摘要：選昌偉農(nóng)貿(mào)公司健康雞400只(試驗(yàn)前抗體監(jiān)測(cè)新城疫抗體效價(jià)小于或等于1：32。禽流感抗體效價(jià)小于1：16的雞為試驗(yàn)雞)分4組，分別用滴鼻1羽份、肌肉注射1羽份、飲水2羽份、肌注1羽份3周后飲水2羽份加強(qiáng)免疫4種方式免疫，結(jié)果顯示：禽流感一新城疫重組二聯(lián)疫苗滴鼻、肌肉注射免疫的抗體效價(jià)合格率顯著高于飲水免疫的抗體效價(jià)合格率(P＜0.05)，肌肉注射3周后飲水加強(qiáng)免疫一次能顯著延長(zhǎng)有效抗體持續(xù)期，能夠產(chǎn)生更好的免疫效果。一次滴鼻、肌肉注射和飲水免疫僅能維持1個(gè)月左右的高抗體水平，加強(qiáng)免疫方式能維持2個(gè)月以上的高抗體水平。

關(guān)鍵詞：滴鼻；肌注；飲水；免疫預(yù)防；雞；禽流感；新城疫

中圖分類號(hào)：S852.5⁺2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X(2008)07-0023-02

1 材料方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 夷陵區(qū)昌偉農(nóng)貿(mào)公司3周齡未接種疫苗健康雛雞400只(試驗(yàn)前抗體監(jiān)測(cè)新城疫抗體效價(jià)小于或等于1：32，禽流感抗體效價(jià)小于1：16的雞為試驗(yàn)雞)。

1.1.2試驗(yàn)疫苗 禽流感一新城疫重組二聯(lián)活疫苗500羽份/瓶，哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)，批號(hào)：獸藥生字(2007)080012112。

1.1.3試驗(yàn)試劑 純化滅活禽流感(H5)、新城疫診斷抗原，標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性、陰性血清，稀釋液(PBS)，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

1％雞紅血球：采健康公雞新鮮血液，與抗凝生理鹽水等體積混合。洗滌離心后備用。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)分組與疫苗接種

(1)試驗(yàn)分組。選擇未接種禽流感一新城疫疫苗的健康雞400只，分成4組：第1組：健康雞100只，2007年3月22日采用滴鼻免疫方式免疫禽流感一新城疫疫苗1羽份/羽。第2組：健康雞100只，2007年3月22日采用肌肉注射免疫方式免疫禽流感一新城疫疫苗1羽份/羽。第3組：健康雞100只，2007年3月22日采用飲水免疫方式免疫禽流感一新城疫疫苗2羽份/羽。第4組：健康雞100只，2007年3月22日采用肌肉注射免疫方式免疫禽流感一新城疫疫苗1羽份/羽，21d后飲水免疫2羽份/羽(表1)。

(2)接種操作規(guī)范與注意事項(xiàng)。點(diǎn)眼滴鼻：用稀釋液稀釋疫苗到1羽份/0.1mL，每只雛雞滴鼻0.1mL。肌肉注射：腿部肌肉注射稀釋好的疫苗0.2mL(含1羽份)。飲水免疫：按2羽份/羽劑量計(jì)算雞群用量后加入飲水中。飲水免疫前雞群應(yīng)至少停水4h，忌用金屬飲水容器。使用疫苗注意事項(xiàng)：注射器應(yīng)采用7號(hào)以下規(guī)格針頭，該疫苗接種前后

2周內(nèi)應(yīng)絕對(duì)避免其他形式使用疫苗。

1.2.2 免疫反應(yīng)觀測(cè) 試驗(yàn)期間，安排專業(yè)獸醫(yī)人員記錄疫苗使用后過(guò)敏反應(yīng)癥狀、治療方案、轉(zhuǎn)歸、劃分應(yīng)激反應(yīng)類型，對(duì)嚴(yán)重應(yīng)激反應(yīng)者用腎上腺素及時(shí)救治。

1.2.3 血清采集將試驗(yàn)雞分別于免疫前、免疫后第21天、第36天、第66天翅靜脈采血2mL/只，靜置分離血清0.5mL/只，待用。

1.3 抗體效價(jià)測(cè)定方法

測(cè)定方法：本次試驗(yàn)禽流感一新城疫抗體監(jiān)測(cè)均采用血凝抑制試驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)雞禽流感和新城疫抗體效價(jià)測(cè)定在疫苗免疫前、免疫后第21天、第36天、第66天分別測(cè)定，禽流感抗體效價(jià)大于或者等于1：16為合格，新城疫抗體效價(jià)大于1：32為合格。

