摘要：以亞華15品種甜椒為試材，對(duì)甜椒貯藏過(guò)程中病原菌的種類、存在部位及致病性進(jìn)行研究。結(jié)果表明：甜椒貯藏前的主要潛伏侵染菌為盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢，辣椒軟腐病菌和交鏈孢菌，其中果蒂帶菌率最高；貯藏期引起果蒂和果柄腐爛的主要致腐菌為鐮刀菌和辣椒軟腐病菌，主要引起果肉和果蒂發(fā)病，同時(shí)盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢也能夠引起果蒂和果肉腐爛；貯藏前的表面消毒處理可以降低貯藏期的病害發(fā)生率和發(fā)病程度。

關(guān)鍵詞：甜椒；潛伏侵染菌；貯藏期病原菌

中圖分類號(hào)：S641.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006－6500(2008)04－0015－04

甜椒是目前貯藏量和運(yùn)輸量較大、經(jīng)濟(jì)效益較高的蔬菜種類之一。由于甜椒對(duì)低溫敏感，貯藏溫度一般控制在8～12℃，且相對(duì)濕度較高，因此貯藏期易造成腐爛。目前，人們已從甜椒的品質(zhì)和生理方面進(jìn)行了大量研究。在貯藏保鮮上，尤其是在品種耐貯性、果梗對(duì)貯藏的影響、辣椒貯藏生理、辣椒保鮮劑等方面也做了許多工作。然而，研究大多集中在防治甜椒采后腐爛的各種措施上，關(guān)于甜椒病原菌種類和規(guī)律以及潛伏性侵染研究報(bào)道較少。近年來(lái)的研究表明，要從根本上解決因微生物引起的果蔬采后腐爛，必須先確定引起腐爛的主要病原菌及其侵染的主要特征，以便更有針對(duì)性地制定預(yù)防措施。筆者系統(tǒng)研究了甜椒貯藏期引起腐爛的主要病原菌的種類和致病性，為其采后貯運(yùn)過(guò)程中的保鮮和貯藏期的預(yù)測(cè)提供參考。

1 材料和方法

1.1材料

供試品種亞華15號(hào)購(gòu)于市場(chǎng)。

1.2方法

1.2.1貯藏前甜椒果實(shí)與果柄部潛伏侵染的病菌種類調(diào)查選取無(wú)病、無(wú)蟲(chóng)和無(wú)傷口的成熟度一致，顏色鮮艷的甜椒50只，用蘸有清水的吸水紙將果實(shí)表面的泥土擦洗干凈，晾干備用。用無(wú)菌解剖刀切取果柄中部0.5cm長(zhǎng)度、果蒂1／6且?guī)л嗥?、果?shí)中部0.5cm×0.5cm大小的組織塊，分別用無(wú)菌水沖洗干凈后置于超凈工作臺(tái)上分開(kāi)晾干，隨后分別將其放入70％的酒精中浸泡30s，迅速用滅菌濾紙吸干酒精，轉(zhuǎn)入1％的次氯酸鈉溶液中浸泡1min，用無(wú)菌水清洗3次，再用滅菌濾紙吸干組織塊，植入PDA培養(yǎng)基，27℃恒溫培養(yǎng)2～3d，當(dāng)培養(yǎng)出的菌落直徑1cm時(shí)，用接種針挑取菌絲尖端置于另一含PDA的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，重復(fù)上述操作2～3次即可得到純化菌種。根據(jù)真菌菌絲、分生孢子梗及分生孢子的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定，統(tǒng)計(jì)辣椒不同部位的病原菌種類及數(shù)量。

1.2.2貯藏期病原菌的分離甜椒貯藏前進(jìn)行兩種處理，然后在15℃貯藏。處理I：消毒處理，先用清水將果實(shí)表面清洗干凈，用干凈紗布擦干，然后用75％的乙醇表面消毒，再用紫外線消毒(15w紫外燈下30cm處，照射處理30min)，最后用葡萄保鮮專用袋進(jìn)行包裝貯藏；處理Ⅱ：未消毒處理，將采摘的果實(shí)直接用葡萄專用保鮮袋包裝貯藏。貯藏一個(gè)月時(shí)，開(kāi)始調(diào)查發(fā)病部位的病原菌種類及數(shù)量，方法是在辣椒發(fā)病部位的病健交界處切取小塊植物組織，進(jìn)行表面消毒、分離和培養(yǎng)，得到不同菌株。

