中圖分類(lèi)號(hào) R917；R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼A 文章編號(hào) 1001-0408（2025）14-1755-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2025.14.11

ABSTRACTOBJECTIVEToevaluatethequalityof Euscaphis japonica fromdiferent habitats.METHODSTherelative correctinfactorsofgallcacid，protocatechuicacid，elagicacid，isoquercitrin，astragalinandapigeninwerecalculatedwith quercetias theinternalreference；therelativecorrction factorsofeuscaphicacid，oleanolicacid，stigmasteroland β -sitosterol werealsocalculatedwithursolicacidastheinternalreference.Thecontentsof12componentsin18batchesofsampleswere calculatedbyQAMSmethodandwerecomparedwithexternalstandardmethod.Atthesametime，thecontentsofwater-soluble extract，alcohol-soluble extract，total ash and acid-insoluble ash were detected.The quality of E ：japonica was evaluated by principalcomponentanalysis（PCA），orthogonalpartialleastsquares-discriminantanalysis（OPS-DA），andweightedtechnique fororderpreference bysimilaritytoidealsolution（TOPSIS）method.RESULTSTherewas no significant diferencebetweenthe resultsofQAMSmethodandexteralstandardmethodforthe12componentsinthe18batchesofsamples.However，notable content variations were observed among diferent batchesof samples.Theresultsof PCAand OPLS-DAshowedthat S1-S7，S8- S12，andS13-S18wereclustered intoonecategoryrespectively.Sevenkeycharacteristiccomponentsvariableimportancein projection values gt;1 ，euscaphic acid，ursolic acid，protocatechuic acid，apigenin， β -sitosterol， isoquercitrin，and oleanolic acid， respectively.Theanalysisresultsofthe weightedTOPSIS methodrevealedthattherelativeclosenessforevaluating thequalityof18 batches of samples ranged from 0.283 5 to 0.644 1，with the samples of E japonica from Fengjie，Chongqing，demonstrating the highestquality.CONCLUSIONS Theestablished methodisaccurateandfeasible，whichcanbeused forthequalityevaluationof E. japonica combined with chemometricsand weighted TOPSIS model.

KEYWORDS Euscaphis japonica；QAMS；chemometrics; weighted TOPSISmethod;quality evaluation

野鴉椿為省沽油科植物野鴉椿Euscaphisjaponica（Thunb.exRoem.amp;Schult.）Kanitz的干燥成熟果實(shí)，除西北各省外，全國(guó)均產(chǎn)]。野鴉椿主要含有酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)等成分，具有理氣止痛、消腫散結(jié)、祛風(fēng)止癢等作用，臨床可用于治療頭痛、眩暈、胃痛、脫肛、子宮下垂等[2]。野鴉椿收錄于地方標(biāo)準(zhǔn)[3-41，但這些標(biāo)準(zhǔn)均未涉及含量測(cè)定項(xiàng)。目前，雖然已有關(guān)于野鴉椿指紋圖譜或少數(shù)幾個(gè)成分定量分析的報(bào)道5-，但均不能表征其內(nèi)在的整體質(zhì)量。沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸等酚酸類(lèi)，異槲皮昔、紫云英苷、槲皮素、芹菜素等黃酮類(lèi)，野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸等三萜類(lèi)及豆甾醇 B -谷甾醇等甾醇類(lèi)為野鴉椿發(fā)揮臨床療效的主要活性成分，故本研究選取上述成分為含量測(cè)定指標(biāo)。

一測(cè)多評(píng)（quantitative analysis of multi-componentsbysingle-marker，QAMS）法能實(shí)現(xiàn)多指標(biāo)成分同時(shí)檢測(cè)，縮短檢測(cè)周期，降低成本。本研究以重慶、云南、四川等產(chǎn)地的18批野鴉椿藥材為樣品，采用QAMS法檢測(cè)野鴉椿中沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、芹菜素、野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸、豆甾醇和 β -谷甾醇的含量，同時(shí)測(cè)定水溶性浸出物、醇溶性浸出物、總灰分、酸不溶性灰分的含量；基于上述16個(gè)指標(biāo)含量，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)和加權(quán)逼近理想解排序（technique for order preference bysimilarity to ideal solu-tion，TOPSIS）法構(gòu)建不同產(chǎn)地野鴉椿質(zhì)量差異評(píng)估模型，旨在為野鴉椿質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

