摘要：目的 探究Go-ichi-ni-san復合物亞基1（GINS1）在肝細胞癌（HCC）進展和化療耐藥中的作用及相關機制。方法 通過腫瘤數(shù)據(jù)庫GEPIA2網(wǎng)站檢索并分析GINS1在HCC患者和健康人群中的表達差異。收集2017年5月—2021年1月新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院及第一附屬醫(yī)院收治的40例HCC患者病理組織，通過免疫組化染色檢測GINS1在HCC組織和對應癌旁組織中的表達差異，分析GINS1表達水平與HCC臨床TNM分期之間的關系。Western Blot檢測GINS1在HCC細胞系Huh7、Hep3B、Li-7、MHCC97H 和人正常肝細胞系 QSG7701 中的表達差異。通過慢病毒轉染細胞的方法構建穩(wěn)定敲低GINS1的MHCC97H細胞株及其陰性對照細胞株。通過CCK-8實驗和克隆形成實驗檢測細胞增殖能力，劃痕實驗檢測細胞遷移能力，Transwell實驗檢測細胞侵襲能力，使用奧沙利鉑處理細胞以檢測細胞對化療藥物的敏感性。構建裸鼠負瘤模型，觀察GINS1敲低對HCC體內生長的影響。Western Blot檢測各組細胞Notch通路和JAK/STAT通路蛋白表達水平。加入Notch受體激動劑Jagged-1處理細胞，分析GINS1與Notch/JAK/STAT通路之間的關系。計量資料兩組間比較采用成組t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。結果 GINS1在HCC患者、HCC組織和HCC細胞系中均表達上調（P值均lt;0.05）。GINS1表達水平與HCC臨床TNM分期正相關（r=0.822，P=0.011）。與陰性對照組細胞相比，敲低GINS1的MHCC97H細胞增殖、遷移和侵襲活性均降低（P值均lt;0.01），對奧沙利鉑敏感性增強（Plt;0.01）。與對照組裸鼠相比，GINS1敲低導致裸鼠形成的腫瘤質量和體積均受到顯著抑制（P值均lt;0.001）。與陰性對照組細胞相比，在敲低GINS1的MHCC97H細胞內，Notch1、Notch3、p-JAK2和p-STAT3表達水平明顯降低（P值均lt;0.05），JAK2和STAT3總體表達水平無明顯差異（P值均gt;0.05）。Jagged-1處理后，敲低GINS1的MHCC97H細胞的增殖、遷移和侵襲活性均有所增加，而細胞對奧沙利鉑敏感性有所減弱，p-JAK2、p-STAT3水平升高（P值均lt;0.05）。結論 GINS1在HCC中表達上調，并且能夠通過Notch/JAK2/STAT3通路促進HCC進展和腫瘤細胞化療耐藥。

關鍵詞：GINS復合物；癌，肝細胞；抗藥性，腫瘤；信號傳導

基金項目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學基金（2022D01C245）；新疆維吾爾自治區(qū)產(chǎn)學合作協(xié)同育人項目（MRHT1000023042108）

Effect of Go-Ichi-Ni-San complex subunit 1 on disease progression and chemotherapy resistance in hepatocellular carcinoma

HUO Yishan 1 ，LI Dawei 2 ，DUAN Xiangbing 1 ，MA Yuyu 1 ，ZHANG Guojun 3 ，ZHANG Kainan 4 ，MA Xiumin 1

1. Department of Clinical Laboratory，Clinical Laboratory Center，Tumor Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi830000，China；2. Department of Clinical Laboratory，The Fifth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi830000，China；3. Experimental Diagnostic Center，Beijing Tiantan Hospital，Capital Medical University，Beijing 100070，China；4. Department of Clinical Laboratory，Xinjiang Uygur Autonomous Region People’s Hospital，Urumqi 830000，China

