[摘要] 目的 探討原發(fā)性干燥綜合征（primary Sj?gren syndrome，PSS）患者外周血T細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）ζ鏈及Zeta鏈相關(guān)蛋白激酶70（Zeta-chain-associated protein kinase 70，ZAP70）的表達(dá)水平。方法 選取2024年1月至6月于九江市第一人民醫(yī)院就診的PSS患者36例納入觀察組，同期健康體檢者30名納入對(duì)照組。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)外周血單個(gè)核細(xì)胞中TCRζ鏈及ZAP70的表達(dá)水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T細(xì)胞亞群。采用Pearson相關(guān)分析TCRζ鏈、ZAP70與其他檢測(cè)指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果 觀察組患者的TCRζ鏈、ZAP70相對(duì)表達(dá)量均顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），CD8+、白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）均顯著高于對(duì)照組（Plt;0.05）。Pearson相關(guān)分析顯示：TCRζ鏈與CD4+呈正相關(guān)，與CD8+、IL-6呈負(fù)相關(guān)（Plt;0.05）；ZAP70與CD8+、IL-6呈負(fù)相關(guān)（Plt;0.05）。結(jié)論 PSS患者的TCRζ鏈及ZAP70表達(dá)均下調(diào)，可能通過T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)異常加劇PSS的免疫紊亂。

[關(guān)鍵詞] 原發(fā)性干燥綜合征；T細(xì)胞受體ζ鏈；Zeta鏈相關(guān)蛋白激酶70；T細(xì)胞亞群；發(fā)病機(jī)制

[中圖分類號(hào)] R446.62" " " [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A" " " [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2025.22.004

Expression of TCRζ chain and ZAP70 in primary Sj?gren syndrome

SHI Zhen1， HAO Meng1， JIANG-FANG Tinghui1， XUE Guohui1， YU Le2

1.Department of Clinical Laboratory， Jiujiang NO.1 People’s Hospital， Jiujiang 332000， Jiangxi， China; 2.Department of Rheumatology and Immunology， Jiujiang NO.1 People’s Hospital， Jiujiang 332000， Jiangxi， China

[Abstract] Objective To investigate the expression levels of T cell receptor （TCR） ζ chain and Zeta-chain-associated protein kinase 70 （ZAP70） in peripheral blood of patients with primary Sj?gren syndrome （PSS）. Methods Thirty-six patients with PSS who were treated at Jiujiang NO.1 People’s Hospital from January to June 2024 were enrolled in observation group， and 30 healthy subjects during the same period were enrolled in control group. Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction was used to detect the expression levels of TCRζ chain and ZAP70 in peripheral blood mononuclear cells， and flow cytometry was used to detect peripheral blood T cell subsets. Pearson correlation was used to analyze the correlation between TCRζ chain， ZAP70 and other detection indicators. Results The relative expression levels of TCRζ chain and ZAP70 in observation group were significantly lower than those in control group （Plt;0.05）， while CD8+ and interleukin-6 （IL-6） were significantly higher than those in control group （Plt;0.05）. Pearson correlation analysis showed that TCRζ chain was positively correlated with CD4+， and negatively correlated with CD8+ and IL-6 （Plt;0.05）. ZAP70 was negatively correlated with CD8+ and IL-6 （Plt;0.05）. Conclusion The expressions of TCRζ chain and ZAP70 are down-regulated in PSS patients， which may exacerbate the immune disorder of PSS through abnormal T cell signal transduction.

[Key words] Primary Sj?gren syndrome; T cell receptor ζ chain; Zeta-chain-associated protein kinase 70; T cell subsets; Pathogenesis