1材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Waters2690/5-2998型高效液相色譜（HPLC）儀（美國(guó)Waters公司）、Agilent1200型HPLC儀（美國(guó)Agilent公司）KQ-300DV型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、MS205DU型電子分析天平（瑞士MettlerToledo公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

熊果酸、槲皮素、芹菜素、原兒茶酸、沒(méi)食子酸、齊墩果酸、異槲皮苷 ，β -谷甾醇和鞣花酸對(duì)照品（批號(hào)分別為110742-202424、100081-202411、111901-202205、110809-202207、110831-202408、110709-202109、111809-202205、110851-201909、111959-201903，純度分別為 99.7%.98.7% 、98.496.97.5%.96.5%.95.8%.96.3%.92.7%.88.8% ）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；紫云英苷、豆甾醇和野鴉椿酸對(duì)照品（批號(hào)分別為PRF9072622、PRF10032922、PRF22061404，純度均大于 95.0% ）均購(gòu)自成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司；乙腈（色譜純）和磷酸均購(gòu)自德國(guó)默克公司。18批野鴉椿藥材（編號(hào) s1～S18 均經(jīng)牡丹江醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院鄒桂華副教授根據(jù)重慶市中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒定，為省沽油科植物野鴉椿E.japonica（Thunb.exRoem.amp;Schult.Kanitz的干燥成熟果實(shí)。藥材的采集信息見(jiàn)表1。

表118批野鴉椿藥材的采集信息

2方法與結(jié)果

2.1 野鴉椿中12個(gè)成分的含量測(cè)定

2.1.1 供試品溶液的制備

取野鴉椿藥材粉末約 0.5g ，精密稱(chēng)定，置于具塞錐形瓶中，精密加入 70% 甲醇 25mL ，稱(chēng)重，超聲 45min ，冷卻，用 70% 甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，即得。

2.1.2 混合對(duì)照品溶液的制備

取沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、芹菜素、野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸、豆甾醇和 β -谷留醇對(duì)照品各適量，精密稱(chēng)定，用 70% 甲醇稀釋后混勻，制成上述各成分質(zhì)量濃度分別為0.116、 0.830、0.046、0.072mg/mL 的單一對(duì)照品貯備液；分別精密吸取上述各單一對(duì)照品貯備液 1mL ，置于 20mL 容量瓶中，用 70% 甲醇定容，搖勻，即得各成分質(zhì)量濃度分別為 5.80，29.50，15.40，20.80，9.20，23.50，10.60，31.80， 25.90，41.50，2.30，3.60，μg/mL 的混合對(duì)照品溶液。

2.1.3 色譜條件

以Hypersil Gold C₁₈（250mm×4.6mm，5μm） 為色譜柱；以 0.1% 磷酸（A）-乙腈（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（ 0～9min 21.0%B 9～35min ， 21.0%B62.0%B 35～ 58min，62.0%-…86.0%8;58～65min，86.0%B21.0%B） ：檢測(cè)波長(zhǎng)為 254nm （沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異皮苷、紫云英苷、槲皮素和芹菜素）和 210nm （野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸、豆甾醇和 β -谷甾醇）；柱溫為 30^°C 流速為 1.0mL/min ；進(jìn)樣量為 10μL 。該色譜條件下，混合對(duì)照品溶液和供試品溶液（編號(hào)S1）的色譜圖見(jiàn)圖1。

2.1.4線性關(guān)系考察

取“2.1.2”項(xiàng)下各單一對(duì)照品貯備液適量，用 70% 甲醇逐級(jí)稀釋?zhuān)频?個(gè)不同質(zhì)量濃度的系列對(duì)照品工作溶液。按“2.1.3\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （x） 、峰面積為縱坐標(biāo) （y） 進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.1.5精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗(yàn)

取“2.1.1\"項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1），按“2.1.3\"項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積，考察精密度；取\"2.1.1\"項(xiàng)下供試品溶液（編號(hào)S1），于室溫下放置0、4、8、12、16、20、24h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，考察穩(wěn)定性；另取同一批野鴉椿樣品（編號(hào)S1）適量，按“2.1.1\"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法（external standardmethod，ESM）[o]計(jì)算含量，考察重復(fù)性。結(jié)果顯示，沒(méi)食子酸等12個(gè)成分在精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)中峰面積或含量的RSD均小于 2.0%（n=6 或 n=7 ）。

