摘要

為評(píng)價(jià)從番茄潛葉蛾Tuta absoluta幼蟲(chóng)僵蟲(chóng)中分離的蟲(chóng)生真菌在害蟲(chóng)生物防治中的應(yīng)用潛力，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征及ITS序列分析，對(duì)分離菌株進(jìn)行鑒定及生物學(xué)特性測(cè)定，并采用浸漬法測(cè)定其對(duì)番茄潛葉蛾2～4齡幼蟲(chóng)的毒力。結(jié)果表明，分離菌株為球孢白僵菌Beauveria bassiana，命名為TaBb2405。該菌株在25℃、PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，菌落日生長(zhǎng)速率為4.45 mm/d，培養(yǎng)至第12天菌落單位面積產(chǎn)孢量為2.73×105個(gè)/mm2。隨著該菌株孢子懸浮液濃度的增加，其對(duì)番茄潛葉蛾2～4齡幼蟲(chóng)的毒力逐漸增強(qiáng)。當(dāng)孢子懸浮液濃度為1.0×108個(gè)/mL時(shí)，2～4齡幼蟲(chóng)7 d累計(jì)校正死亡率分別可達(dá)82.22%、80.95%和80.00%;LC50分別為6.44×104、6.21×104個(gè)/mL和1.38×105個(gè)/mL。球孢白僵菌TaBb2405對(duì)番茄潛葉蛾各齡幼蟲(chóng)的毒力均較好，具進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)生防制劑的潛力。

關(guān)鍵詞

番茄潛葉蛾; 球孢白僵菌; 分離鑒定; 毒力; 生物學(xué)特性

中圖分類號(hào)：

S 476.12

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2024440

Identification and virulence assay of the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana strain TaBb2405 isolated from Tuta absoluta larvae

ZHANG Xiaoyuan1， LIU Guangdi1， QIAN Pengfan1， ZENG Minfang1， XIAO Haojun2，LI Yonghe1*， LUO Xulu2*

（1. College of Plant Protection， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201， China; 2. College of

Landscape and Horticulture， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201， China）

Abstract

To evaluate the biocontrol potential of an entomopathogenic fungus isolated from cadavers of Tuta absoluta larvae， the strain was identified through morphological characteristics and internal transcribed spacer （ITS） sequence analysis. Its biological characteristics and virulence against the 2nd-4th instar larvae of T.absoluta were also evaluated. The strain was identified as Beauveria bassiana and designated as TaBb2405. It showed optimal growth on PDA medium at 25℃， with a colony growth rate of 4.45 mm/d. After 12 days of cultivation， the spore yield reached 2.73×105conidia/mm2. Virulence bioassays using the immersion method revealed that mortality increased with increasing conidial concentrations. At 1×108 conidia/mL， the 7day cumulative adjusted mortality rates of the 2nd-4th instar larvae of T.absoluta were 82.22%， 80.95% and 80.00%， respectively. Corresponding LC50 values were 6.44×104， 6.21×104 and 1.38×105 conidia/mL. These results indicate that TaBb2405 possesses strong virulence across larval instars and holds promise for development as a biocontrol agent against T.absoluta.

Key words

Tuta absoluta; Beauveria bassiana; isolation and identification; virulence; biological characteristics

番茄潛葉蛾Tuta absoluta屬鱗翅目Lepidoptera麥蛾科Gelechiidae，主要為害多種茄科作物，嗜食番茄，是番茄的毀滅性害蟲(chóng)，可造成番茄50%～80%的產(chǎn)量損失，甚至絕產(chǎn)絕收［12］。番茄潛葉蛾原產(chǎn)于南美洲秘魯，2017年首次發(fā)現(xiàn)其入侵我國(guó)新疆伊犁［34］，之后迅速傳播擴(kuò)散，現(xiàn)已傳播至20余個(gè)省級(jí)區(qū)域，并在云南、新疆、山東、遼寧等番茄優(yōu)勢(shì)產(chǎn)區(qū)暴發(fā)成災(zāi)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2023年11月將其列入《一類農(nóng)作物病蟲(chóng)害名錄》進(jìn)行管理［56］。目前主要使用化學(xué)農(nóng)藥對(duì)番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)進(jìn)行防治，但由于幼蟲(chóng)潛葉、蛀莖等隱蔽性為害方式，使得化學(xué)農(nóng)藥不僅防治效果不理想，還使其對(duì)多種類型的化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生了抗藥性，如對(duì)氯蟲(chóng)苯甲酰胺達(dá)到高抗水平，對(duì)多殺霉素和茚蟲(chóng)威達(dá)到中等抗性水平等，抗藥性的產(chǎn)生增加了番茄潛葉蛾的防治難度［78］。因此，需探尋綠色高效的生物防治資源，為番茄潛葉蛾綠色防控新技術(shù)的研發(fā)提供備選資源。