原發(fā)性干燥綜合征（primary Sj?gren syndrome，PSS）是一種累及外分泌腺的慢性炎癥性自身免疫病，臨床上常見侵犯唾液腺和淚腺，表現(xiàn)為口眼干燥。PSS在人群中的發(fā)病率為0.3%～1.5%，女性群體更常見[1]。該病可累及肺臟、肝臟、腎臟、血液、神經(jīng)等器官和系統(tǒng)，臨床表現(xiàn)多樣，嚴(yán)重時(shí)可因并發(fā)癥而危及生命[2]。PSS的發(fā)病主要與環(huán)境、內(nèi)分泌、免疫和遺傳因素有關(guān)[3]。目前認(rèn)為PSS早期以T細(xì)胞介導(dǎo)為主，T細(xì)胞的異常激活可誘發(fā)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)[4]；" T細(xì)胞受體（T cell receptor，TCR）/CD3復(fù)合物與抗原呈遞細(xì)胞表面的主要組織相容性復(fù)合體抗原肽結(jié)合，是T細(xì)胞特異性識(shí)別抗原、進(jìn)而活化細(xì)胞、傳導(dǎo)信號(hào)并激發(fā)抗原特異性免疫反應(yīng)的重要起始途徑。T細(xì)胞的活化受TCRζ鏈數(shù)量影響。Zeta鏈相關(guān)蛋白激酶70（Zeta-chain-associated protein kinase 70，ZAP70）作為一種在TCRζ鏈下游信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用的酪氨酸蛋白激酶，與TCRζ鏈共同參與對(duì)T細(xì)胞免疫活化的調(diào)控，維持機(jī)體正常的免疫功能。目前關(guān)于TCRζ鏈及ZAP70表達(dá)缺失如何導(dǎo)致TCR/CD3復(fù)合物引起T細(xì)胞活化異常的機(jī)制尚不明確。TCRζ鏈與ZAP70在免疫缺陷疾病[5]、淋巴瘤[6]、關(guān)節(jié)炎[7]等疾病中異常表達(dá)，但關(guān)于TCRζ鏈與ZAP70在干燥綜合征中表達(dá)的研究較少。本課題通過檢測(cè)PSS患者外周血中TCRζ鏈及ZAP70表達(dá)水平，探索TCRζ鏈及ZAP70參與PSS發(fā)病的機(jī)制，為臨床診療提供新的思路和方向。

1" 資料與方法

1.1" 研究對(duì)象

選取2024年1月至6月于九江市第一人民醫(yī)院就診的PSS患者36例為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合2016年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟制定的PSS分類標(biāo)準(zhǔn)[8]；②至少有眼干或口干癥狀之一且持續(xù)3個(gè)月以上，或出現(xiàn)自身抗體陽(yáng)性。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他自身免疫?。虎诮诨几腥拘约膊?；" "③合并腫瘤。選取同期健康體檢者30名納入對(duì)照組。本研究經(jīng)九江市第一人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：JJSDYRMYY-YXLL-2025-055），所有研究對(duì)象均在充分了解研究相關(guān)事宜后簽署知情同意書，自愿參與本研究。

1.2" 檢測(cè)方法

1.2.1" TCRζ鏈、ZAP70的檢測(cè)" 采集受試者抗凝全血6ml，密度梯度離心法采集外周血單個(gè)核細(xì)胞，將其懸液轉(zhuǎn)移至2.0ml的離心管中，1500轉(zhuǎn)/min室溫離心5～10min；棄上清液，向剩余沉淀細(xì)胞中加1ml Trizol試劑，反復(fù)吹打直至沉淀細(xì)胞溶解；室溫靜置5min，預(yù)冷離心機(jī)4℃、2000轉(zhuǎn)/min離心30min；加入0.2ml氯仿至已裂解完全的細(xì)胞中，振蕩10～15s，室溫靜置5min；4℃、12 000轉(zhuǎn)/min離心15min；留取上層清液轉(zhuǎn)移至新的2.0ml離心管中（嚴(yán)禁吸取中下層），并向離心管中加入與上清液等體積的異丙醇，混勻，室溫靜置5～10min；4℃、12 000轉(zhuǎn)/min離心10min，棄去上清液；加入75%乙醇1ml混勻清洗沉淀物；4℃、12 000轉(zhuǎn)/min離心10min；棄去上清液，室溫下于超凈臺(tái)內(nèi)干燥10～15min，溶于DEPC水中至20μl，振蕩器振蕩至完全溶解。

根據(jù)TCRζ鏈、ZAP70基因序列引物，應(yīng)用Takara公司逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2" T細(xì)胞亞群、超敏C反應(yīng)蛋白、白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)" 采用RaiseCyte 2L6C流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞亞群CD4+、CD8+。采用貝克曼特定蛋白儀散射免疫比濁法檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白（hypersensitive C-reaction protein，hsCRP），采用羅氏化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）。

1.3" 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理數(shù)據(jù)。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ ）表示，比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析各指標(biāo)之間的相關(guān)性。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" 結(jié)果

2.1" 兩組研究對(duì)象的一般資料比較

觀察組男7例，女29例；年齡23～67歲，平均（40.3±8.4）歲；病程2.1～18.1年，平均（3.5±0.9）年。對(duì)照組男6例，女24例；年齡22～65歲，平均（39.9±8.2）歲。兩組研究對(duì)象的性別、年齡比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。

2.2" 兩組研究對(duì)象的TCRζ鏈、ZAP70、CD4+、CD8+、hsCRP、IL-6比較

觀察組患者的TCRζ鏈、ZAP70相對(duì)表達(dá)量均顯著低于對(duì)照組（Plt;0.05），CD8+、IL-6均顯著高于對(duì)照組（Plt;0.05），兩組研究對(duì)象的CD4+、hsCRP比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05），見表1。

