俞　輝　匡曉峰

摘要：試驗(yàn)通過(guò)在基礎(chǔ)飼料中分別添加不同含量(0.5％1％2％)藥性菌質(zhì)(藥用真菌和中草藥雙向目體發(fā)酵的產(chǎn)物)的飼料組作為實(shí)驗(yàn)組，以基礎(chǔ)飼料為對(duì)照組，飼養(yǎng)河鲀60天，并在第15，30，45，60天取樣測(cè)定其脾臟溶茵酶和超氧化物歧化酶活性。并在飼養(yǎng)60后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。結(jié)果表明，藥性菌質(zhì)能夠提高河鲀免疫力。1％添加量的藥性茵質(zhì)效果最佳。原因是藥性菌質(zhì)在一定時(shí)間內(nèi)能顯著提高河脾臟溶菌活性。

關(guān)鍵詞：靈芝菌絲體；河鲀；溶菌酶；免疫力

中圖分類(lèi)號(hào)：Q-33文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672-3198(2009)02-0296-02

0前言

河鲀又稱(chēng)河鲀(Takifugu obseurus)屬鲀形目，純科，東方純屬，暖水性底棲魚(yú)類(lèi)，俗稱(chēng)河豚，又名氣泡魚(yú)，是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高的水產(chǎn)品，其蛋白質(zhì)含量遠(yuǎn)高于一般魚(yú)類(lèi)，而脂肪含量是魚(yú)類(lèi)中最低的一種，其不僅具有養(yǎng)血補(bǔ)氣功效，魚(yú)皮還有健胃的特效，而且其體內(nèi)有毒的部位還可提取名貴的河豚毒素，有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，名列長(zhǎng)江“四大名魚(yú)”之首，為傳統(tǒng)美食中的典范，肉質(zhì)鮮嫩，味美絕倫。

近年來(lái)隨著野生河鲀資源的嚴(yán)重衰退，人工飼養(yǎng)的河鲀成為供應(yīng)市場(chǎng)以滿(mǎn)足食用的主要生產(chǎn)產(chǎn)品。通過(guò)人工養(yǎng)殖來(lái)緩解市場(chǎng)供需之間的矛盾是一條切實(shí)可行又勢(shì)在必行的途徑，并有利于保護(hù)天然環(huán)境中日益減少的河豚資源，經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益顯著，人工養(yǎng)殖河豚又成了新的特種養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)；近年來(lái)河豚養(yǎng)殖業(yè)逐步規(guī)模化和集約化，但也存在著不少日益突出、制約河豚養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的問(wèn)題。

藥用真菌新型(雙向性)固體發(fā)酵工程(簡(jiǎn)稱(chēng)雙向發(fā)酵)是將發(fā)酵菌種和發(fā)酵基質(zhì)所構(gòu)成發(fā)酵組合內(nèi)的基質(zhì)部分，由以往僅用富含碳、氮等營(yíng)養(yǎng)的農(nóng)副產(chǎn)品(甘蔗渣、麥麩等)作為營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)(其產(chǎn)品稱(chēng)為藥用菌質(zhì))，改變?yōu)椴捎镁哂幸欢ɑ钚猿煞值闹兴幉淖鳛樗幮曰|(zhì)，它既能提供真菌生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)又因真菌的酶而被改變組織、成分，從而產(chǎn)生新的性味功能，故具有雙向性，其產(chǎn)品稱(chēng)為藥性菌質(zhì)，如兼用營(yíng)養(yǎng)、藥性?xún)煞N基質(zhì)則稱(chēng)為全性基質(zhì)，產(chǎn)品也稱(chēng)為藥性菌質(zhì)。藥性菌質(zhì)，常可比該真菌或藥性基質(zhì)本身或兩者簡(jiǎn)單相加有更良好的藥效，主要表現(xiàn)在增效、擴(kuò)用、排毒等方面。目前張李陽(yáng)等對(duì)藥性菌質(zhì)的研究在家禽的實(shí)驗(yàn)中已取得一些成績(jī)，在肉雞的日糧中添加藥性菌質(zhì)，可顯著性的促進(jìn)肉雞血紅蛋白、血清蛋白的合成，改善蛋白質(zhì)的代謝，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用效率，可以提高肉雞的血清堿性磷酸酶的活性，促進(jìn)機(jī)體的鈣、磷代謝，增強(qiáng)機(jī)體的新陳代謝功能，改善消化生理，從而促進(jìn)肉雞的生長(zhǎng)。

