Abstract：To investigatethegeneexpressionresponse inthecuticleofEriocheirsinensis duringthepost-moltstage underacutehypoxia stress，thisstudyutilizedIlluminasecond-generationsequencing technologytodetectthegneexpression profilesbetweenthecontrolandtheacutehypoxiastresstreatment，namely（1.O±O.1）mg/Lfor1h.Theresultsshowedthat comparedwiththecontrol，atotalof691diferentialexpressedgeneswereidentifiedintheacutehypoxiastresstreatment. These diferentiallyexpressd genes were mainlyenriched in physiological activities such as cuticle structural components，

收稿日期：2024-08-30

基金項目：省種業(yè)振興“揭榜掛帥\"項目［JBGS（2021）031、JBGS（2021）125]；“十四五”國家重點研發(fā)計劃項目（2022YFD2400700）；省碳達峰碳中和科技創(chuàng)新專項資金項目（SBE2022350035）；海洋大學研究生科研與實踐創(chuàng)新計劃項目（KYCX2023-103）

作者簡介：張婷（1999-），女，山西大同人，碩士研究生，主要從事甲殼動物養(yǎng)殖研究。（E-mail） bravetingO4@163.com

chitin binding，and metabolic pathways such as nitrogen metabolism，glyceride metabolism，and glycolysis pathway. Ninesignificantly differentiallyexpressed geneswere screenedand verifiedbyreal-timefluorescencequantitative PCR.The results of this study preliminarily clarify the molecular response mechanism of cuticle in E .sinensis at the post-molt stage to acute hypoxia stress，laying the foundationfor further investigation into the effects of hypoxia stress onthemoltingandgrowthof E .sinensis.

Key words：Eriocheir sinensis；acute hypoxia stress；post-molt stage；cuticle genes；transcriptome analysis

中華絨蟹（Eriocheirsinensis）又稱河蟹，隸屬于節(jié)肢動物門、甲殼綱、十足目，廣泛分布于中國東南部沿海的咸淡水與淡水水域，是中國重要的經(jīng)濟養(yǎng)殖蟹類[1]。2023年全國中華絨螯蟹養(yǎng)殖面積約5.33×10⁵hm² ，產(chǎn)量達 8.886×10⁵t^[2] 。蛻殼貫穿中華絨螯蟹生活史，與其生長、發(fā)育密切相關(guān)[3]。蛻殼周期包括蛻殼前期、蛻殼期、蛻殼后期（包括I、Ⅱ兩個階段）和蛻殼間期，其中蛻殼后期第1階段中華絨螯蟹的新表皮柔軟，吸水后能夠迅速延展擴張，從而實現(xiàn)跨越式增長，但與此同時，此期中華絨螯蟹易受到低氧等不良環(huán)境的脅迫，導致其蛻殼生長率下降，蛻殼死亡率升高，因此蛻殼后期第I階段是決定中華絨螯蟹“生死存亡”的關(guān)鍵時期。