圖1野鴉椿供試品溶液和混合對(duì)照品溶液的HPLC圖

表2沒(méi)食子酸等12個(gè)成分的回歸方程與線性范圍

1：沒(méi)食子酸；2：原兒茶酸；3：鞣花酸；4：異槲皮苷；5：紫云英苷；6：槲皮素；7：芹菜素；8：野鴉椿酸；9：齊墩果酸；10：熊果酸；11：豆甾醇；12：β-谷甾醇。

2.1.6 加樣回收率試驗(yàn)

取已知成分含量的野鴉椿樣品（編號(hào)S1）粉末，共9份，每份約 0.25g ，精密稱(chēng)定，按已知成分含量的 80% 、100%.120% 加入混合對(duì)照品溶液，再按\"2.1.1\"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每個(gè)比例制備3份，按\"2.1.3\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、芹菜素、野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸、豆甾醇和β -谷甾醇的平均加樣回收率分別為 97.59%.99.65% 199.12% 、 100.03% 、 97.75% 、 99.70% 1 97.89% 、 100.13% 、98.84% / 100.02% 、 97.33% 、 96.98% ，RSD均小于 2.0% （ n=3 ）。

2.1.7 相對(duì)校正因子的計(jì)算

取\"2.1.4\"項(xiàng)下6個(gè)不同質(zhì)量濃度的系列對(duì)照品工作溶液，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以槲皮素為內(nèi)參物，計(jì)算沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、芹菜素的相對(duì)校正因子 （f） ；以熊果酸為內(nèi)參物，計(jì)算野鴉椿酸、齊墩果酸、豆甾醇 ??β 谷甾醇的f。f=PixA ，式中 ρ_s 和 ρ_i 為內(nèi)參物和其他成分的質(zhì)量濃度， A_s 和 A_i 為內(nèi)參物和其他成分的峰面積[]。結(jié)果顯示，沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、芹菜素、野鴉椿酸、齊墩果酸、豆甾醇 ??β -谷甾醇的 f 分別為 1.5037，1.0405，1.2023，1.0948，1.3689，1.2435， 0.8527、0.8402、1.4344、1.3387，RSD均小于 2.0% （n=6 。

2.1.8不同儀器和色譜柱對(duì) f 的影響

精密量取“2.1.2\"項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.1.3\"項(xiàng)下色譜條件，以不同色譜柱（Hypersil Gold C₁₈ Luna C₁₈ 、ZORBAX RX-C₁₈ ）在不同HPLC儀（Waters2690/5-2998型和Agilent1200型）中進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，按\"2.1.7\"項(xiàng)下方法計(jì)算 f 。結(jié)果顯示，沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、芹菜素、野鴉椿酸、齊墩果酸、豆甾醇 _，β -谷甾醇的平均 f 分別為 1.5053.1.0400 、1.2019，1.0954，1.3610，1.2421，0.8567，0.8419，1.4378， 1.3368，RSD均小于 2.0%（n=6） 。

2.1.9 不同儀器和色譜柱對(duì)各成分相對(duì)保留時(shí)間的影響

記錄“2.1.8”項(xiàng)下沒(méi)食子酸等12個(gè)成分色譜峰的保留時(shí)間，以槲皮素為內(nèi)參物，計(jì)算沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮昔、紫云英昔、芹菜素的相對(duì)保留時(shí)間；以熊果酸為內(nèi)參物，計(jì)算野鴉椿酸、齊墩果酸、豆甾醇和β -谷甾醇的相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果顯示，沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、芹菜素、野鴉椿酸、齊墩果酸、豆甾醇 ，β. -谷甾醇的平均相對(duì)保留時(shí)間分別為 0.450 3、0.541 3、0.628 3、0.736 6、0.854 6、1.040 9. 0.7933、0.8755、1.0737、1.1322，RSD均小于 2.0% 0 ）。