2.3" 觀察組TCRζ鏈、ZAP70與CD4+、CD8+、hsCRP、IL-6的相關(guān)性

TCRζ鏈與CD4+呈正相關(guān)，與CD8+、IL-6呈負(fù)相關(guān)（Plt;0.05），與hsCRP無(wú)明顯相關(guān)性（Pgt;0.05），見表2。ZAP70與CD8+、IL-6呈負(fù)相關(guān)（Plt;0.05），與CD4+、hs-CRP均無(wú)明顯相關(guān)性（Pgt;0.05）。

3" 討論

PSS是一種由多種因素共同作用致使機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫出現(xiàn)異常復(fù)雜的自身免疫?。恢饕卣鳛橥僖合俸蜏I腺遭受免疫介導(dǎo)損傷，進(jìn)而引發(fā)口干、眼干等癥狀。在PSS患者的血清中可檢測(cè)到多種自身抗體、炎癥因子、免疫復(fù)合物及高水平的類風(fēng)濕因子和免疫球蛋白G[9]。免疫功能失調(diào)在多種自身免疫病發(fā)病機(jī)制中起重要作用，特別是T細(xì)胞免疫功能異常。研究表明T細(xì)胞在PSS組織損傷進(jìn)程中扮演關(guān)鍵角色，參與對(duì)唾液腺、淚腺等組織的破壞，影響疾病的發(fā)生、發(fā)展。T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)異常是T細(xì)胞免疫功能障礙的基礎(chǔ)[10]。研究發(fā)現(xiàn)PSS的發(fā)病與T細(xì)胞亞群表達(dá)失調(diào)有關(guān)。T細(xì)胞可通過分泌IL-6等細(xì)胞因子實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)功能。具體而言，T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子參與誘導(dǎo)B細(xì)胞活化、促進(jìn)其增殖，還可促使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，并推動(dòng)免疫球蛋白的類別轉(zhuǎn)換等一系列免疫反應(yīng)，參與PSS的發(fā)病進(jìn)程[11]。TCRζ鏈作為受體激活的蛋白酪氨酸激酶底物，在受體與配體結(jié)合后發(fā)生酪氨酸磷酸化，參與淋巴細(xì)胞活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。研究發(fā)現(xiàn)TCRζ鏈表達(dá)和功能改變與慢性炎癥及自身免疫病密切相關(guān)，其表達(dá)降低可能削弱TCR信號(hào)傳導(dǎo)，導(dǎo)致T細(xì)胞異常活化[12]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中，外周血T細(xì)胞中的TCRζ鏈表達(dá)明顯降低甚至缺失，與疾病活動(dòng)度相關(guān)[13]。ZAP70蛋白在免疫細(xì)胞的生理活動(dòng)中扮演重要角色，其存在于T細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，一旦細(xì)胞信號(hào)通路被激活，ZAP70蛋白被募集至細(xì)胞膜上，對(duì)胸腺細(xì)胞的活化、成熟、細(xì)胞間黏附及細(xì)胞因子分泌等方面產(chǎn)生影響。正常生理狀態(tài)下，ZAP70在T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞中普遍表達(dá)，在B細(xì)胞內(nèi)卻不表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)ZAP70下調(diào)影響T細(xì)胞功能，加劇B細(xì)胞過度活化，被認(rèn)為是判斷慢性淋巴細(xì)胞白血病預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)PSS患者外周血TCRζ鏈和ZAP70表達(dá)均下調(diào)，與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腫瘤等疾病中TCRζ鏈和ZAP70表達(dá)下調(diào)的研究結(jié)果基本一致[13]；可能與PSS中抗炎因子減少抑制TCRζ鏈及ZAP70的表達(dá)水平有關(guān)[15]。TCRζ鏈及ZAP70的表達(dá)與CD8+、IL-6水平存在負(fù)相關(guān)，提示其表達(dá)下調(diào)或缺失可能導(dǎo)致機(jī)體免疫功能進(jìn)一步紊亂。TCR/CD3復(fù)合物是T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的重要結(jié)構(gòu)，TCRζ鏈?zhǔn)且环N跨膜信號(hào)蛋白，受體與配體結(jié)合后，TCRζ鏈發(fā)生酪氨酸磷酸化，參加淋巴細(xì)胞活化；ZAP70作為與TCRζ鏈密切相關(guān)的蛋白酪氨酸激酶，在眾多下游靶基因信號(hào)傳導(dǎo)的起始、激活及磷酸化環(huán)節(jié)中，均承擔(dān)舉足輕重的作用[16]。

綜上，TCRζ鏈和ZAP70在PSS患者中低表達(dá)，與T細(xì)胞亞群有相關(guān)性，可為PSS發(fā)病機(jī)制的研究提供線索，為臨床診療提供新的思路和方向。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2025–03–01）

（修回日期：2025–06–25）