球孢白僵菌Beauveria bassiana隸屬蟲(chóng)草科Cordycipitaceae白僵菌屬Beauveria，是最早發(fā)現(xiàn)的蟲(chóng)生真菌，廣泛分布于自然界，可侵染鱗翅目Lepidoptera、鞘翅目Coleoptera和膜翅目Hymenoptera等15目149科的700余種昆蟲(chóng)［910］，對(duì)80%的害蟲(chóng)種群造成潛在感染，具有高度的垂直和水平傳播能力［1112］，并且不會(huì)對(duì)環(huán)境造成明顯影響［1213］。目前已有研究證明，球孢白僵菌對(duì)多種鱗翅目害蟲(chóng)，如亞洲玉米螟Ostrinia furnacalis、馬尾松毛蟲(chóng)Dendrolimus punctatus、稻縱卷葉螟Cnaphalocrocis medinalis、美國(guó)白蛾Hyphantria cunea、斜紋夜蛾Spodoptera litura、草地貪夜蛾Spodoptera frugiperda、思茅松毛蟲(chóng)Dendrolimus kikuchii和黏蟲(chóng)Mythimna separata等具有良好的殺蟲(chóng)活性［1420］。其中，用球孢白僵菌防治亞洲玉米螟和馬尾松毛蟲(chóng)的案例最為成功，應(yīng)用面積曾達(dá)上百萬(wàn)公頃，為生防菌防治害蟲(chóng)的優(yōu)秀典范［2123］。

利用微生物進(jìn)行害蟲(chóng)防治已成為近年來(lái)的重要生防手段，但利用生防真菌防治番茄潛葉蛾的研究相對(duì)較少，特別是缺乏高毒力菌株資源。Ndayiragije等［24］篩選到一株對(duì)番茄潛葉蛾有毒力的球孢白僵菌菌株，具有一定防治效果，但殺蟲(chóng)速度較慢，6 d累計(jì)死亡率未超過(guò)60%;Aynalem等［25］從土壤中分離篩選出對(duì)番茄潛葉蛾具有高毒力的白僵菌菌株，但大部分菌株毒力不理想。截至目前，國(guó)內(nèi)鮮少有自然侵染番茄潛葉蛾的白僵菌的相關(guān)報(bào)道。因此，迫切需要尋找并篩選出防治番茄潛葉蛾的高效菌株。本研究對(duì)從罹病番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)蟲(chóng)體上分離純化獲得的1株蟲(chóng)生真菌，采用形態(tài)學(xué)特征及ITSrDNA序列對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定，同時(shí)研究該菌株的生物學(xué)特性以及對(duì)番茄潛葉蛾不同齡期幼蟲(chóng)的毒力，以期為番茄潛葉蛾的生物防治和微生物源農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試僵蟲(chóng)：罹病番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)采自云南省昆明市云南農(nóng)業(yè)大學(xué)種植番茄的溫室大棚內(nèi)（102°44′E，25°07′N），帶回實(shí)驗(yàn)室后進(jìn)行蟲(chóng)生真菌的分離。

供試蟲(chóng)源：用于菌株毒力測(cè)定的番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)為實(shí)驗(yàn)室繼代飼養(yǎng)3代以上的穩(wěn)定種群，用番茄植株作為寄主植物進(jìn)行繁殖。選擇生長(zhǎng)發(fā)育整齊一致的2～4齡幼蟲(chóng)為供試蟲(chóng)源。

供試培養(yǎng)基：1）馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。2）馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PSA）：馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。3）薩氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（SDAY）：葡萄糖40 g，蛋白胨10 g，酵母浸粉10 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。4）麥芽浸膏瓊脂培養(yǎng)基（MEA）：麥芽提取物35 g，蛋白胨5 g，瓊脂15 g，蒸餾水1 000 mL［26］。