溶解氧是甲殼類動物蛻殼生長的關(guān)鍵限制因子[4]。低氧脅迫會激活非特異性免疫，引起氧化應激損傷，改變能量代謝分配，抑制蛻殼生長，甚至導致死亡。低氧脅迫可導致凡納濱對蝦（Penae-us vannamei）[5]、斑節(jié)對蝦（Penaeus monodon）、小長臂蝦（Palaemonetesvulgaris）[6]生長速率顯著降低，蛻殼次數(shù)減少，造成太平洋藍蟹（Callinectessapidus）[7]、佛羅里達石蟹（Menippe mercenaria）[8]和中華絨螯蟹等甲殼類動物死亡率升高。近年來，隨著高通量測序技術(shù)的迅速發(fā)展，多組學分析已被廣泛應用于甲殼類動物應對低氧脅迫的分子生物學機制研究。曹梅等9報道了低氧脅迫誘導脊尾白蝦產(chǎn)生低氧誘導因子調(diào)控下游基因表達，促進厭氧代謝，緩解蝦體對缺氧的不適，而低氧誘導因子可通過抑制線粒體生物合成和活化線粒體自噬系統(tǒng)來降低線粒體耗氧;Jiang等[o]發(fā)現(xiàn)低氧脅迫損害中華絨螯蟹腸組織結(jié)構(gòu)，減少了腸道上皮杯狀細胞的數(shù)量，降低了腸道微生物區(qū)系的多樣性和相對豐度。此外，低氧脅迫誘導中華絨螯蟹胸神經(jīng)節(jié)神經(jīng)組織中游離谷氨酸和 γ -氨基丁酸（GABA）含量升高[\"]，破壞血淋巴細胞的酚氧化酶免疫系統(tǒng)，引起血淋巴細胞壞死，加速病原菌的感染，導致中華絨螯蟹死亡速度加快[12]。然而，關(guān)于急性低氧對中華絨螯蟹蛻殼脅迫，尤其是蛻殼后期表皮組織的分子響應機制的研究還很少。

本試驗基于Ilumina第二代測序技術(shù)，對處于蛻殼后期的中華絨螯蟹低氧脅迫下的表皮組織轉(zhuǎn)錄組進行測序，篩選低氧脅迫下中華絨螯蟹蛻殼后期表皮組織的相關(guān)差異表達基因，鑒定抵抗低氧脅迫的相關(guān)候選基因，討論中華絨螯蟹蛻殼期間響應低氧脅迫的機制，為后續(xù)深入開展低氧脅迫對中華絨螯蟹蛻殼生長的影響奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗對象

中華絨螯蟹樣本采集于省淡水水產(chǎn)研究所揚中基地，450只中華絨螯蟹規(guī)格均為（ 30.5±2.5） g，分別置于12個容量為 200L 的水族箱中曝氣暫養(yǎng) 7d 。水溫維持在 26°C 左右，水中溶解氧含量為（6.8±0.1）mg/L，pH 為 7.5±0.4 ，采用自然光源。期間用標準顆粒飼料定時投喂，每天進行換水吸污。

1.2 低氧脅迫處理

根據(jù)中華絨螯蟹殼色與硬度形態(tài)學特征，結(jié)合甲殼類動物分期方法[13]，判別和收集處于蛻殼前期的中華絨螯蟹，在此基礎(chǔ)上通過換水誘導其蛻殼，選取10只處于蛻殼后期第I階段的中華絨螯蟹，將試驗樣品隨機分成2組：低氧處理（ n=5 覆蓋保鮮膜、通入氮氣使中華絨螯蟹處于水體溶解氧含量為（ ?1.0±0.1? ）mg/L的低氧環(huán)境 ¹h ；對照（ 通過電動增氧機增氧，保持水體溶解氧的含量為（6.8±0.1）mg/L_? 。處理期間使用HQ40D型便攜多參數(shù)水質(zhì)分析儀（美國哈希公司產(chǎn)品）檢測水體溶解氧含量，配備電動增氧機，從而有效保證水體中溶解氧含量，避免由于中華絨螯蟹本身的呼吸而造成的水體溶解氧不足。處理1h后隨機收集每組3只中華絨螯蟹頭胸甲表皮組織用于項目測定，液氮速凍 -80^°C 儲存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 總RNA的提取

應用Trizol法提取中華絨蟹表皮總RNA，凝膠電泳后用安捷倫2100生物分析儀（美國安捷倫科技公司產(chǎn)品）測量總RNA的純度、質(zhì)量濃度和完整性，以總量 、質(zhì)量濃度 ?35ng/μL 、 為標準鑒定總RNA質(zhì)量，合格后用于建庫。

