周　彤　范永堅(jiān)　程兆榜　周益軍

摘要鑒于國(guó)內(nèi)至今尚無水稻條紋葉枯病品種抗性鑒定標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)狀，本文分別研究了接種時(shí)間、接種強(qiáng)度與水稻接種苗齡3因素對(duì)抗性鑒定的影響。結(jié)果表明水稻條紋葉枯病的適合抗性鑒定方法應(yīng)為：接種時(shí)間48～72h，接種強(qiáng)度2～6頭／株和水稻接種齡期0.5～1.5葉齡。以本研究結(jié)果為基礎(chǔ)制定了水稻條紋葉枯病品種抗性鑒定的江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞水稻條紋葉枯病；水稻品種；抗性鑒定

中圖分類號(hào)S 435.111.49

水稻條紋葉枯病(Rice stripe virus，RSV)是由灰飛虱(Laodelphax striatellus Fallén)傳播的一種病毒病，自20世紀(jì)90年代在江蘇再次發(fā)生以來，已相繼蔓延至整個(gè)長(zhǎng)江中下游稻區(qū)，并迅速上升為該地區(qū)水稻生產(chǎn)上最主要的病害之一。據(jù)江蘇省植保站統(tǒng)計(jì)僅2004年全省就有42個(gè)縣發(fā)生水稻條紋葉枯病，波及面積達(dá)157萬hm²，占水稻總栽培面積的79％，絕收面積達(dá)5200hm²，給水稻生產(chǎn)帶來了巨大的危害。當(dāng)前生產(chǎn)上采用的治蟲防病方法對(duì)病害的控制效果并不理想，而利用抗病品種無疑是一種最為經(jīng)濟(jì)和環(huán)保的防治策略。但迄今為止國(guó)內(nèi)尚無病害抗性鑒定的國(guó)家、行業(yè)或和地方標(biāo)準(zhǔn)，這嚴(yán)重影響到水稻條紋葉枯病抗病品種的選育速度。為此，本研究從接種時(shí)間、接種強(qiáng)度與水稻接種苗齡方面研究了水稻條紋葉枯病抗性鑒定的最佳方法，以期為生產(chǎn)上提供一種有效、規(guī)范的病害鑒定方法，并為行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

1材料和方法

1.1供試材料

感病品種武育粳3號(hào)由江蘇省武進(jìn)稻麥育種場(chǎng)提供。

1.2傳毒介體的篩選

2005年4～5月從江蘇海安重病區(qū)中采集灰飛虱若蟲，在感病品種武育粳3號(hào)上進(jìn)行飼養(yǎng)，交配后單頭雌蟲單獨(dú)產(chǎn)卵，再采用斑點(diǎn)免疫結(jié)合法檢測(cè)雌蟲帶毒情況，保留帶毒雌蟲的后代，飼養(yǎng)2～3代后獲得灰飛虱群體，選擇帶毒率大于50％的群體分別飼養(yǎng)，獲得RSV傳毒介體灰飛虱Haian群體(H群體)，連續(xù)5代監(jiān)測(cè)其群體帶毒率均大于50％。

1.3水稻條紋葉枯病抗性鑒定方法的研究

為篩選出最佳的水稻條紋葉枯病抗性鑒定方法，采用苗期接種鑒定方法分析了接種時(shí)間、接種強(qiáng)度和水稻接種苗齡對(duì)鑒定效果的影響。

1.3.1接種時(shí)間對(duì)抗性鑒定的影響

接種時(shí)間設(shè)12、24、48h和72h共4個(gè)處理，重復(fù)3次。將武育粳3號(hào)播于1000mL燒杯中，每杯播種25株苗。待秧苗長(zhǎng)至1.5葉時(shí)進(jìn)行接種鑒定，接種前2d淘汰病弱苗，挑選生長(zhǎng)一致的幼苗20株，用防蟲網(wǎng)蓋好用于接種鑒定。按有效接種蟲量4頭／株將2～4齡H群體接入杯中，每天趕蟲2次以確保被測(cè)稻苗均勻獲毒。接種后移走全部灰飛虱，再將稻苗移栽至大田。接種7d后開始調(diào)查病害，每隔1天調(diào)查1次，共調(diào)查15次。