1.2 方法

1.2.1 菌株的分離純化

將罹病番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)置于含濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿中保濕培養(yǎng)，待蟲(chóng)體表面出現(xiàn)菌絲或分生孢子后，在超凈工作臺(tái)內(nèi)用接種針挑取少量分生孢子，采用點(diǎn)接法接種于PDA培養(yǎng)基上，置于（27±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)5～7 d，用接種針挑取菌落邊緣菌絲于新的PDA培養(yǎng)基上純化培養(yǎng)。重復(fù)上述操作直至得到純菌株，命名為TaBb2405，轉(zhuǎn)入PDA斜面培養(yǎng)基生長(zhǎng)5 d后置于４℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 菌株的形態(tài)觀察和分子鑒定

形態(tài)觀察：將菌株的分生孢子點(diǎn)接于PDA培養(yǎng)基（直徑9 cm）中央，在27℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，每日觀察菌落形態(tài)及顏色。培養(yǎng)5～7 d后，挑取新鮮菌絲于滅菌載玻片上，在光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS CX43）下觀察菌株菌絲、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和孢子形態(tài)的顯微結(jié)構(gòu)。

分子鑒定和系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建：采用D3195 HP Fungal DNA Kit（OMEGA）提取真菌基因組DNA，選用真菌通用引物ITS1 （5′AGAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG3′），ITS4 （5′TCCTCCG

CTTATTGATATGC3′）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物由昆明擎科生物科技有限公司測(cè)序。測(cè)序結(jié)果經(jīng)Clustal X、BioEdit處理后，在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)，下載與目標(biāo)序列具有高相似性的序列，使用MEGA 11.0軟件通過(guò)鄰接法（neighborjoining method）構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，進(jìn)化樹(shù)分支的置信度采用bootstrap法分析，重復(fù)次數(shù)為1 000次。

1.2.3 菌株的生物學(xué)特性測(cè)定

培養(yǎng)基種類對(duì)菌株生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響：采用點(diǎn)接法將菌株的分生孢子分別接種于PDA、PSA、SDAY和MEA培養(yǎng)基的平板中央，置于27℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，定時(shí)觀察并記錄菌落色澤、形態(tài)及產(chǎn)孢時(shí)間等，并采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌落生長(zhǎng)速率。培養(yǎng)至第12天，用滅菌打孔器（直徑10 mm）自菌落中心點(diǎn)至邊緣距離的1/2處打取菌餅，每個(gè)處理打?。硞€(gè)菌餅，置于20 mL含有0.05% 吐溫80的無(wú)菌水中，磁力攪拌20 min獲得孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板測(cè)定孢子濃度，并計(jì)算菌落單位面積的產(chǎn)孢量，每個(gè)處理重復(fù)5次［27］。

培養(yǎng)溫度對(duì)菌株生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響：采用篩選出的適宜培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度分別設(shè)置為20、25、30、35℃，測(cè)定菌落生長(zhǎng)速率及產(chǎn)孢量。每個(gè)處理重復(fù)5次。

菌落直徑（mm）＝（菌落橫徑＋菌落縱徑）/2;

菌落生長(zhǎng)速率（mm/d）＝平均菌落直徑／培養(yǎng)天數(shù);

菌落單位面積產(chǎn)孢量（個(gè)/mm2）＝平均每小格孢子數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)／菌餅面積。

1.2.4 菌株的毒力測(cè)定

采用浸漬法［28］測(cè)定菌株致病力。將番茄潛葉蛾2、3齡和4齡幼蟲(chóng)分別在濃度為1×108、1×107、1×106、1×105個(gè)/mL和1×104個(gè)/mL的孢子懸浮液中浸漬10 s后取出，以含有0.05% 吐溫80的無(wú)菌水浸漬10 s作為對(duì)照，用滅菌濾紙吸干蟲(chóng)體表面多余水分后移至底部墊有濕潤(rùn)濾紙片的養(yǎng)蟲(chóng)盒（d=6 cm）內(nèi)飼養(yǎng)，每日更換新鮮番茄葉片供其取食，將處理后的幼蟲(chóng)置于溫度（25±1）℃，相對(duì)濕度（70±5）%，光周期L∥D=12 h∥12 h的人工氣候箱中飼養(yǎng)。每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)20頭幼蟲(chóng)，接種后每天定時(shí)觀察，連續(xù)觀察7 d，記錄幼蟲(chóng)死亡數(shù)量，計(jì)算累計(jì)校正死亡率。對(duì)死亡后的幼蟲(chóng)進(jìn)行單頭保濕培養(yǎng)觀察，待死亡蟲(chóng)體表面長(zhǎng)出白色菌絲或白色分生孢子時(shí)則視為被白僵菌侵染致死。