1.4轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)預處理與拼接

從中華絨螯蟹總RNA中分離并通過OligodT富集獲得mRNA，用于分析轉(zhuǎn)錄組信息。然后通過

Fragmentationbuffer和磁珠得到 300bp 左右的小片段。接著，使用逆轉(zhuǎn)錄酶及六堿基隨機引物進行處理，得到穩(wěn)定雙鏈結(jié)構(gòu)后用EndRepairMix補成平末端，堿基A被添加到3'末端成為接頭。最后IIlu-mina平臺對中華絨螯蟹低氧組織cDNA文庫完成上機測序，使用Trinity（http：//trinityrnaseq.source-forge.net）對所有樣本清潔數(shù)據(jù)（Cleandata）進行從頭組裝，并對組裝結(jié)果進行優(yōu)化評估。

1.5轉(zhuǎn)錄組注釋

通過BLAST軟件對轉(zhuǎn)錄本在NCBI中的NR數(shù)據(jù)庫、Swissprot數(shù)據(jù)庫、GO數(shù)據(jù)庫、 EggNOG 數(shù)據(jù)庫和KEGG數(shù)據(jù)庫中進行全面注釋。測序獲得的Unigenes的開放閱讀框（ORF）采用Trinity方法進行預測。

1.6轉(zhuǎn)錄組中差異表達基因的篩選

為了篩選低氧脅迫下中華絨螯蟹蛻殼后期表皮中差異表達的基因，將兩組間發(fā)生差異表達的基因應用DESeq2軟件（閾值為： |log₂FC∣?1 Padjustlt;0.05）進行篩選（ FC ：差異倍數(shù)，Padjust：校正后的 P 值）。

1.7 qRT-PCR驗證

從表1可知，對富集通路中9個顯著差異表達的基因（DEG）進行定量分析以進一步驗證測序的準確性，其中包括前3通路中6個上調(diào)表達的基因：鈣相關(guān)表皮蛋白（CAP47、CAP8、CAP19、CAP21）基因和彈性蛋白多肽（RLP1、RLP2）基因；3個下調(diào)表達的基因：碳酸酐酶 基因和淀粉酶（amyA）基因。以 β -Actin為內(nèi)參基因所篩選的引物序列用于鑒定相關(guān)基因的相對表達量，每組進行3個重復（ Plt;0.05 ）。

2 結(jié)果與分析

2.1 轉(zhuǎn)錄組的測序和組裝

使用Illumina平臺對對照、低氧脅迫處理中華絨螯蟹蛻殼后期的表皮組織進行高通量測序。篩選獲得96.78GbClean data，Q30 堿基百分比在91.92% 以上， G+C 含量為 50.74%～55.80% 。測序組裝后得到平均長度為！ 1828bp 的中華絨螯蟹相關(guān)基因95015個?；诮y(tǒng)計數(shù)據(jù)，對基因進行EggNOG功能分類統(tǒng)計，結(jié)果如圖1所示。對這些經(jīng)過拼接的基因序列進行GO、KEGG、EggNOG、NR、Swiss-Prot以及Pfam注釋，對應得到15387個（ 25.06% ）、

11883個（ 19.35% ）、16833個 （27.41% ）、19 973（ 32.53% ）、14903個（ 24.27% ）和16361個（ 26.64% ）注釋結(jié)果（圖2A）。根據(jù)NR數(shù)據(jù)庫的匹配結(jié)果可知，有 58.37% 的基因表現(xiàn)出與凡納濱對蝦基因類似，而中華絨螯蟹的基因表現(xiàn)出了 1.84% 的類似基因（圖2B）。

在本試驗中，按照G0分類，共有57338個Uni-genes歸類到3個功能類別，共計49個功能集合（圖3A）。其中，細胞成分類別有15個、生物過程類別有21個、分子功能類別有13個。此外，共有18994個Unigenes與KEGG注釋相匹配，并且富集到新陳代謝、組織系統(tǒng)、細胞過程、人類疾病、遺傳信息處理和環(huán)境信息處理這6大類生物學功能中，其中富集基因最多的通路分別是碳水化合物代謝（580個）、內(nèi)分泌系統(tǒng)（856個）運輸和代謝（938個）、癌癥概述（1008個）、翻譯（1210個）以及信號轉(zhuǎn)導（1480個）（圖3B）。