1.3.2接種強(qiáng)度對(duì)抗性鑒定的影響

有效接種蟲量設(shè)1、2、4、6頭／株4個(gè)處理，重復(fù)3次。播種方法同上，待水稻長(zhǎng)至1.5葉期，分別按不同有效接種蟲量將2～4齡H群體接入杯中，每天趕蟲2次以確保被測(cè)稻苗均勻獲毒。接種48h后將灰飛虱移走，再將稻苗移栽至大田。調(diào)查方法同上。

1.3.3水稻接種齡期對(duì)抗性鑒定的影響

接種苗齡設(shè)0.5、1、1.5、2、3葉齡5個(gè)處理，重復(fù)3次。分期播種(播種方法同上)，待其長(zhǎng)至所需齡期，按有效接種蟲量4頭／株將2～4齡H群體接入杯中，每天趕蟲2次以確保被測(cè)稻苗均勻獲毒。接種48h后將灰飛虱移走，再將稻苗移栽至大田。調(diào)查方法同上。

1.3.4水稻接種齡期、接種時(shí)間、接種強(qiáng)度正交試驗(yàn)

為研究水稻條紋葉枯病的最佳抗性鑒定方法，本試驗(yàn)采用L9(3)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，3個(gè)因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，詳見表1。接種方法和調(diào)查方法同上，重復(fù)3次。

1.3.5鑒定標(biāo)準(zhǔn)

癥狀分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)參照周彤等制定的標(biāo)準(zhǔn)，0級(jí)，無癥狀；1級(jí)，有輕微黃綠色斑駁癥狀，病葉不卷曲，植株生長(zhǎng)正常；2級(jí)，病葉上褪綠擴(kuò)展相連成不規(guī)則黃白色或黃綠色條斑，病葉不卷曲或略有卷曲，生長(zhǎng)基本正常；3級(jí)，病葉嚴(yán)重褪綠，病葉卷曲呈捻轉(zhuǎn)狀，少數(shù)病葉出現(xiàn)黃化枯萎癥狀；4級(jí)，大部分病葉卷曲呈捻轉(zhuǎn)狀，葉片黃化枯死，植株呈假枯心狀或整株枯死。其中2～4級(jí)直接記為發(fā)病，1級(jí)則需再次調(diào)查確認(rèn)，0級(jí)記為不發(fā)病，計(jì)算發(fā)病率。

2結(jié)果與分析

2.1接種時(shí)間對(duì)抗性鑒定的影響

不同接種時(shí)間對(duì)水稻條紋葉枯病抗性鑒定的影響如表2，隨接蟲時(shí)間的增加感病品種的發(fā)病率亦不斷提高。接種72h和48h武育粳3號(hào)的發(fā)病率顯著高于另外2種處理，這表明水稻條紋葉枯病抗性鑒定合適的接種時(shí)間應(yīng)該為48～72h。

2.2接種強(qiáng)度對(duì)抗性鑒定的影響

不同接種強(qiáng)度對(duì)水稻條紋葉枯病抗性鑒定的影響如表3，隨接蟲強(qiáng)度的增加感病品種的發(fā)病率也不斷提高。接種強(qiáng)度6頭／株、4頭／株和2頭／株時(shí)武育粳3號(hào)的發(fā)病率顯著高于1頭／株處理，這表明水稻條紋葉枯病抗性鑒定合適的接種強(qiáng)度應(yīng)該為2～6頭／株。

2.3水稻接種齡期對(duì)抗性鑒定的影響

不同水稻接種齡期對(duì)水稻條紋葉枯病抗性鑒定的影響如表4，當(dāng)水稻接種齡期處于2葉齡之內(nèi)時(shí)，武育粳3號(hào)的發(fā)病率間不存在顯著性差異，但當(dāng)水稻接種齡期為3葉齡時(shí)，其與另4種處理的鑒定結(jié)果間存在顯著性差異，這表明水稻條紋葉枯病抗性鑒定合適的水稻接種齡期應(yīng)該為0.5～2葉齡。