累計(jì)校正死亡率＝（處理組累計(jì)死亡率－對(duì)照組累計(jì)死亡率）/（1－對(duì)照組累計(jì)死亡率）×100%。

1.3 數(shù)據(jù)分析

根據(jù)統(tǒng)計(jì)的幼蟲(chóng)死亡數(shù)，用Excel計(jì)算出各處理的幼蟲(chóng)死亡率和累計(jì)校正死亡率。使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行菌落直徑及單位面積產(chǎn)孢量差異顯著性分析，使用Probit回歸分析TaBb2405菌株對(duì)各齡幼蟲(chóng)的毒力，計(jì)算半致死濃度LC50和半致死時(shí)間LT50，利用Origin 2021繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 致病菌株的分離和鑒定

2.1.1 形態(tài)學(xué)鑒定

從罹病番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)中分離得到一株真菌，命名為TaBb2405，在PDA培養(yǎng)基上，培養(yǎng)初期菌落呈白色絨狀，邊緣有放射性毛狀菌絲，呈環(huán)狀生長(zhǎng);至產(chǎn)孢時(shí)，菌落中間略凸起，孢子層呈粉狀，長(zhǎng)勢(shì)均勻，菌落呈棉絮狀;培養(yǎng)至后期，菌落呈淡黃色粉末狀，背面呈現(xiàn)黃色（圖1a， b）。在光學(xué)顯微鏡下，分生孢子無(wú)色、近球形，少數(shù)卵圓形，營(yíng)養(yǎng)菌絲細(xì)長(zhǎng)無(wú)色;分生孢子梗形成穗狀產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)（圖1c， d）。番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)感染TaBb2405菌株后，初期行動(dòng)遲緩，食欲下降，取食量減少，感染2～3 d后幼蟲(chóng)蟲(chóng)體開(kāi)始僵硬化，體表長(zhǎng)出少量白色菌絲，后期菌絲生長(zhǎng)迅速，布滿幼蟲(chóng)體表，菌絲體長(zhǎng)出粉狀分生孢子（圖1e， f）。挑取病蟲(chóng)體表孢子鏡檢，分生孢子與PDA培養(yǎng)基上的菌株TaBb2405形態(tài)一致。

2.1.2 菌株TaBb2405的分子生物學(xué)鑒定

對(duì)菌株TaBb2405的rDNAITS進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)序獲得基因片段長(zhǎng)度為578 bp。將測(cè)序得到的ITS序列片段與GenBank中相關(guān)序列進(jìn)行BLAST比對(duì)，該菌株與球孢白僵菌Beauveria bassiana Ha5（GenBank登錄號(hào)：MK418853.1）相似性達(dá)99.8%。以長(zhǎng)枝木霉Trichoderma longibrachiatum （OR654946.1）為外群構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，菌株TaBb2405以99%的支持率與Ha5和Beauveria bassiana BB09（MK346246.1）聚為一支，親緣關(guān)系較近，同源性較高（圖2）。綜合形態(tài)特征鑒定和ITS序列相似性分析，菌株TaBb2405可以確定為球孢白僵菌Beauveria bassiana。

2.2 菌株TaBb2405的生物學(xué)特性

2.2.1 培養(yǎng)基種類對(duì)菌株TaBb2405生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響