A：RNA 加工和修飾;B：染色體結(jié)構(gòu)和動力;C：能量產(chǎn)生與轉(zhuǎn)換;D：細胞周期控制、細胞分裂和染色體分裂;E：氨基酸轉(zhuǎn)運和代謝;F：核酸轉(zhuǎn)運和代謝;G：碳水化合物轉(zhuǎn)運和代謝;H：輔酶轉(zhuǎn)運和代謝;I：脂質(zhì)轉(zhuǎn)運和代謝;J：翻譯，核糖體結(jié)構(gòu)與合成;K：轉(zhuǎn)錄;L：復制、合成、修復； M 細胞壁與細胞膜合成;N：細胞運動;O：翻譯后修飾，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運;P：無機離子轉(zhuǎn)運和代謝；Q：次要代謝物合成、代謝以及轉(zhuǎn)運;T：信號轉(zhuǎn)導；U：胞內(nèi)轉(zhuǎn)運，分泌及小泡運輸;V：防御機制；Y：核酸結(jié)構(gòu);Z：細胞骨架。

A：注釋到各數(shù)據(jù)庫的功能基因數(shù)目柱狀圖；B：與NR數(shù)據(jù)庫的物種類別的基因注釋匹配餅狀圖。數(shù)字與比例分別代表在NR數(shù)據(jù)庫中Uni-genes與不同物種之間相似基因的數(shù)量與占比。

2.2 差異基因的富集分析

通過以2.0倍（ Plt;0.05， 為閥值篩選低氧脅迫處理中華絨螯蟹蛻殼后期表皮中差異表達的基因，結(jié)果顯示，有691個差異表達基因，其中381個基因表達上調(diào)，310個基因表達下調(diào)（圖4）。在G0富集分析中可以發(fā)現(xiàn)，差異表達的基因主要集中于角質(zhì)層結(jié)構(gòu)成分、細胞外區(qū)域、幾丁質(zhì)結(jié)合等生理活動（圖5A）。在KEGG數(shù)據(jù)庫中富集主要體現(xiàn)在氮代謝、甘油酯代謝等代謝相關(guān)通路，以及胰腺分泌等組織系統(tǒng)通路（圖5B）。

紅藍點分別代表上調(diào)及下調(diào)表達基因，灰色點代表表達沒有變化的基因；橫坐標代表對照差異表達基因的可視化程度，縱坐標代表低氧處理差異表達基因的可視化程度（以 表示）。TPM：每百萬轉(zhuǎn)錄本。

2.3qRT-PCR驗證分析

經(jīng)過qRT-PCR分析，轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中的9個基因表達存在顯著差異，并且這些基因的表達水平（包括上調(diào)和下調(diào)的趨勢）與RNA-Seq分析結(jié)果相吻合，如圖6所示。

3討論

甲殼類動物具有堅硬的外骨骼，能夠防御病原物侵襲和不利環(huán)境的危害，為機體提供保護和支撐，但硬化的外骨骼也限制了其生長，所以甲殼類動物在生長發(fā)育期間普遍需要進行周期性蛻殼并合成新表皮。蛻殼后期的新表皮吸水后能夠迅速延展擴張，從而實現(xiàn)跨越式增長，但與此同時，失去外骨骼防護的機體也最容易受到環(huán)境脅迫。在中華絨螯蟹養(yǎng)殖過程中，水體溶解氧晝夜波動大，空間分布不均，直接影響著中華絨蟹的規(guī)格與產(chǎn)量，但目前缺乏蛻殼后期中華絨螯蟹表皮組織應對低氧脅迫分子機制的研究。本研究通過轉(zhuǎn)錄組測序分析中華絨蟹蛻殼后期表皮基因應對低氧脅迫的表達響應，共篩選出691個差異表達基因，涉及角質(zhì)層結(jié)構(gòu)成分、幾丁質(zhì)結(jié)合、氮代謝、甘油酯代謝、糖酵解途徑等。

