劉　博　傅俊范　周如軍　嚴(yán)雪瑞

摘要采用PDA平板檢測(cè)法對(duì)遼寧省6個(gè)地區(qū)的五味子種子進(jìn)行帶菌檢測(cè)，并測(cè)定了6種殺菌劑對(duì)五味子種子的消毒效果。結(jié)果表明，五味子種子表面攜帶的主要真菌類群為曲霉屬和青霉屬，種子內(nèi)部寄藏真菌主要包括曲霉屬、青霉屬、鐮刀菌屬、根霉屬和鏈格孢屬等。供試的6種殺菌劑對(duì)五味子種子均有一定的消毒效果，福美雙對(duì)五味子種子消毒處理效果最顯著。

關(guān)鍵詞五味子；種子帶菌；消毒處理

中圖分類號(hào)S 435.67

五味子[Schisandra chinensis(Tuecz.)Baill.]為木蘭科五味子屬木質(zhì)藤本植物，是遼寧名貴藥材，在國(guó)內(nèi)外久負(fù)盛名，素有“遼五味”之稱。其果實(shí)入藥，具有益氣斂肺、滋腎、澀精、止瀉斂汗等功能，果實(shí)還可加工成酒和飲料，具有較高的開發(fā)價(jià)值。近年來隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整以及市場(chǎng)需求的不斷增加，五味子人工栽培面積不斷擴(kuò)大，種子產(chǎn)區(qū)間調(diào)運(yùn)頻繁，病害問題日益突出，極大地影響了五味子的生產(chǎn)。

五味子的主要病害包括葉枯病、莖基腐病、白粉病等，產(chǎn)前對(duì)種子進(jìn)行健康檢測(cè)和消毒處理是提高播種品質(zhì)和防治五味子種苗病害最簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)有效的方法之一。本研究對(duì)遼寧省6個(gè)地區(qū)的五味子種子進(jìn)行帶菌檢測(cè)和藥劑消毒處理研究，旨在明確五味子種子帶菌情況，篩選合適的種子處理藥劑，為五味子種子產(chǎn)區(qū)間安全調(diào)運(yùn)和病害防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

供試種子：2007年收獲的五味子種子6份，分別來自遼寧省沈陽(yáng)市東陵區(qū)、清原縣大孤家鄉(xiāng)、沈陽(yáng)市于洪區(qū)、鳳城市大梨樹村、營(yíng)口市黃土嶺鄉(xiāng)、新賓縣木奇鎮(zhèn)，由沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病害流行實(shí)驗(yàn)室提供。

供試殺菌劑：50％多菌靈(carbendazim)可濕性粉劑為江蘇省江陰市農(nóng)藥二廠有限公司產(chǎn)品，50％福美雙(thiram)可濕性粉劑為天津市捷康化學(xué)品有限公司產(chǎn)品，75％百菌清(chlorothalonil)可濕性粉劑為利民化工有限責(zé)任公司產(chǎn)品，70％甲基硫菌靈(thiophanate-methyl)可濕性粉劑為日本曹達(dá)株式會(huì)社產(chǎn)品，80％代森錳鋅(mancozeb)可濕性粉劑為南通德斯益農(nóng)化工有限公司產(chǎn)品，25％甲霜·霜霉(15％甲霜靈metalaxy1+10％霜霉威propamocarb)可濕性粉劑為江蘇寶靈化工股份有限公司產(chǎn)品，均為市售。

1.2研究方法

1.2.1種子外部帶菌檢測(cè)

每個(gè)品種隨機(jī)選取100粒種子，放人滅菌的250mL三角瓶中，加25mL無菌水后充分振蕩，吸取5mL懸浮液，2000r／min的轉(zhuǎn)速離心10min，倒去上清液，加3mL無菌水均勻懸浮后用無菌水進(jìn)行系列梯度稀釋，每個(gè)稀釋梯度孢子懸浮液吸取100μL涂抹到9cm直徑PDA平板上，涂勻。相同條件下設(shè)無菌水空白對(duì)照。每個(gè)濃度涂5個(gè)平板，置于25℃恒溫箱中黑暗條件下培養(yǎng)5d后觀察菌落生長(zhǎng)情況，記錄種子外部攜帶的真菌種類及分離比例，計(jì)算種子外部攜帶真菌的孢子負(fù)荷量。