由圖3a可知，球孢白僵菌菌株TaBb2405在供試培養(yǎng)基上均可生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)至第12天時(shí)，不同培養(yǎng)基上的菌落直徑及生長(zhǎng)速率存在極顯著差異（菌落直徑：F3，16=8.66，P＜0.01;生長(zhǎng)速率：F3，16=8.66，Plt;0.01）。菌株在PDA、PSA和MEA培養(yǎng)基上均快速生長(zhǎng)，第12天時(shí)菌落直徑分別為53.40、50.80 mm和53.00 mm，菌落生長(zhǎng)速率分別為4.45、4.23 mm/d和4.42 mm/d，均極顯著高于在SDAY培養(yǎng)基上的直徑（45.20 mm）與生長(zhǎng)速率（3.77 mm/d）。

菌株TaBb2405在不同培養(yǎng)基上單位面積產(chǎn)孢量存在極顯著差異（F3，16＝74.83，Plt;0.01）。其中在PDA培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量最高，達(dá)到3.01×105個(gè)/mm2，極顯著高于其他處理;其次為SDAY培養(yǎng)基，產(chǎn)孢量達(dá)到2.23×105個(gè)/mm2，在MEA培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量?jī)H為1.23×104個(gè)/mm2，極顯著低于其他處理（圖3b）。表明球孢白僵菌TaBb2405菌株較適宜在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。

2.2.2 培養(yǎng)溫度對(duì)菌株生長(zhǎng)及產(chǎn)孢的影響

4個(gè)溫度下球孢白僵菌菌株TaBb2405在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)12 d的菌落直徑及生長(zhǎng)速率存在極顯著差異（菌落直徑：F3，16=229.93，Plt;0.01;生長(zhǎng)速率：F3，16=1 443.27，Plt;0.01），在20、25、30℃和35℃條件下，菌落生長(zhǎng)速率依次為3.03、4.87、4.15 mm/d和0.70 mm/d，其中25℃條件下生長(zhǎng)最快，第12天菌落直徑為58.40 mm，極顯著高于其他溫度（圖3c）。

4個(gè)培養(yǎng)溫度下球孢白僵菌TaBb2405的產(chǎn)孢量存在極顯著差異（F3，16＝229.93，Plt;0.01），在25℃下培養(yǎng)至第12天時(shí)菌落單位面積產(chǎn)孢量為2.73×105個(gè)/mm2，極顯著高于30℃與20℃下的產(chǎn)孢量1.14×105個(gè)/mm2和7.6×104個(gè)/mm2，35℃下的產(chǎn)孢量?jī)H為6×103個(gè)/mm2（圖3d）。綜上所述，25℃條件下的PDA培養(yǎng)基更適宜球孢白僵菌TaBb2405菌株生長(zhǎng)。

2.3 菌株TaBb2405對(duì)番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)的毒力

2.3.1 菌株TaBb2405侵染后不同齡期番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)的累計(jì)校正死亡率

菌株TaBb2405孢子懸浮液可成功侵染不同齡期番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)，不同濃度孢子懸浮液對(duì)不同齡期幼蟲(chóng)毒力存在一定差異，具體表現(xiàn)為相同濃度孢子懸浮液對(duì)番茄潛葉蛾低齡幼蟲(chóng)致死率更高，且幼蟲(chóng)死亡率隨孢子懸浮液濃度增加而增加。孢子懸浮液濃度越高，番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)的累計(jì)校正死亡率越高。1×108個(gè)/mL濃度下，2、3齡和4齡幼蟲(chóng)接種后第4天累計(jì)校正死亡率均超過(guò)50%，分別為64.58%、66.67%和58.33%，并于接種后第7天分別達(dá)82.22%、80.95%和80.00%（圖4）。1×105個(gè)/mL濃度下，各齡期幼蟲(chóng)7 d累計(jì)死亡率均未超過(guò)50%。綜上，菌株TaBb2405的高濃度孢子懸浮液對(duì)番茄潛葉蛾各齡幼蟲(chóng)均具有較強(qiáng)的毒力，當(dāng)孢子懸浮液濃度降低時(shí)，殺蟲(chóng)活性減弱。同時(shí)，該菌株對(duì)2齡幼蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性優(yōu)于高齡幼蟲(chóng)，在低齡幼蟲(chóng)發(fā)生初期及時(shí)防治，效果更佳。

2.3.2 菌株TaBb2405對(duì)番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)的致死中濃度（LC50）和致死中時(shí)（LT50）