蛻殼伴隨著新表皮的合成與硬化。表皮蛋白作為甲殼動物表皮中重要的結(jié)構(gòu)性蛋白質(zhì)，與幾丁質(zhì)螺旋堆疊相互作用，形成穩(wěn)定表皮的復雜結(jié)構(gòu)[14]在本研究中，低氧脅迫下中華絨螯蟹表皮蛋白彈性蛋白多肽（RLP）和鈣化相關(guān)肽（CAP）基因的表達顯著上調(diào)，這與Graham等[15]和Tang等[16]在虎斑猛水蚤（Tigriopuscalifornicus）及松墨天牛（Monocha-musalternatus）上的研究結(jié)果相一致。彈性蛋白多肽通過氨基酸雙酪氨酸和三酪氨酸的間隔共價交聯(lián)在一起，與幾丁質(zhì)形成具有高度靈活性和流動性的復合物。在水生甲殼類動物中，RLP主要分布于表皮軟組織和關(guān)節(jié)部位，通過與幾丁質(zhì)結(jié)合影響表皮形態(tài)，進而影響滲透壓及溶解氧[17]；在陸生昆蟲中，RLP主要分布于氣管頂端細胞外基質(zhì)層，低氧脅迫引起彈性蛋白多肽表達顯著上調(diào)，氣管導管頂端細胞外基質(zhì)增厚，維持氣管形態(tài)結(jié)構(gòu)與氧氣供應，敲除彈性蛋白肽基因，降低彈性蛋白多肽含量導致頂端細胞外基質(zhì)變薄，氣管彈性下降，造成供氧不足。CAP通過Ramp;R結(jié)構(gòu)域與幾丁質(zhì)相結(jié)合，多肽N端和C端區(qū)域延伸至纖維間隙，形成水填充的非共價鍵網(wǎng)絡(luò)，對保持表皮的柔韌性不可或缺[18]。高茜[9]研究發(fā)現(xiàn)，中華鋸齒米蝦CAP主要在蛻殼前期和蛻殼后期表達，敲除鈣相關(guān)表皮蛋白基因Nd-CAP-1后，會導致中華鋸齒米蝦蛻殼前期步足剛毛伸展不流暢，出現(xiàn)卷曲；敲除鈣相關(guān)表皮蛋白基因NdCAP-2后，蛻殼后期中華鋸齒米蝦步足表面凹凸不平，出現(xiàn)大面積的褶皺。本研究中急性低氧脅迫下中華絨螯蟹表皮蛋白RLP和CAP顯著上調(diào)，暗示低氧脅迫通過干預表皮蛋白RLP和CAP的合成進而影響外骨骼的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

碳酸酐酶（ （CA） 催化二氧化碳（ CO₂ ）水合為碳酸氫鹽（ HCO₃^- ）和質(zhì)子（ H⁺ ）的反應，在機體內(nèi)的生物礦化過程中起著關(guān)鍵作用。在缺氧環(huán)境下，細胞通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子HIF- 1α 增加碳酸酐酶產(chǎn)生，形成細胞微環(huán)境的酸性缺氧特征。Calhoun等[20]報道了蛻殼周期中藍蟹（Callinectessapidus）碳酸酐酶活性與表皮組織中的鈣、鎂含量呈顯著正相關(guān)，表明碳酸酐酶參與甲殼類動物外骨骼的礦化。Ostrowski等[21]進一步研究發(fā)現(xiàn)，注射外源蛻殼激素能提高碳酸酐酶基因的表達，進而影響青蟹外骨骼礦化速度。本研究中低氧脅迫下中華絨螯蟹表皮碳酸酐酶CA2和CA13表達顯著下調(diào)，可能會抑制外骨骼礦化，導致蛻殼周期時間延長，這與戴恬美[22的研究結(jié)果一致。

