摘要：目的：建立高效液相色譜法測(cè)定新止咳合劑中甘草酸的含量。方法：采用Dikma鉆石C18色譜柱(4.6mm×250mm，5gm)；流動(dòng)相為甲醇—0.2mol/L醋酸銨溶液—冰醋酸(63：37：1)；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，流速為1.0mL/rain，柱溫為30℃。結(jié)果：甘草酸進(jìn)樣量在0.221～6.630tμg(r＝0.99998)范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.15％，RSD＝0.71％(n＝9)。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、快速、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好；可作為新止咳合劑的質(zhì)量控制方法。
　　關(guān)鍵詞：甘草酸；高效液相色譜法；新止咳合劑；含量測(cè)定
　　中圖分類號(hào)：R927.2
　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
　　文章編號(hào)：1007—2349(2008)05—0045—02
　　新止咳合劑由桔梗、陳皮、兒茶、甘草、法半夏等藥制成，具有止咳、祛痰的功效。為本院的醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有規(guī)定含量測(cè)定方法。本文參考《中國(guó)藥典32005年版，采用HPLC法測(cè)定甘草的主要成分——甘草酸的含量，作為質(zhì)量控制指標(biāo)，獲得滿意的結(jié)果。
　　
　　1、儀器與藥品
　　
　　高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent 1100系列儀)，包括自動(dòng)進(jìn)樣裝置、VWD可變紫外檢測(cè)器、柱溫箱等；METTI.ERAE240型電子分析天平。除高效液相色譜檢測(cè)所用試劑為色譜純外，其他試劑均為分析純。甘草酸銨對(duì)照品(批號(hào)為110731—200408，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；新止咳合劑由本院制劑室配制(批號(hào)20070206、20070403、20070428)。
　　
　　2、方法與結(jié)果
　　
　　2.1　色譜條件　色譜柱：Dikma鉆石C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇—0.2mol/L醋酸銨溶液—冰醋酸(63：37：1)；流速：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm；進(jìn)樣量：10μl。理論板數(shù)按甘草酸峰計(jì)算為3000。
　　
　　2.2溶液的制備　精密稱取甘草酸銨對(duì)照品(置五氧化二磷為干燥劑的干燥器中，減壓干燥36h)44.2mg，置20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中含甘草酸2.21mg的溶液(貯備液)，分別精密吸取溶液(貯備液)①0.1mL、②0.2mL、③0.5mL、④1mL、⑤2mL、⑥2.5、⑦3mL；分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，分別得每1mL含①0.0221mg，②0.048mg，③0.1105mg，④0.22tmg，⑤0.442mg，⑥0.5525mg，⑦0.663mg的對(duì)照品溶液。
　　取新止咳合劑15mL，用正丁醇提取5次(15、15、10、10、10mL)，合并正丁醇層，用水洗3次，每次20mL，分取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，混勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
　　
　　2.3方法學(xué)考察
　　2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍　精密吸取甘草酸銨對(duì)照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥、⑦各10μ1，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定。以甘草酸銨對(duì)照品含量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直線幾乎通過原點(diǎn)，所以采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定。線性回歸方程為Y＝545.71X＋6.174，r＝0.99998，線性范圍為0.221～6.63μg。
　　2.3.2精密度試驗(yàn)　取同一甘草酸銨對(duì)照品溶液④10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果峰面積積分值分別為：1209.7186，1200.4753，1200.41641。1203.3199，1207.5747.1205.7230；積分值平均為：1204.54，RSD＝0.32％。結(jié)果表明儀器精密度較好。
　　2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)　取同一供試品溶液(批號(hào)為20070428)各10μl，分別于0，2，5，10，15，20，24h注入液相色譜儀測(cè)定，結(jié)果供試品溶液峰面積積分值的RSD＝1.2％，表明在24h內(nèi)對(duì)照品和供試品的峰面積積分值穩(wěn)定，說明測(cè)定溶液配制好后，放置24h內(nèi)測(cè)定均可。
　　2.3.4重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的新止咳合劑(批號(hào)：20070428)，按供試品溶液的制備方法重復(fù)操作測(cè)定6次，結(jié)果平均含量為0.16mg/mL，RSD=1.55％。
　　2.3.5回收率試驗(yàn)　采用加樣回收法，取已知含量的同一批號(hào)(20070428)新止咳合劑(含量為：0.16mg/mL)適量，分別精密加入甘草酸銨對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備及測(cè)定法操作。結(jié)果見表1。
　　
　　2.3.6干擾試驗(yàn)　照上述條件測(cè)定新止咳合劑空白(不含甘草藥材制成的陰性合劑)制劑，結(jié)果在甘草酸色譜峰相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無吸收峰，說明處方中其它藥味對(duì)甘草中的甘草酸測(cè)定無干擾。見圖1。
　　
　　
　　2.4樣品含量測(cè)定　按供試品溶液的制備及測(cè)定法操作，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算。結(jié)果見表2。
　　
　　
　　3、討論
　　
　　甘草酸是甘草中主要的活性成分之一，也是新止咳合劑治療疾病的重要成分，故選擇該物質(zhì)作為考察指標(biāo)。因沒有甘草酸的對(duì)照品，所以采用甘草酸銨對(duì)照品測(cè)定甘草酸的含量，按0.2mg的甘草酸單銨鹽對(duì)照品折合甘草酸為0.1959mg的系數(shù)計(jì)算。本法簡(jiǎn)便、快速、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好，可作為新止咳合劑的質(zhì)量控制方