孢子負(fù)荷量=5皿菌落總數(shù)／0.5mL×稀釋倍數(shù)×25mL／100粒；

分離比例=(某類真菌菌落個(gè)數(shù)／菌落總數(shù))×100％。

1.2.2種子內(nèi)部帶菌檢測(cè)

將不同來源的種子在5％次氯酸鈉溶液中浸泡5min，然后用無菌水沖洗3遍，取50粒種子用滅菌的手術(shù)刀將種殼和種仁分開，將種仁在1％次氯酸鈉溶液中浸泡2min，然后用無菌水沖洗3遍，將消毒后的種殼和種仁分別均勻擺放在9cm直徑PDA平板上，每皿擺放10粒，每個(gè)處理5次重復(fù)，25℃恒溫箱中光照、黑暗各12h交替培養(yǎng)5～7d后，記錄種子帶菌情況，不同部位真菌種類和分離頻率。

種子帶菌率=(帶菌種子數(shù)／檢測(cè)種子總數(shù))×100％；

某菌的分離頻率=(帶某類菌種子數(shù)／帶菌種子總數(shù))×100％。

1.2.3真菌鑒定

將分離到的各種真菌進(jìn)行純化，轉(zhuǎn)管保存后鏡檢。根據(jù)真菌培養(yǎng)性狀和形態(tài)特征，參考有關(guān)工具書和文獻(xiàn)鑒定到屬。

1.2.4不同藥劑對(duì)種子的消毒效果

將不同來源的五味子種子均分別用以下藥劑處理：50％多菌靈可濕性粉劑、50％福美雙可濕性粉劑、70％甲基硫菌靈可濕性粉劑按1:200藥種比拌種，75％百菌清可濕性粉劑按1:120藥種比拌種，80％代森錳鋅可濕性粉劑按1:250藥種比拌種，25％甲霜·霜霉可濕性粉劑按1:333藥種比拌種，以不做任何處理的整粒種子做空白對(duì)照。各處理種子均勻擺放在直徑9cmPDA平板上，每皿擺放10粒，每個(gè)處理4次重復(fù)，25℃恒溫箱中黑暗條件下培養(yǎng)5～7d后，記錄不同種子帶菌情況，計(jì)算藥劑消毒效果。

2結(jié)果與分析

2.1種子外部帶菌檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果表明(表1)，五味子種子表面攜帶的優(yōu)勢(shì)菌群主要為曲霉屬和青霉屬。其中來自沈陽(yáng)市東陵區(qū)的種子主要攜帶青霉屬，分離比例達(dá)99.69％，其余的種子主要攜帶曲霉屬，此外，營(yíng)口市黃土嶺鄉(xiāng)和清原縣大孤家鄉(xiāng)的五味子種子還帶有毛霉屬，分離比例分別為19.51％和0.17％，營(yíng)口市黃土嶺鄉(xiāng)的種子還帶有鐮刀菌屬真菌，分離比例為2.44％，沈陽(yáng)市東陵區(qū)的種子帶有鏈格孢菌，清原縣大孤家鄉(xiāng)的種子帶有根霉屬真菌，鳳城市大梨樹村的種子帶有木霉菌屬真菌。