低氧脅迫不僅會影響甲殼類動物表皮角質(zhì)層形成與礦化，還會改變能量代謝途徑。在低氧脅迫下

A：差異表達基因的GO富集分析；B：差異表達基因的KEGG通路富集圖。

FC ：基因表達差異倍數(shù)。

甲殼類動物的消化分解類活性受到抑制，有氧糖代謝趨于減弱，糖酵解和無氧糖代謝的相關(guān)通路代謝增強。無氧代謝能迅速提供能量，減少氧氣消耗，是對低氧脅迫下能量代謝的適應。淀粉酶是水生動物生長發(fā)育中不可缺少的水解酶[23]。石華洪等[24]研究發(fā)現(xiàn)，淀粉酶等消化酶類活性隨著溶解氧濃度降低而降低；Patkaew等[25]研究發(fā)現(xiàn)，過飽和溶解氧會增強凡納濱對蝦 α -淀粉酶的活性。本研究中的淀粉酶（amyA）基因表達下調(diào)，說明中華絨螯蟹從有氧糖代謝轉(zhuǎn)向糖酵解厭氧途徑以產(chǎn)生能量來臨時補充蛻殼所需的能量，表明中華絨螯蟹在低氧應激反應中調(diào)整了能量代謝。

4結(jié)論

本研究報道了急性低氧脅迫下蛻殼后期中華絨螯蟹表皮基因表達譜，并對基因富集重點通路和差異表達基因的功能進行了分析，初步闡明在急性低氧脅迫下，中華絨螯蟹處于蛻殼后期的表皮應對低氧脅迫的分子水平響應機制。但由于缺乏長周期低氧脅迫與中華絨螯蟹蛻殼關(guān)系的認識，后續(xù)將進一步驗證長期低氧脅迫對中華絨螯蟹蛻殼的影響，為中華絨螯蟹大規(guī)格養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。

參考文獻：

[1]姜曉東，成永旭，潘建林，等.中國長江與荷蘭野生中華絨螯蟹 的頭胸甲形態(tài)特征比較[J].淡水漁業(yè)，2020，50（1）：38-43.

[2]農(nóng)業(yè)農(nóng)村部漁業(yè)漁政管理局，全國水產(chǎn)技術(shù)推廣總站，中國水 產(chǎn)學會.2024中國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版 T，∠U∠4：24.

[3］李旭光，周剛，谷孝鴻.水生甲殼類蛻皮發(fā)生過程及其影響 因素的研究與進展[J].動物學雜志，2014，49（2）：294-302.

[4] ABDEL-TAWWAB M，MONIER M N，HOSEINIFAR S H，et al. Fish response to hypoxia stress：growth，physiological，and immunological biomarkers[J].Fish Physiologyand Biochemistry，2019，45 （3） ：997-1013.

[5]SEIDMAN ER，LAWRENCE AL. Growth，feed digestibility，and proximate body composition of juvenile Penaeus vannamei and Penaeus monodon grown at different dissolved oxygen levels[J]. Journal of the World Mariculture Society，1985，16（1/2/3/4）： 333-346.

[6]COIRO L L，POUCHER S L，MILLER D C. Hypoxic effects on growth of Palaemonetes vulgaris larvae and other species： using constant exposure data to estimate cyclic exposure response[J]. Journal of Experimental Marine Biologyand Ecology，2000，247 （2） ：243-255.

[7]TOMASETTI S J， MORRELL B K，MERLO L R，et al. Individual and combined effcts of low dissolved oxygen and low pH on survival of early stage larval blue crabs，Callnectes sapidus[J].PLoS One，2018，13（12）：e0208629.

[8]GRAVINESEP M，MUNLEY MK，KAHMANN G，et al. The effects of prolonged exposure to hypoxia and Florida red tide （Karenia brevis）on the survival and activity of stone crabs[J]. Harmful Algae，2020，98：101897.