Corresponding author：MA Xiumin，maxiumin1210@sohu.com （ORCID：0000-0001-8011-7513）

Abstract：Objective To investigate the role and mechanism of Go-Ichi-Ni-San complex subunit 1 （GINS1） in the progression of hepatocellular carcinoma （HCC） and the development of chemotherapy resistance. Methods The tumor database GEPIA2 was used to analyze the differential expression of GINS1 between HCC patients and healthy individuals，and pathological tissue samples were collected from 40 HCC patients who were admitted to The Affiliated Tumor Hospital of Xinjiang Medical University and the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from May 2017 to January 2021. Immunohistochemical staining was used to measure the difference in the expression of GINS1 between HCC tissue and corresponding adjacent tissue，and the correlation between the expression level of GINS1 and the clinical TNM stage of HCC was analyzed. Western blot was also used to measure the difference in the expression of GINS1 between HCC Huh7/Hep3B/Li-7/MHCC97H cell lines and normal human QSG7701hepatocytes. The method of lentivirus transfection was used to establish the MHCC97H cell line with stable GINS1 knockdown and its negative control cell line. CCK-8 assay and colony formation assay were used to measure cell proliferative capacity；scratch assay was used to measure cell migration ability；Transwell assay was used to measure cell invasion ability；cells were treated with oxaliplatin to measure their sensitivity to chemotherapy drugs. Nude mice were used to establish a tumor-bearing model and observe the effect of GINS1 knockdown on the growth of HCC in vivo. Western Blot was used to measure the expression levels of the proteins associated with the Notch pathway and the JAK/STAT pathway. The cells were treated with the Notch receptor agonist Jagged-1 to analyze the association between GINS1 and the Notch/JAK/STAT pathway. The independent-samples t test was used for comparison of continuous data between two groups；a one-way analysis of variance was used for comparison between multiple groups，and the least significant difference t-test was used for further comparison between two groups. Results The expression of GINS1 was upregulated in HCC patients，HCC tissue，and HCC cell lines （all Plt;0.05），and the expression level of GINS1 was positively correlated with the clinical TNM stage of HCC （r=0.822，P=0.011）. Compared with the negative control cells，the GINS1-knockdown MHCC97H cells showed significant reductions in proliferation，migration，and invasion activities （all Plt;0.01） and a significantly enhanced sensitivity to oxaliplatin （Plt;0.01）. Compared with the nude mice in the control group，GINS1 knockdown caused significant inhibition of tumor weight and volume in vivo in nude mice （all Plt;0.001）. Compared with the negative control cells，the GINS1-knockdown MHCC97H cells showed significant reductions in the expression levels of Notch1，Notch3，p-JAK2，and p-STAT3 （all Plt;0.05），while there were no significant differences in the overall expression levels of JAK2 and STAT3 （Pgt;0.05）. After Jagged-1 treatment，the GINS1-knockdown MHCC97H cells showed significant increases in proliferation，migration，and invasion activities and a significant reduction in sensitivity to oxaliplatin，as well as significant increases in the levels of p-JAK2 and p-STAT3 （all Plt;0.05）. Conclusion GINS1 is upregulated in HCC and can promote HCC progression and chemotherapy resistance through the Notch/JAK2/STAT3 pathway.

Key words：Go-Ichi-Ni-San （GINS） Complex；Carcinoma，Hepatocellular；Drug Resistance，Neoplasm；Signal Transduction

Research funding：Natural Science Foundation of Xinjiang Uygur Autonomous Region （2022D01C245）；Xinjiang Uygur Autonomous Region Industy-University Cooperation and Collaborative Education Project （MRHT1000023042108）

肝細胞癌（HCC）是全球最常見的癌癥之一。與其他常見癌癥（如乳腺癌、肺癌和前列腺癌）的相比，HCC的死亡率每年持續(xù)增加2%～3%，這是因為HCC患者確診時往往處于晚期，而且晚期 HCC 尚無治愈方法［1］。HCC的早期診斷正成為一個巨大的挑戰(zhàn)。在過去的幾年里，HCC的早期診斷依賴于超聲監(jiān)測和甲胎蛋白血清學評估［2］。然而，這兩種方法的特異性和敏感性不足以準確地診斷出早發(fā)性HCC［3］。因此，找到HCC早期診斷特異性靶點至關重要。Go-ichi-ni-san復合物亞基1（GINS1）屬于異四聚體復合物GINS的一部分［4］。研究表明，酵母中的GINS復合物能夠與其他分子組裝成更大的復合物來參與調節(jié)細胞周期的每個階段和DNA復制過程［5］。GINS復合物與哺乳動物細胞中參與DNA復制的蛋白質結合，以協(xié)助DNA復制過程［6］。GINS1是GINS復合物中的關鍵組成部分，在整個細胞周期中維持細胞增殖活性［7-9］。先前的研究發(fā)現(xiàn)，在人類多種腫瘤中GINS1水平升高，例如膠質瘤、乳腺癌和膀胱癌［7，10-11］。然而，其在HCC發(fā)展中的作用尚不清楚。本研究通過構建穩(wěn)定敲低GINS1的 HCC細胞系，初步探究了 GINS1對 HCC進展的促進作用及相關分子機制。