1.2.3對(duì)分離得到的菌株進(jìn)行病原致病性鑒定將分離純化得到的菌株返接在寄主組織的相對(duì)應(yīng)部位上，如果發(fā)病癥狀與該菌株分離前的發(fā)病癥狀一致，便可對(duì)其致病條件及侵染途徑進(jìn)行進(jìn)一步的研究。具體方法如下：

(1)待返接材料的準(zhǔn)備。選取健康無(wú)病、無(wú)蟲(chóng)、無(wú)傷口的辣椒，清水洗凈后，用1％的次氯酸鈉浸泡2min，再用無(wú)菌水沖洗干凈，放在超凈工作臺(tái)上吹干備用。果肉、果柄和果蒂部位的返接試驗(yàn)分3組進(jìn)行，每組15個(gè)。

(2)接種病原菌的制備。將待接種菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5～7d，長(zhǎng)滿孢子后用無(wú)菌水配置成孢子懸浮液(濃度為在10×40倍顯微鏡下，每個(gè)視野20～40個(gè)孢子)。

(3)返接試驗(yàn)。把已純化的菌株回接被測(cè)果實(shí)及果梗，分“有傷”和“無(wú)傷”兩種接種方式，通過(guò)接種觀察病斑發(fā)展速度和發(fā)病程度，判斷被接菌株致病能力的大小。

(4)有傷接種。分別在不同組織部位上用接種針刺破5個(gè)孔，孔眼可集中在一起，使直徑范圍約5mm，用無(wú)菌毛筆蘸取菌液涂于刺傷處。

(5)無(wú)傷接種。直接用無(wú)菌毛筆蘸取菌液涂于接種組織部位。

(6)返接后培養(yǎng)。返接后的組織置于加濕干燥器內(nèi)培養(yǎng)，蓋口用透氣薄膜隔離以達(dá)到保濕、密封、透氣、防污染的作用，培養(yǎng)濕度為90％，溫度15℃，10d后檢查發(fā)病情況。

2 結(jié)果與分析

2.1辣椒貯藏前病原菌檢測(cè)結(jié)果

對(duì)貯藏前的潛伏病菌進(jìn)行分離與檢測(cè)可以確定引起采后病原菌的最初來(lái)源，檢測(cè)結(jié)果如表1。從甜椒不同組織部位分離的病菌不同，在果肉中分離得到了盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢，青霉菌和辣椒軟腐病菌；在果蒂中分離到了交鏈孢菌似，盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢，青霉菌和辣椒軟腐病菌；在果柄中分離得到了灰葡萄孢，交鏈孢菌和辣椒軟腐病菌。從檢測(cè)結(jié)果看出，果蒂帶菌率明顯高于果肉和果柄組織，主要以辣椒軟腐病菌和交鏈孢菌為主；果肉和果柄中的辣椒軟腐病菌帶菌率也較其它菌多，說(shuō)明甜椒在貯藏前的潛伏侵染菌主要為辣椒軟腐病菌。另外，交鏈孢菌在果蒂和果柄中的帶菌率相對(duì)較高，盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢在果蒂中的帶菌率比較高，所以這兩種菌也被認(rèn)為是甜椒潛伏侵染菌。

2.2辣椒貯藏期病原菌的檢測(cè)結(jié)果

對(duì)兩種不同處理(未消毒和消毒)的病果部位進(jìn)行病原菌分離，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2看出，未消毒處理果實(shí)的發(fā)病率明顯高于消毒處理的果實(shí)發(fā)病率，說(shuō)明消毒處理在一定程度上降低了病害的發(fā)生。鐮刀菌在果實(shí)的各個(gè)部位均可以分離到且發(fā)病普遍較重，主要引起甜椒的果蒂腐爛?；移咸焰咧淮嬖谟诠星?guī)Ь瘦^低。交鏈孢菌也主要引起果蒂腐爛，但通過(guò)貯藏前的消毒可以減輕其在果柄的發(fā)病。盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢和青霉菌也能夠引起果蒂和果肉腐爛，但發(fā)病率相對(duì)較低。辣椒軟腐病菌主要引起果肉發(fā)病。