2.1.10 樣品含量測(cè)定

取18批野鴉椿樣品，按“2.1.1\"項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按\"2.1.3\"項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，分別按ESM[2]和QAMS法計(jì)算各成分的含量，每批樣品測(cè)定3次。運(yùn)用SPSS26.0軟件，采用 t 檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05 。結(jié)果（表3）顯示，以槲皮素和熊果酸為內(nèi)參物時(shí)，18批野鴉椿樣品中10個(gè)成分采用QAMS法與ESM測(cè)定的結(jié)果差異不顯著 Pgt;0.05 ），但不同批次樣品的含量差異較大，以豆甾醇和野鴉椿酸含量差異最顯著，其中重慶奉節(jié)縣（S16）產(chǎn)野鴉椿中槲皮素、原兒茶酸、紫云英昔、野鴉椿酸、齊墩果酸的含量均最高，但沒(méi)食子酸和異槲皮苷含量最低;江西崇義縣（S12）產(chǎn)野鴉椿中槲皮素、熊果酸、紫云英苷、齊墩果酸和 β. 谷甾醇含量均最低；江西大余縣產(chǎn)（S11）野鴉椿中沒(méi)食子酸和異槲皮苷含量均最高，但原兒茶酸、野鴉椿酸和豆甾醇含量均最低，這可能與野鴉椿采集地的氣候環(huán)境、生長(zhǎng)年限、采摘時(shí)間相關(guān)。

2.2醇溶性浸出物、水溶性浸出物、總灰分和酸不溶性 灰分檢測(cè)

按照2020年版《中國(guó)藥典》（四部）通則[2方法，分別檢測(cè)醇溶性浸出物、水溶性浸出物、總灰分和酸不溶性灰分的含量。結(jié)果顯示，18批野鴉椿樣品中醇溶性浸出物、水溶性浸出物、總灰分和酸不溶性灰分含量分別為13.2%～17.8%.19.3%～25.9%.2.6%～6.3%.0.5%～1.3% 符合《中國(guó)藥典》相關(guān)規(guī)定。

2.3 主成分分析

以18批野鴉椿樣品中16個(gè)指標(biāo)含量為變量，采用SPSS26.0軟件進(jìn)行主成分分析。結(jié)果顯示，有2個(gè)主成分的特征值 gt;1 ，累計(jì)方差貢獻(xiàn)率為 86.812% 。其中主成分1在沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸、豆甾醇、醇溶性浸出物、水溶性浸出物、總灰分和酸不溶性灰分上有較高的載荷值，特征值為12.061；主成分2在芹菜素和β -谷甾醇上有較高的載荷值，特征值為1.829。18批野鴉椿樣品的主成分分析得分圖（圖2）顯示，編號(hào) s1～ S7、S8～S12、S13～S18樣品分別聚為一類(lèi)，組內(nèi)樣品散點(diǎn)相對(duì)集中。

2.4正交偏最小二乘法-判別分析

進(jìn)一步以16個(gè)指標(biāo)含量為變量，采用SIMCA14.1軟件進(jìn)行正交偏最小二乘法-判別分析（orthogonal par-tial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）。結(jié)果顯示，模型參數(shù) R²X，R²Y，Q² 依次為 0.971，0.912 和0.840，均大于0.5，提示該模型可用于不同產(chǎn)地野鴉椿的有監(jiān)督判別分析。OPLS-DA模型得分圖（見(jiàn)圖3）顯示，18批野鴉椿樣品分類(lèi)與主成分分析結(jié)果一致，且更明顯。以變量重要性投影（variable importance in projec-tion，VIP）值 gt;1 為篩選標(biāo)準(zhǔn)[13]，共篩選出7個(gè)關(guān)鍵特征性成分，分別為野鴉椿酸、熊果酸、原兒茶酸、芹菜素、β -谷甾醇、異槲皮昔和齊墩果酸。結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖218批野鴉椿的主成分分析得分圖

圖3 OPLS-DA模型得分圖

2.5 加權(quán)TOPSIS模型評(píng)價(jià)