1材料和方法，

1.1材料

(1)靈芝菌絲體；選用的一種藥用真菌在含一定量可藥食同源中藥藥渣的全性基質(zhì)上進(jìn)行雙向發(fā)酵，最終得到的產(chǎn)物稱(chēng)為藥性菌質(zhì)。

(2)試驗(yàn)用魚(yú)：取自中洋集團(tuán)下屬龍洋水產(chǎn)有限公司河豚養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)，白養(yǎng)的大小基本一致的1冬齡河鲀1200尾。

(3)基礎(chǔ)飼料：海安龍洋牌河豚魚(yú)飼料。

1.2方法

共飼養(yǎng)大小基本一致(體重0.156±0.024Kg，體長(zhǎng)19.0±1.6cm)健康活潑的河鲀魚(yú)10000尾，試驗(yàn)前先用基礎(chǔ)飼料馴養(yǎng)7d，待供試魚(yú)適應(yīng)環(huán)境，并確認(rèn)無(wú)疾病癥狀后，隨機(jī)分成4組入池(每池2500尾)。試驗(yàn)以投喂基礎(chǔ)飼料(正常河鲀飼料)為對(duì)照組(池)，以投喂在基礎(chǔ)飼料中分別添加不同含量(0.5％、1％、2％)的飼料添加劑的試驗(yàn)飼料為試驗(yàn)組(池)，飼養(yǎng)河鲀60天。每天按正常投飼量投喂河鲀飼料，使之飽食，并根據(jù)水溫適當(dāng)調(diào)節(jié)，水溫保持在21.6～27.8℃。飼養(yǎng)管理按正常生產(chǎn)進(jìn)行，每天記錄投飼量，計(jì)算出攝食量，河鲀疾病的防治對(duì)照中洋集團(tuán)的養(yǎng)殖廠(chǎng)常規(guī)進(jìn)行。并于投喂飼料添加劑后的第15、30、45、60天，從各組中用隨機(jī)撈取的方法撈取8尾供試魚(yú)取脾臟組織在－20℃冰箱中保存，備用。

2結(jié)果與分析

2.1試驗(yàn)結(jié)果

(1)取樣策略：試驗(yàn)開(kāi)始后的第15、30、45、60天，從試驗(yàn)池中隨機(jī)撈取8尾受試魚(yú)進(jìn)行采血，血清收集在-20℃冰箱中保存，備用。

取樣時(shí)停飼1次，測(cè)試各組受試魚(yú)50尾，并測(cè)量體重、體長(zhǎng)、體全長(zhǎng)(本文主要探討藥性菌質(zhì)對(duì)河鲀免疫力影響，關(guān)于生長(zhǎng)方面指標(biāo)將另文探討)。

(2)受測(cè)指標(biāo)：

A酶活性的測(cè)定。

用脾臟組織測(cè)定溶菌酶、SOD活性，測(cè)定按所購(gòu)試劑盒(南京建成生物工程研究所)的方法在南京曉莊學(xué)院進(jìn)行。

B回感試驗(yàn)。

各組分別留存供試魚(yú)10尾，飼養(yǎng)在南京曉莊學(xué)院養(yǎng)殖室內(nèi)，觀(guān)其行為正常并能正常攝食混合飼料時(shí)，進(jìn)行回感試驗(yàn)。用一定濃度的嗜水單細(xì)胞菌用注射方法進(jìn)行肌注感染，觀(guān)察注射后各組行為變化、癥狀和死亡率。一周后按組對(duì)每尾河豚魚(yú)進(jìn)行解剖，肉眼觀(guān)察其表皮、粘液、肌肉豐度、肝臟體積、含血量等和手指接觸等指標(biāo)予以比對(duì)后進(jìn)行記錄。