菌株TaBb2405在接種后第7天，對(duì)番茄潛葉蛾2～4齡幼蟲(chóng)的LC50分別為6.44×104、6.21×104個(gè)/mL和1.38×105個(gè)/mL（表1）。在相同時(shí)間下，對(duì)4齡番茄潛葉蛾LC50明顯大于其他齡期幼蟲(chóng)LC50，表明相同濃度下，菌株TaBb2405對(duì)2～3齡幼蟲(chóng)的毒力作用強(qiáng)于4齡幼蟲(chóng)。由表2可知，隨著孢子濃度的增加，菌株TaBb2405對(duì)番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)的LT50降低。2、3齡和4齡幼蟲(chóng)在1×106個(gè)/mL濃度下，LT50分別為5.43、5.60 d和5.74 d;當(dāng)孢子濃度增加到1×108個(gè)/mL濃度時(shí)，對(duì)2～4齡幼蟲(chóng)LT50降至3.16、3.05 d和3.50 d。

3 結(jié)論與討論

球孢白僵菌是重要的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)生防真菌，已廣泛應(yīng)用于多種農(nóng)林害蟲(chóng)防治，其不同菌株間生物學(xué)特性及致病力隨其寄主與地理位置的不同而存在差異。葉峻豪等［29］從土壤中篩選到一株對(duì)草地貪夜蛾幼蟲(chóng)具良好活性的球孢白僵菌QB10，發(fā)現(xiàn)其在28℃、PPDA培養(yǎng)基中產(chǎn)孢量最高、生長(zhǎng)速率最快;溫紹海等［30］發(fā)現(xiàn)分離自蠼螋成蟲(chóng)的球孢白僵菌HNC1及YY1在25℃下生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量以及萌發(fā)率最高;薛銳等［31］發(fā)現(xiàn)侵染紅棕象甲R(shí)hynchophorus ferrugineus幼蟲(chóng)的白僵菌KMND202111在PDA培養(yǎng)基上，30℃條件下生長(zhǎng)速率以及產(chǎn)孢量最佳;黃鵬等［32］通過(guò)對(duì)南洋臀紋粉蚧Planococcus lilacinus和石蒜綿粉蚧Phenacoccus solani具良好侵染活性的球孢白僵菌BBT02菌株生物學(xué)特性研究，發(fā)現(xiàn)其培養(yǎng)的最適溫度為28℃、最佳碳氮源為麥芽糖與蛋白胨。本研究從罹病番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)中分離得到1株蟲(chóng)生真菌，經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察和分子生物學(xué)鑒定，將該菌株鑒定為球孢白僵菌，命名為TaBb2405。通過(guò)對(duì)不同培養(yǎng)基和不同溫度處理下菌株TaBb2405生長(zhǎng)及產(chǎn)孢指標(biāo)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)25℃是該菌株菌落生長(zhǎng)、產(chǎn)孢的最佳溫度，溫度升高至35℃時(shí)，該菌株生長(zhǎng)緩慢、產(chǎn)孢量顯著下降，說(shuō)明菌株TaBb2405耐熱能力較弱，不宜用于高溫環(huán)境。菌株TaBb2405在PDA培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最快、產(chǎn)孢量最多，在SDAY培養(yǎng)基上的產(chǎn)孢量顯著多于PSA培養(yǎng)基，但生長(zhǎng)速度顯著慢于PSA培養(yǎng)基，而在MEA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度僅次于PDA培養(yǎng)基，但產(chǎn)孢量最低。因此，PDA培養(yǎng)基為菌株TaBb2405的最適培養(yǎng)基。