1 材料和方法

1.1 細胞系、實驗動物和病理組織切片 人HCC細胞系 Huh7、Hep3B、Li-7、MHCC97H 購自武漢普諾賽生物公司，人正常肝細胞系 QSG7701 購自合肥萬物生物公司。所有細胞使用含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基，在含5% CO 2 的37 ℃孵箱內培養(yǎng)。12 只 4 周齡 BALB/C 雄性裸鼠購自北京斯貝福生物公司，飼養(yǎng)于醫(yī)院潔凈動物房內。40例HCC患者（T1～T4期各10例）病理組織切片及對應癌旁組織切片來自新疆醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院及第一附屬醫(yī)院，樣本收集前患者均未接受新輔助化療。

1.2 生物信息學分析 通過檢索GEPIA2（http：//gepia2.cancer-pku.cn/#index）數(shù)據(jù)庫，獲得GINS1在HCC患者和健康人群中的表達情況，下載差異表達結果圖。

1.3 免疫組化染色 本課題組委托上海奧特多生物科技公司制作了組織微陣列（tissue microarray，TMA），該陣列包含 40個 HCC組織樣本和 40個對應癌旁組織樣本，這些樣本收集于2017年5月—2021年1月。TMA切片用乙醇水化，然后用澄清劑二甲苯使其透明，再嵌入石蠟中。然后使用 H 2 O 2 抑制內源性過氧化物酶功能。按照制造商的指示孵育一抗和二抗。使用倒置顯微鏡觀察每張載玻片。免疫組化染色評估由兩名經(jīng)驗豐富的病理學家獨立進行。測量腫瘤組織中免疫染色的強度用于評估GINS1表達，陽性信號被描述為深棕色。

1.4 Western Blot檢測 對于細胞樣本，將細胞接種于6孔板內，長滿后用含蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液（上海碧云天公司）裂解細胞獲得總蛋白。蛋白在金屬浴中煮沸變性，然后通過SDS-PAGE凝膠電泳分離，再轉移到聚偏二氟乙烯膜（美國Millipore公司）上。使用5%脫脂牛奶封閉膜2 h，膜與一抗在4 ℃下孵育過夜。用PBS沖洗膜3次，膜與二抗在室溫下孵育1 h。最后，使用ECL化學發(fā)光液對蛋白條帶進行顯影。對于組織樣本，首先將組織切成小塊，按每30 mg組織需100 μL裂解液的比例，使用裂解液裂解組織，然后組織在冷凍研磨機上充分研磨。將組織勻漿靜置10 min，取上清用以后續(xù)試驗?？笹APDH、GINS1、Notch1、Notch3抗體購自美國Proteintech公司，抗Bax、Bad、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3抗體購自美國abcam公司，羊抗兔和羊抗鼠二抗購自上海碧云天公司。

1.5 實時熒光定量PCR（qRT-PCR） 使用Trizol試劑（美國Invitrogen公司）提取細胞RNA，使用SuperScript Ⅳ試劑盒（美國Thermo Fisher公司）將RNA逆轉錄合成cDNA，在CFX96 PCR 儀（美國 Bio-Rad 公司）上使用 ChamQ SYBR qPCR Master Mix試劑盒（南京Vazyme公司）對cDNA進行RT-qPCR分析。以GAPDH基因轉錄水平歸一化處理各基因轉錄水平。各基因引物序列見表1。

1.6 CCK-8增殖實驗 將細胞以 5 000個/孔的密度均勻接種在96孔板中。分別在第12、24、48和72 h向每孔加入10 μL CCK-8試劑（上海碧云天公司），繼續(xù)避光孵育2 h，并使用多功能微孔板讀數(shù)儀（新加坡PerkinElmer公司）測量450 nm處的吸光度。

1.7 克隆形成實驗 將細胞按500個/孔的密度接種于6孔板內，完全培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)。待肉眼可見有明顯的細胞集落形成時，撤去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次，用4%多聚甲醛固定細胞，0.1%結晶紫染色細胞，PBS洗滌3次后，在顯微鏡下觀察并計數(shù)細胞集落數(shù)量。

1.8 劃痕實驗 將細胞接種于6孔板內，待細胞匯合度達60%時，撤去培養(yǎng)基，用10 μL移液槍頭對細胞進行十字劃痕，制造直線“缺口”。以無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，分別在劃痕后0 h和48 h顯微鏡下觀察“缺口”面積變化。

1.9 Transwell侵襲實驗 對于Transwell侵襲實驗，在冰上操作鋪好 Matrigel 膠。在 24 孔 Transwell 板（美國Corning公司）下室中加入含有 20%胎牛血清的完全培養(yǎng)基，上室中加入含有 1 000個細胞的無血清培養(yǎng)基。孵育48 h后，用4%多聚甲醛固定細胞，0.1%結晶紫染色，使用顯微鏡對侵襲細胞進行定量分析。