2.2種子內(nèi)部帶菌檢測(cè)結(jié)果

結(jié)果表明(表2、表3)，沈陽(yáng)市東陵區(qū)的種子種殼上僅分離到青霉屬真菌，鳳城市大梨樹村和新賓縣木奇鎮(zhèn)的種殼上帶有曲霉屬真菌，分離頻率分別為100.00％和87.10％，清原縣大孤家鄉(xiāng)的種殼上帶有曲霉、青霉、毛霉、根霉和鐮刀菌，沈陽(yáng)市于洪區(qū)的種殼上帶有根霉和鐮刀菌，營(yíng)口市黃土嶺鄉(xiāng)的種殼上帶菌率僅為12.00％，主要有曲霉、青霉和木霉；種仁上曲霉屬和青霉屬分離頻率較高，沈陽(yáng)市東陵區(qū)的種子種仁上僅分離到青霉屬真菌，鳳城市大梨樹村和新賓縣木奇鎮(zhèn)的種仁上帶有曲霉屬真菌，清原縣大孤家鄉(xiāng)的種仁上帶有曲霉、青霉、根霉，沈陽(yáng)市于洪區(qū)和新賓縣木奇鎮(zhèn)的種仁上分離到鐮刀菌，分離頻率分別為20.00％和2.78％，此外，沈陽(yáng)市于洪區(qū)的種仁上還帶有部分鏈格孢屬真菌，營(yíng)口市黃土嶺鄉(xiāng)的種仁上帶菌率僅為8％，主要有曲霉、青霉和根霉。

2.3不同藥劑對(duì)種子的消毒效果

由于不同來源的五味子種子外部和內(nèi)部攜帶真菌種類及各供試殺菌劑的防治譜有一定差異，不同殺菌劑對(duì)不同來源五味子種子帶菌消毒效果不同。結(jié)果表明(表4)，50％福美雙可濕性粉劑對(duì)五味子種子消毒處理效果最顯著，處理后五味子種子帶菌率在20.00％以下；50％多菌靈可濕性粉劑處理的清原縣大孤家鄉(xiāng)種子主要帶曲霉，分離頻率為75.00％，50％多菌靈可濕性粉劑處理的沈陽(yáng)市東陵區(qū)種子主要帶青霉，分離頻率為64.86％；70％甲基硫菌靈可濕性粉劑處理的清原縣大孤家鄉(xiāng)種子主要帶根霉，分離頻率為62.50％，70％甲基硫菌靈可濕性粉劑處理的營(yíng)口市黃土嶺鄉(xiāng)種子主要帶曲霉，分離頻率為51.28％；35％甲霜·霜霉可濕性粉劑處理的沈陽(yáng)市東陵區(qū)種子主要帶青霉，分離頻率為100.00％，25％甲霜·霜霉可濕性粉劑處理的清原縣大孤家鄉(xiāng)種子主要帶根霉，分離頻率為65.00％。

3結(jié)論與討論

近年來對(duì)藥用植物種子的帶菌檢測(cè)和藥劑處理報(bào)道較多，但五味子種子方面在國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。對(duì)遼寧省6個(gè)地區(qū)的五味子種子進(jìn)行帶菌檢測(cè)，結(jié)果表明，五味子種子外部攜帶真菌主要是曲霉屬和青霉屬，種子內(nèi)部寄藏真菌主要包括曲霉屬、青霉屬、鐮刀菌屬、根霉屬和鏈格孢屬。其中由鐮刀菌引起的五味子莖基腐病和由鏈格孢菌引起的五味子葉枯病是目前五味子生產(chǎn)上危害最重的病害。因此，五味子種子帶菌檢測(cè)及消毒處理技術(shù)在五味子安全生產(chǎn)和病害防治中具有重要意義。

因不同地區(qū)的種子外部和內(nèi)部帶有的真菌種類不同，所以同一種藥劑對(duì)不同地區(qū)種子的消毒處理效果不同。供試的6種殺菌劑對(duì)五味子種子均有一定的消毒效果，福美雙對(duì)五味子種子消毒處理效果最顯著，處理后五味子種子帶菌率在20％以下。

本研究?jī)H對(duì)遼寧省6個(gè)地區(qū)的五味子種子進(jìn)行了帶菌檢測(cè)和藥劑消毒處理研究，其他地區(qū)五味子種子的帶菌情況，安全有效的種子處理藥劑的篩選，還需進(jìn)一步研究。