2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用ANOVA軟件進(jìn)行方差分析，Duncan's進(jìn)行多重比較。

(1)投喂藥性菌質(zhì)添加劑對(duì)河豚魚(yú)相關(guān)酶活性的影響

在投喂藥性菌質(zhì)后，實(shí)驗(yàn)3、4組的溶菌酶活力有所升高并在45d時(shí)達(dá)到最大值，且以2％試驗(yàn)組溶菌酶活力最高，1％次之，與對(duì)照組相比差異顯著。

(2)回感實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

在回感實(shí)驗(yàn)中，1％試驗(yàn)組死亡率最低，體表顏色鮮艷，表皮光滑，肌肉豐厚，但頭頸部表皮粘液呈片脫落，肝臟體積最大，血量較多，肝臟外表充血程度最?。粚?duì)照組表皮較光滑，肌肉肥滿(mǎn)程度一般，肝體積中等，血含量較大僅次子1％試驗(yàn)組；0.5試驗(yàn)組，表皮欠光滑，肌肉不豐滿(mǎn)，肝臟外表呈條狀充血(約3cm)，肝葉血管較厚；2％試驗(yàn)組表皮稍顯光滑，肝小，含血量少，肝臟整體充血，靠腹部有長(zhǎng)條血痕(約4cm)。從中可以看出，藥性菌質(zhì)能有效促進(jìn)生長(zhǎng)和提高魚(yú)體免疫力，其用作飼料添加劑的添加量應(yīng)為2.0％組效果最佳，1.0％組效果佳。

2.2分析與討論

藥用真菌具有提高免疫、抗腫瘤、延緩衰老、降血脂等多種生物功效，在醫(yī)藥、食品領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。溶菌酶是魚(yú)體內(nèi)具有殺滅外來(lái)細(xì)菌的活性酶，這種酶在魚(yú)體免疫和抗病過(guò)程中發(fā)揮著很重要的作用。

魚(yú)體中溶菌酶的產(chǎn)生與哺乳類(lèi)動(dòng)物相似，主要由嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞產(chǎn)生，少量由巨噬細(xì)胞生成。溶菌酶是魚(yú)類(lèi)防御微生物入侵的最有效因子之一，對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性菌溶菌酶主要是通過(guò)破壞細(xì)胞壁的N－乙酰胞壁酸和N－乙酰葡糖胺之間的聚糖鏈，使細(xì)胞壁失去韌性，細(xì)菌發(fā)生低滲性裂解，從而殺傷細(xì)菌。而對(duì)于革蘭氏陰性菌，溶茵酶是在補(bǔ)體和其他酶已經(jīng)破壞細(xì)菌外層胞壁，露出細(xì)胞內(nèi)層肽聚糖之后起作用。作者通過(guò)試驗(yàn)知添加藥性菌質(zhì)后，隨著飼喂時(shí)間增加，各組魚(yú)溶菌酶活力均有一定程度提高，并在45天左右達(dá)到最高，而后有所降低，且以添加2％效果明顯(P＜0.05)，說(shuō)明藥性菌質(zhì)組均能提高河鲀的溶菌酶活力，提高免疫水平，推測(cè)可能是藥性菌質(zhì)中成分激活了單核細(xì)胞的分泌功能，從而使溶菌酶大量釋放。

在回感實(shí)驗(yàn)中2％組活動(dòng)力強(qiáng)，運(yùn)輸過(guò)程中碰撞嚴(yán)重，其應(yīng)激反應(yīng)亦強(qiáng)，對(duì)肝臟損傷大，解剖該組魚(yú)發(fā)現(xiàn)個(gè)體的肝萎縮，肝臟血量少，表明其急性死亡率高，因此，整個(gè)實(shí)驗(yàn)顯示菌質(zhì)添加量在0.0％到2.0％范圍內(nèi)，隨著添加量增加，免疫細(xì)胞增殖能力逐漸增強(qiáng)。試驗(yàn)證明在飼喂含有藥性菌質(zhì)45d后效果達(dá)到最好，因此使用本藥性菌質(zhì)作為飼料添加劑應(yīng)在河鲀易發(fā)病前45d效果最好。