采用加權(quán)TOPSIS法對(duì)野鴉椿中16個(gè)指標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理[4，除總灰分和酸不溶性灰分為負(fù)向指標(biāo)外，其余14個(gè)均為正向指標(biāo)；再以各指標(biāo)的VIP值為權(quán)重構(gòu)建加權(quán)決策矩陣，確定各指標(biāo)的最優(yōu)方案和最劣方案，最后計(jì)算最優(yōu)向量歐氏距離 （D_b⁺） 、最差向量歐氏距離（D_b^-） 、相對(duì)貼近度 （J_b） 。結(jié)果見(jiàn)表4。

表318批野鴉椿中沒(méi)食子酸等12個(gè)成分的含量測(cè)定結(jié)果 （n=3，mg/g）

1：沒(méi)食子酸；2：原兒茶酸；3：鞣花酸；4：異槲皮苷；5：紫云英苷；6：槲皮素；7：芹菜素；8：野鴉椿酸；9：齊墩果酸；10：熊果酸；11：豆甾醇；12：β-谷甾醇；13：水溶性浸出物；14：醇溶性浸出物；15：總灰分；16：酸不溶性灰分。

圖418批野鴉椿的OPLS-DAVIP圖

表418批野鴉椿加權(quán)TOPSIS法分析結(jié)果

3 討論

3.1檢測(cè)方法的優(yōu)化

本課題組前期在制備供試品溶液時(shí)，以沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素、芹菜素、野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸、豆甾醇和 β -谷甾醇的綜合提取率為指標(biāo)，考察了 50% 甲醇、 70% 甲醇、甲醇超聲提取 30，45，60min 時(shí)的提取效果。結(jié)果顯示，以 70% 甲醇超聲提取 45min 時(shí)，上述12個(gè)成分的色譜響應(yīng)度較大，雜質(zhì)干擾最小。本研究采用紫外掃描對(duì)照品溶液時(shí)，發(fā)現(xiàn)沒(méi)食子酸、原兒茶酸、鞣花酸、異槲皮苷、紫云英苷、槲皮素和芹菜素在 254nm 波長(zhǎng)處均有較強(qiáng)吸收；野鴉椿酸、齊墩果酸、熊果酸、豆甾醇和 β -谷甾醇則存在末端吸收，由于中藥材所含化學(xué)成分復(fù)雜，單一波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，不能體現(xiàn)所有特征峰，故最終采用 254nm 和 210nm 波長(zhǎng)切換法同步檢測(cè)上述12個(gè)成分的含量。

3.2 內(nèi)參物的確定

為降低不同檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)QAMS法相對(duì)校正因子的影響，選取質(zhì)量較為穩(wěn)定、2種波長(zhǎng)下出峰時(shí)間相對(duì)居中的槲皮素和熊果酸為內(nèi)參物。

3.3 綜合評(píng)價(jià)結(jié)果分析

化學(xué)模式識(shí)別可快速實(shí)現(xiàn)對(duì)數(shù)據(jù)的可視化識(shí)別，基于各指標(biāo)含量差異較大，利用化學(xué)計(jì)量學(xué)對(duì)16個(gè)指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，18批野鴉椿聚為3類(lèi)；野鴉椿酸、熊果酸、原兒茶酸、芹菜素 B -谷甾醇、異槲皮苷和齊墩果酸的VIP值 gt;1 ，是導(dǎo)致不同產(chǎn)地野鴉椿質(zhì)量差異的主要標(biāo)志物，建議將這7個(gè)成分作為野鴉椿的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)；加權(quán)TOPSIS法結(jié)果顯示，18批野鴉椿的 J_b 值為0.283 5～0.644 1 ，其中S16樣品質(zhì)量最優(yōu)。據(jù)《福建植物志》記載，野鴉椿有落葉類(lèi)和常綠類(lèi)，黃果野鴉椿是常綠類(lèi)圓齒野鴉椿的變種，建寧野鴉椿是落葉類(lèi)野鴉椿的變種，野鴉椿的藥用部位為帶花或果實(shí)的枝葉以及干燥成熟的果實(shí)。然而本研究只對(duì)干燥成熟的果實(shí)進(jìn)行了考察，存在一定局限。后續(xù)將擴(kuò)大樣品采集地，同時(shí)對(duì)比不同藥用部位中上述7個(gè)成分的含量差異。

綜上所述，所建含量測(cè)定方法準(zhǔn)確可行，結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)及加權(quán)TOPSIS法可用于野鴉椿的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

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