2.1 試驗(yàn)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，用禽流感一新城疫重組二聯(lián)疫苗一次免疫方式滴鼻組(1組)、肌肉注射組(2組)免疫后抗體檢測(cè)顯示21d雞群新城疫抗體合格率為72％、82％。禽流感抗體合格率為68％、71％；36d新城疫抗體合格率為86％、90％，禽流感抗體合格率為72％、72％；66d新城疫抗體合格率為41％、44％，禽流感抗體合格率為27％、34％。而飲水免疫(3組)21、36、66d新城疫抗體合格率僅為52％、65％、31％。禽流感抗體合格率僅為37％、44％、21％。

加強(qiáng)免疫組(4組)的新城疫抗體檢測(cè)結(jié)果顯示，加強(qiáng)免疫組的抗體合格率21d、36d、66d達(dá)到78％、96％、87％，禽流感抗體合格率為67％、84％、72％。而滴鼻、肌肉注射和飲水免疫組(1組、2組、3組)21d新城疫抗體合格率分別為72％、82％、52％，禽流感抗體合格率為68％、71％、37％；36d新城疫抗體合格率為86％、90％、65％，禽流感抗體合格率為72％、72％、44％；66d新城疫抗體合格率為41％、44％、31％，禽流感抗體合格率為27％、34％、21％。

2.2 不同免疫方式抗體消長(zhǎng)規(guī)律

禽流感一新城疫疫苗滴鼻免疫方式(1組)與肌肉注射(2組)的新城疫抗體合格率和免疫持續(xù)期相近，經(jīng)差異顯著性檢驗(yàn)，差異不顯著(P＞0.05)。滴鼻組、肌肉注射組顯著高于飲水免疫組(3組)的新城疫抗體合格率，經(jīng)差異顯著性檢驗(yàn)，差異顯著(P＜0.05)。加強(qiáng)免疫組(4組)顯著高于滴鼻組、肌肉注射組和飲水免疫組的抗體合格率，經(jīng)差異顯著性檢驗(yàn)，差異顯著(P<0.05)。加強(qiáng)免疫后第45天仍能維持較高的抗體水平，一次免疫都只能維持1個(gè)月的高抗體水平。試驗(yàn)表明：無(wú)論哪種免疫方式，一次免疫僅能維持1個(gè)月左右的免疫持續(xù)期，而加強(qiáng)免疫能維持2個(gè)月以上的免疫持續(xù)期(見(jiàn)圖1)。

禽流感的抗體合格率變化基本上與新城疫抗體合格率變化趨勢(shì)一致。在免疫后第2l天、36天、66天滴鼻(1組)、肌肉注射(2組)免疫方式的免疫效果明顯優(yōu)于飲水(3組)免疫方式，加強(qiáng)免疫(4組)的免疫方式與常規(guī)單次免疫方式相比，在二免后15d能達(dá)到較高的抗體合格率，并且維持的時(shí)間長(zhǎng)，在加強(qiáng)免疫后45d時(shí)，加強(qiáng)免疫的抗體合格率明顯高于一次免疫的抗體合格率(見(jiàn)圖2)。

3 小結(jié)與討論

3.1 禽流感一新城疫重組二聯(lián)疫苗不同免疫方式效果比較

禽流感一新城疫重組二聯(lián)疫苗滴鼻、肌肉注射免疫的抗體效價(jià)合格率顯著高于飲水免疫的抗體效價(jià)合格率，肌肉注射3周后飲水加強(qiáng)免疫一次能顯著延長(zhǎng)有效抗體持續(xù)期。能夠產(chǎn)生更好的免疫效果。

3.2 加強(qiáng)免疫與常規(guī)單次免疫效果的比較

加強(qiáng)免疫優(yōu)于常規(guī)單次免疫效果。禽流感一新城疫重組疫苗盡管滴鼻、肌肉注射方式的抗體合格率顯著高于飲水免疫方式，但3種免疫方式有效抗體持續(xù)期均只能達(dá)到1個(gè)月左右。而加強(qiáng)免疫方式有效抗體持續(xù)期能達(dá)到2個(gè)月以上。試驗(yàn)表明：1次滴鼻、肌肉注射和飲水免疫僅能維持1個(gè)月左右的高抗體水平。加強(qiáng)免疫方式能維持2個(gè)月以上的高抗體水平。

3.3 小結(jié)

根據(jù)本試驗(yàn)所反應(yīng)出來(lái)結(jié)果，建議生長(zhǎng)周期短的肉雞采用滴鼻或肌肉注射免疫方式免疫，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)的種雞和蛋雞采用加強(qiáng)免疫的方式進(jìn)行免疫。由于各種雞的生長(zhǎng)期不同，我們可以采用不同的免疫方式進(jìn)行免疫，如飼養(yǎng)肉雞，生長(zhǎng)期只有40d左右，我們采用一次滴鼻或肌肉注射就能夠達(dá)到滿意的免疫效果。如果飼養(yǎng)種雞或蛋雞，生長(zhǎng)期在1年以上，我們就有必要采用加強(qiáng)免疫的方式免疫，以延長(zhǎng)保護(hù)期。