6 mL。各組均灌胃14 d。

1.2.2指標(biāo)檢測(cè) 每天觀察和記錄各組小鼠外形、活動(dòng)、飲食、排便情況，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第1、7、14 d稱量和記錄小鼠體重。將小鼠斷椎處死，固定于解剖板上，常規(guī)消毒，正中剪開腹腔，找出回盲部，無菌手法取出盲腸，去除盲腸內(nèi)容物，用無菌生理鹽水沖洗干凈后用滅菌濾紙吸干水分，稱量各組小鼠盲腸重量，計(jì)算盲腸指數(shù)。盲腸指數(shù)=盲腸重量/體重。取回腸0.5 cm(距回盲交界處2 cm)，用中性甲醛固定，HE染色，作組織切片觀察。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠的一般情況 正常組小鼠飲食正常，行動(dòng)活躍，被毛平整光滑，糞便正常?？股亟M小鼠出現(xiàn)類似脾虛癥狀，攝食量下降，精神萎靡，行動(dòng)遲緩，被毛無光澤，畏寒扎堆，大便稀濕。高劑量組小鼠出現(xiàn)脾虛癥狀，攝食量下降，行動(dòng)較遲緩，被毛無光澤，大便稀濕。低劑量組小鼠飲食正常，行動(dòng)活躍，被毛平整光滑，糞便正常。

2.2 各組小鼠盲腸指數(shù)變化情況 見表1。

表1 各組小鼠盲腸指數(shù)比較

2.3 各組小鼠回腸黏膜變化情況 正常組回腸黏膜上皮完整，腺體排列整齊，其間散在分布杯狀細(xì)胞，絨毛豐富,突入腸腔。黏膜下層散在分布少量炎癥細(xì)胞。上皮未見萎縮、增生、糜爛、壞死。間質(zhì)未見血管充血、水腫、出血。

抗生素組腸黏膜明顯變薄，上皮部分脫落，黏膜細(xì)胞胞質(zhì)濃縮、深染，杯狀細(xì)胞減少，絨毛明顯減少變短，間質(zhì)輕度充血，與正常組比較有明顯差異。

高劑量組鏡下所見與抗生素組相似，黏膜明顯變薄，上皮部分脫落，黏膜細(xì)胞胞質(zhì)濃縮、深染，杯狀細(xì)胞減少，絨毛明顯減少變短，間質(zhì)輕度充血，與正常組比較有明顯差異。

低劑量組腸黏膜上皮完整，腺體排列整齊，可見較多杯狀細(xì)胞，上皮未見萎縮、增生、糜爛、壞死。間質(zhì)未見血管充血、水腫、出血。與正常組相似。

3 討論

從各組小鼠的外形、活動(dòng)、飲食、排便情況以及體重情況來看，抗生素組和高劑量組小鼠已出現(xiàn)類似中醫(yī)所說的脾虛證癥狀。

據(jù)報(bào)道，促使腸道細(xì)菌移位的機(jī)制主要有3種[1]：(1)腸黏膜屏障的損傷和萎縮；(2)機(jī)體免疫功能下降；(3)腸道菌群失調(diào)。許多慢性病如癌癥、肝功障礙衰竭、貧血及多臟器功能衰竭等，以及外傷、燒傷、暴飲暴食、酒精中毒等都可能發(fā)生細(xì)菌移位。長(zhǎng)期、廣譜抗生素的應(yīng)用，可造成腸菌群紊亂,也是導(dǎo)致細(xì)菌移位發(fā)生的直接原因。

在本實(shí)驗(yàn)中抗生素組腸絨毛萎縮，上皮脫落，腸間質(zhì)充血，腸通透性增加，高劑量組亦是絨毛萎縮脫落，腸間質(zhì)充血。低劑量組腸絨毛腸間質(zhì)均正常。預(yù)示抗生素組與高劑量組小鼠腸道細(xì)菌移位的發(fā)生率將高于正常組和低劑量組。此結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)的另一項(xiàng)研究結(jié)果相吻合。在與本實(shí)驗(yàn)相同的造模條件下，抗生素處理后腸系淋巴結(jié)或脾臟細(xì)菌移位現(xiàn)象比其它組明顯，而高劑量組亦有2例細(xì)菌移位現(xiàn)象，而正常組及低劑量組未見細(xì)菌移位,提示長(zhǎng)期高劑量使用黃連解毒湯或許有類似濫用抗生素的破壞作用。

有研究資料顯示[2]，與正常小鼠比較，經(jīng)口服抗生素處理的小鼠的盲腸顯著腫大，內(nèi)容物水分含量增加。該研究認(rèn)為出現(xiàn)此現(xiàn)象的原因是抗生素處理后導(dǎo)致腸道菌群紊亂，維持腸道水分傳輸功能的細(xì)菌數(shù)量下降，大量水分滯留于盲腸，從而導(dǎo)致盲腸腫大。亦有文獻(xiàn)報(bào)道盲腸指數(shù)可以間接反映腸道菌群的變化情況。

從本實(shí)驗(yàn)所得盲腸指數(shù)圖(圖略)清楚可見，抗生素組小鼠盲腸指數(shù)高于其它各組，有顯著腫大；高劑量組小鼠盲腸指數(shù)亦明顯高于正常組和低劑量組，解剖小鼠時(shí)還觀察到小鼠內(nèi)容物稀濕，盲腸壁腫脹，有一定程度的水腫現(xiàn)象。

中醫(yī)理論認(rèn)為，苦寒藥物傷脾胃。已有很多研究者使用大黃來建立小鼠脾虛模型[3-7]，則我們可推測(cè)因黃連解毒湯稟性寒涼，長(zhǎng)期大量使用會(huì)損傷脾胃,脾虛則水液運(yùn)化不暢，可導(dǎo)致水分瘀積在組織中。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果已證實(shí)黃連解毒湯長(zhǎng)期大量使用確會(huì)造成腸壁水腫現(xiàn)象，與抗生素所致的腸壁水腫相似。本實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)的另一項(xiàng)研究結(jié)果表明，在相同的造模條件下，抗生素組與黃連解毒湯高劑量組小鼠的腸道菌群均紊亂，益生菌減少，提示長(zhǎng)期高劑量使用黃連解毒湯或許有類似濫用抗生素的破壞作用，造成腸道菌群失調(diào)，維持腸道水分傳輸功能的細(xì)菌數(shù)量下降，大量水分滯留于組織中，從而導(dǎo)致機(jī)體水腫，另因影響了外周免疫器官的正常發(fā)育，使機(jī)體的免疫力下降，出現(xiàn)脾虛的癥狀。因此我們可以從腸黏膜組織結(jié)構(gòu)角度來探討“苦寒傷胃”藥的機(jī)制，為我們以后的研究指出一個(gè)方向。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果也提示臨床對(duì)黃連解毒湯此類性味寒涼的藥物長(zhǎng)期大量應(yīng)用時(shí)需慎重。

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