[9］曹梅，王興強，秦傳新，等.脊尾白蝦對低氧響應的轉(zhuǎn)錄組學 分析[J].漁業(yè)科學進展，2021，42（2）：112-123.

[10]JIANG S，ZHANG WJ，QIAN XB，et al.Effects of hypoxia and reoxygenation on apoptosis，oxidative stress，immune response and gut microbiota of Chinese miten crab，Eriocheir sinensis[J].Aquatic Toxicology，2023，260：106556.

[11]ZHANG C，WANG XD，HE JQ，et al.Neural excitotoxicity and the toxic mechanism induced by acute hypoxia in Chinese miten crab（Eriocheir sinensis）[J]. Aquatic Toxicology，2022，245： 106131.

[12］候利波，陸銀月，任秋霖，等.低氧脅迫下中華絨螯蟹血淋巴細 胞的轉(zhuǎn)錄組學[J].水產(chǎn)學報，2023，47（4）：25-39.

[13］田志環(huán)，成永旭，吳旭干，等.中華絨螯蟹蛻殼過程中肌肉的 組織學、超微結(jié)構(gòu)及主要蛋白質(zhì)含量的變化[J].水生生物學 報，2017，41（5）：1036-1041.

[14］張建珍，朱坤炎.昆蟲表皮發(fā)育與害蟲防治[M].北京：科學出 版社，2024.

[15]GRAHAM A M， BARRETO F S.Loss of the HIF pathway in a widelydistributed intertidal crustacean，the copepod Tigriopus californicus[J].Proceedings of the National Academy of Sciencesof the United States of America，2019，116（26）：12913-12918.

[16]TANG X，ZHOUJ，KOSKI T M，et al. Hypoxia-induced tracheal elasticity in vector beetle facilitates the loading of pinewood nematode[J].ELife，2023，12：e84621.

[17]MICHELSJ，APPEL E，GORB SN.Functional diversity of resilin inArthropoda[J].BeilsteinJournal ofNanotechnology，2O16，7： 1241-1259.

[18]儲俊東，刁澎云，李旭光，等.中華絨螯蟹表皮蛋白基因EsCAP 的克隆與表達分析[J].農(nóng)業(yè)科學，2021，49（8）：74-80.

[19］高茜.中華鋸齒米蝦鈣相關(guān)表皮蛋白基因的功能研究［D]. 保定：河北大學，2023.

[20]CALHOUNS，ZOUEM.Epidermal carbonic anhydrase activity andexoskeletal metal content during the molting cycle of the blue crab，Callinectes sapidus[J]. Journal of Experimental Zoology， 2016，325（3） ：200-208.

[21]OSTROWSKI A，ZOUE M.Exogenous 20-hydroxyecdysone inducesepidermal carbonic anhydrasebut inhibits exoskeletal calcificationin the post-ecdysial blue crab，Callinectes sapidus[J].General and ComparativeEndocrinology，2018，268：57-63.

[22］戴恬美.溫度誘導煙粉虱DNA甲基化的特征和Dnmt1基因溫 度耐受性功能的鑒定[D].北京：中國農(nóng)業(yè)科學院，2015.

[23]GUPTAR，GIGRASP，MOHAPATRAH，etal.Microbial α -amylases：a biotechnological perspective[J].Process Biochemistry， 2003，38（11）：1599-1616.

［24］石華洪，苗亮，李明云，等.水體低氧對香魚幼魚生長和消化 酶活性的影響[J].生命科學研究，2019，23（6）：469-475.

[25]PATKAEW S，DIREKBUSARAKOMS，HIRONOI，et al.Effect ofsupersaturated dissolved oxygen on growth-，survival-，and immune-related gene expression ofPacific white shrimp（Litopenaeus vannamei）[J].VeterinaryWorld，2024，17（1）：50-58.

（責任編輯：黃克玲）