昆蟲(chóng)病原真菌對(duì)靶標(biāo)害蟲(chóng)的致病力強(qiáng)弱是菌株開(kāi)發(fā)應(yīng)用的關(guān)鍵，致死中濃度（LC50）和致死中時(shí)間（LT50）是描述菌株致病性的重要指標(biāo)。Ndayiragije等［24］使用球孢白僵菌BMAUMM6004分生孢子懸浮液處理番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)11 d后，1、2齡和3齡幼蟲(chóng)的死亡率分別為93.33%、86.67%和91.17%;Aynalem等［25］從不同類型土壤中分離到27株白僵菌，進(jìn)一步篩選得到8株對(duì)番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)有良好活性的菌株，其LC50為1.5×103～1.1×105個(gè)/mL，LT50在3.33～5.33 d之間。本研究中分離得到菌株TaBb2405以1×108個(gè)/mL濃度處理2齡幼蟲(chóng)7 d累計(jì)校正死亡率達(dá)82.22%，LC50和LT50分別為6.44×104個(gè)/mL和3.16 d，對(duì)番茄潛葉蛾具有較強(qiáng)的致病力，有進(jìn)一步研究的價(jià)值。本研究結(jié)果顯示，隨著番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)齡期的增加，球孢白僵菌TaBb2405菌株對(duì)其毒力逐漸降低。這與球孢白僵菌PfBb對(duì)朱紅毛斑蛾P(guān)hauda flammans 1～6齡幼蟲(chóng)［33］、球孢白僵菌對(duì)甜菜夜蛾Spodoptera exigua 3齡和4齡幼蟲(chóng)［34］，球孢白僵菌ZJU435對(duì)草地貪夜蛾1～4齡幼蟲(chóng)的毒力［35］等研究結(jié)果一致。這與幼蟲(chóng)不同階段的體壁結(jié)構(gòu)與體內(nèi)解毒酶活性不同相關(guān)，低齡幼蟲(chóng)的體壁相對(duì)較薄，而體壁的蠟質(zhì)層隨幼蟲(chóng)齡期的增加逐漸變厚，這增加了球孢白僵菌分生孢子侵入高齡幼蟲(chóng)的難度，導(dǎo)致其毒力降低［3637］。本研究分離得到TaBb2405菌株對(duì)番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)表現(xiàn)出較強(qiáng)的毒力，但其侵染致病作用是否與解毒酶或蛋白質(zhì)酶的含量及活性等相關(guān)還需要深入探究。番茄潛葉蛾低齡幼蟲(chóng)蟲(chóng)體微小，多潛藏于番茄植物組織中取食，較少直接暴露于外界環(huán)境中，隱蔽性強(qiáng)，取食量少，而當(dāng)番茄潛葉蛾自2齡末期進(jìn)入3齡后，其食量暴增，通過(guò)爬行或吐絲下垂等行為轉(zhuǎn)移葉片持續(xù)進(jìn)食［38］，這增加了番茄潛葉蛾與外界環(huán)境中藥劑或菌液直接接觸的概率，是防治番茄潛葉蛾的關(guān)鍵時(shí)期［39］。本研究參考Karaca等［28］、Hammad等［40］的方法測(cè)定分離得到的TaBb2405菌株與番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)充分接觸后的毒力，下一步還需結(jié)合田間試驗(yàn)，綜合評(píng)價(jià)菌株生防潛力［4142］，為防治番茄潛葉蛾提供白僵菌生防藥劑的備選菌株。

球孢白僵菌能夠通過(guò)人工接種的方式在多種植物體內(nèi)定殖并在其組織內(nèi)完成完整生活史，內(nèi)殖白僵菌不僅能直接促進(jìn)寄主植物生長(zhǎng)，還能誘導(dǎo)植物抗性增強(qiáng)，提高植物對(duì)植食性昆蟲(chóng)的抗性［13，43］，如定殖在玉米內(nèi)的球孢白僵菌會(huì)對(duì)亞洲玉米螟幼蟲(chóng)取食產(chǎn)生顯著的抑制作用，降低成蟲(chóng)產(chǎn)卵量與化蛹率［4445］;Altaf等［46］采用多種處理方法將球孢白僵菌定殖于玉米中，其對(duì)草地貪夜蛾發(fā)育速率及繁殖率均造成顯著影響;Wang等［47］通過(guò)多組學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)番茄內(nèi)殖白僵菌可通過(guò)調(diào)節(jié)植物的α茄堿等次生代謝物，抑制煙粉虱Bemisia tabaci的繁殖。番茄潛葉蛾幼蟲(chóng)多潛葉取食番茄葉片，為害隱蔽，下一步可利用球孢白僵菌內(nèi)殖特性進(jìn)一步研究其對(duì)番茄潛葉蛾的間接調(diào)控作用及作用機(jī)制，進(jìn)一步挖掘蟲(chóng)生真菌的生態(tài)學(xué)功能，更好理解微生物植物昆蟲(chóng)互作關(guān)系，為農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)中合理利用生防微生物提供依據(jù)。

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