2.3貯藏期主要致腐菌的致病力測(cè)定

通過(guò)對(duì)各病原菌采后致病力的研究，可以確定引起甜椒采后腐爛的主要致腐菌，推斷各致腐菌的不同侵入方式，因此，筆者對(duì)甜椒不同部位進(jìn)行有傷和無(wú)傷兩種方式接種病原菌，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。從表3看出，不同病原菌在有傷接種后的發(fā)病率均高于元傷接種，說(shuō)明傷口是甜椒采后腐爛病原菌入侵的一個(gè)主要通道。結(jié)合表2分析，可以再次證明鐮刀菌主要引起果柄和果蒂腐爛，發(fā)病率高，發(fā)病程度重?；移咸焰吆屠苯奋浉【辉诮臃N果肉后致病，且有傷接種發(fā)病程度明顯高于無(wú)傷接種；盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢和交鏈孢菌在果蒂和果肉中致病，不使果柄腐爛，且盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢在果蒂上的發(fā)病率明顯高于交鏈孢菌，但在果肉上有傷接種時(shí)的發(fā)病率低于交鏈孢菌，因此，筆者認(rèn)為交鏈孢菌比盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢更容易利用果肉組織的營(yíng)養(yǎng)，迅速?gòu)募闹鱾谇秩?。從?還可以看出，不同組織部位的致腐菌不相同，而且在接種方式、發(fā)病率和發(fā)病程度上也有一定的差異。

3 結(jié)論與討論

(1)本研究結(jié)果表明，在貯藏期，甜椒的果柄、果蒂和果肉均會(huì)發(fā)生腐爛，且以果柄腐爛最為嚴(yán)重。甜椒不同組織部位的優(yōu)勢(shì)致病菌不同。通過(guò)返接試驗(yàn)表明傷口是甜椒采后病原菌侵入的一個(gè)主要通道。

(2)通過(guò)對(duì)甜椒貯藏前的攜帶菌進(jìn)行分離檢測(cè)可以看出，采前分離到的盤(pán)長(zhǎng)孢狀刺盤(pán)孢、青霉菌、辣椒軟腐病菌、灰葡萄孢和交鏈孢菌在甜椒貯藏期發(fā)病組織中均可檢測(cè)到，這說(shuō)明這幾種菌是采前侵染，采后致病的，所以，我們應(yīng)加強(qiáng)采前管理，盡量減少甜椒貯藏前的帶菌率。

(3)在甜椒采后發(fā)病組織中分離到了鐮刀菌，但在貯藏前未發(fā)現(xiàn)該菌，說(shuō)明這種菌是采后侵染的，這種菌可能來(lái)源于貯藏環(huán)境中的附生菌，但具體的來(lái)源及侵染途徑還有待于進(jìn)一步的研究。

(4)在試驗(yàn)中嘗試在貯藏前對(duì)甜椒進(jìn)行表面消毒來(lái)觀測(cè)其效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)表面消毒處理在一定程度上可以降低貯藏期的發(fā)病率，原因可能是表面消毒降低了貯藏前的帶菌率。但是采用何種表面消毒方式、最佳劑量的選擇及對(duì)貯藏果實(shí)有無(wú)副作用等工作還有待于更深入和細(xì)致地研究。由于不少采后病害是由采前侵染的病原菌引起的，并且對(duì)于采前病原菌的控制很難，因此，筆者認(rèn)為在采前對(duì)貯藏果實(shí)進(jìn)行有效的表面消毒處理是必要的。

(5)在試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)，隨著果柄和果蒂的腐爛，果肉的腐爛程度也隨之加快，因此，在貯藏過(guò)程中要對(duì)果柄和果蒂采取有效措施加以控制，以不影響甜椒貯藏時(shí)的外觀品質(zhì)。

(6)在致病性接種試驗(yàn)中可以看出，有傷接種的發(fā)病率普遍高于未刺傷接種，因此，推測(cè)傷口是病原菌的主要侵入途徑，我們除了在貯藏前需及時(shí)對(duì)有傷果實(shí)進(jìn)行剔除外，同時(shí)還要注意在采收、貯藏和搬運(yùn)過(guò)程中盡量減少傷口的形成。