2.4水稻接種齡期、接種時(shí)間和接種強(qiáng)度正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)結(jié)果

采用L9(3)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)研究水稻條紋葉枯病抗性鑒定中水稻接種齡期、接種時(shí)間和接種強(qiáng)度的最佳組合。結(jié)果顯示接種時(shí)間為72h或48h的6個(gè)處理組合間沒有顯著性差異，但與接種時(shí)間為24h的3個(gè)處理組合間存在顯著性差異(表5)。這表明水稻條紋葉枯病適合的抗性鑒定方法應(yīng)為：接種時(shí)間48～72h，接種強(qiáng)度2～6頭／株和水稻接種齡期0.5～1.5葉齡。

3討論

由于傳播方式的特殊性，接種強(qiáng)度的界定一直是水稻條紋葉枯病抗性鑒定中技術(shù)性瓶頸，前人的研究往往單獨(dú)以灰飛虱的發(fā)生量或灰飛虱帶毒率作為鑒定接種強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)，而Ise等則以感病對(duì)照的發(fā)病率作為抗性鑒定可靠性的標(biāo)準(zhǔn)。作者在田間鑒定試驗(yàn)中提出了有效接種蟲量的概念，并指出當(dāng)其值在0.8×10⁶～3.6×10⁶頭／hm²范圍內(nèi)時(shí)可作為水稻條紋葉枯病田間抗性鑒定有效的參考指標(biāo)，以1hm²有3×10⁵株苗折算的有效接種蟲量為2.6～12頭／株，這與本研究確定的接種蟲量是基本一致的。使用這一標(biāo)準(zhǔn)既可避免蟲量較低而帶毒率較高引起的對(duì)品種的抗性評(píng)價(jià)過低，又可防止帶毒率過低而蟲量過高導(dǎo)致抗性評(píng)價(jià)失真，同時(shí)較Ise等的標(biāo)準(zhǔn)具有更強(qiáng)的可操作性。而對(duì)于另外兩個(gè)因素的試驗(yàn)表明48～72h的接種時(shí)間和0.5～1.5葉齡的水稻接種齡期是抗性鑒定的最佳條件，這一結(jié)果和O.Washio等的研究結(jié)果也是一致的。作者曾采用田間小區(qū)鑒定方法研究過27份粳稻品種對(duì)水稻條紋葉枯病的抗性表現(xiàn)，并根據(jù)抗感病對(duì)照的鑒定后實(shí)際產(chǎn)量確定了品種抗性分級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)(表6)，盡管在兩年的試驗(yàn)中供試水稻品種對(duì)該病的田間抗性表現(xiàn)出一定的差異，但鎮(zhèn)稻88、連粳4號(hào)、徐稻3號(hào)等抗病品種均表現(xiàn)為高抗或抗病，而感病品種武育粳3號(hào)也均表現(xiàn)為感病或高感，表明這一分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是可行的。

作為病客發(fā)生最為嚴(yán)重的江蘇省，也是抗病品種最主要的選育和生產(chǎn)地，短短3年間抗病品種已占領(lǐng)了江蘇省水稻種子市場(chǎng)的1/3，并輸出到周邊省份，抗條紋葉枯病水稻品種種子已日趨成為江蘇省種子市場(chǎng)的一項(xiàng)主要產(chǎn)業(yè)?？墒瞧駷橹箛?guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或地方標(biāo)準(zhǔn)中尚沒有抗條紋葉枯病水稻品種種子的相關(guān)規(guī)程。為規(guī)范這一新興產(chǎn)業(yè)，非常有必要制定一套鑒定技術(shù)規(guī)范，為抗條紋葉枯病水稻品種種子產(chǎn)業(yè)的品牌建設(shè)和可持續(xù)發(fā)展保駕護(hù)航。以本研究結(jié)果為基礎(chǔ)在江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局的立項(xiàng)支持下，已成功制定江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)，而行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的制定也得到國(guó)家農(nóng)技推廣中心的立項(xiàng)支持。