1.10 化療耐藥敏感性檢測 將HCC細胞接種于96孔板中，加入終濃度為0、0.1、1、10、50、100 μmol/L的奧沙利鉑藥物（美國MCE公司），處理細胞48 h。使用CCK-8試劑盒測定細胞活性，計算半數(shù)生長抑制率（IC 50 ），使用GraphPad Prism 8.0 軟件進行分析，比較不同處理細胞IC 50 值變化。以35 μmol/L濃度的奧沙利鉑培養(yǎng)細胞，觀察細胞敏感性變化。

1.11 慢病毒轉染細胞 包含GINS1基因表達干擾質粒（shGINS1-#1，shGINS1-#2，shGINS1-#3）及其陰性對照質粒（shNC）的慢病毒載體購自上海吉瑪基因公司。按照說明，將細胞按5 000個/孔的密度接種于24孔板內，分為GINS1敲低組和敲低陰性對照組，根據(jù)分組分別加入對應的慢病毒-培養(yǎng)基混合液。病毒侵染細胞24 h后撤去培養(yǎng)基，更換為新鮮完全培養(yǎng)基。48 h后使用含10 mg/mL嘌呤霉素（上海碧云天公司）的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)各組細胞，3天后存活細胞即為成功轉染了慢病毒的細胞。人類GINS1基因表達干擾質粒中短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA，shRNA）序列見表2。

1.12 裸鼠負瘤模型 12只裸鼠來自北京斯貝福生物公司［生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2019-0010，合格證號：1100111911047350］，體質量20～22 g。裸鼠在SPF級環(huán)境中適應性飼養(yǎng) 1 周，環(huán)境相對濕度為 62%～70%，溫度為（23±1.5）℃，12 h/12 h間斷照明，提供充足飼料和無菌水，自由飲食。在隨機分配為 GINS1 敲低組和對照組（每組各6只）后，使用注射器在無菌環(huán)境中將細胞（2×10 6 個/只）注射到裸鼠背部。腫瘤細胞接種第21天從裸鼠身上取下腫瘤樣本，稱重、拍照并記錄。腫瘤體積計算公式：V=（長×寬2 ）/2（mm 3 ）。

1.13 統(tǒng)計學方法 使用 GraphPad Prism 8.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料以 x ˉ ±s表示，兩組間比較采用成組t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 GINS1在HCC中表達上調 GEPIA2數(shù)據(jù)庫檢索結果顯示，GINS1在HCC患者中的表達水平顯著高于健康人群（圖1a）。隨后，在細胞層面進行的蛋白免疫印跡分析結果表明，GINS1蛋白在4種人類HCC細胞系中的表達水平均顯著高于人正常肝細胞系QSG7701（Huh7：t=5.56，P=0.020；Hep3B：t=7.70，P=0.014；MHCC97H：t=8.62，P=0.010；Li-7：t=6.81，P=0.018），并且在具有高轉移潛能的MHCC97H細胞中表達水平最高（P=0.010）（圖1b）。為了驗證細胞實驗結果，本研究對包含40例HCC組織樣本和對應癌旁組織樣本的TMA進行免疫組化染色。結果表明，與癌旁組織相比，GINS1在HCC組織中表達水平顯著上調（P=0.003）（圖1c）。對T1～T4期HCC組織進行蛋白印跡分析顯示，GINS1表達水平與HCC的T分期正相關（r=0.822，P=0.011））（圖 1d）。上述結果提示，GINS1高水平表達可能是促進HCC發(fā)生和發(fā)展的重要因素。

2.2 下調 GINS1表達抑制 HCC細胞增殖、遷移和侵襲活性 為了探究GINS1在HCC發(fā)生和發(fā)展過程中的作用，本研究構建了穩(wěn)定敲低GINS1的MHCC97H細胞株（shGINS1-#1，shGINS1-#2，shGINS1-#3）及其陰性對照細胞株（shNC）。Western Blot和qRT-PCR結果表明，shGINS1-#3敲低效率最佳（Plt;0.001），所以后續(xù)GINS1敲低細胞株均為轉染了 shGINS1-#3 的 MHCC97H 細胞株（圖 2a、b）。CCK-8增殖實驗和克隆形成實驗結果顯示，與對照組相比，shGINS1-MHCC97H組細胞增殖活性顯著降低（P值均lt;0.01）（圖 2c、d）。本研究隨后分析了 GINS1敲低對MHCC97H細胞遷移和侵襲能力的影響。劃痕實驗結果表明，shGINS1-#3組細胞的遷移能力顯著弱于shNC組細胞（Plt;0.01）（圖2e）；Transwell實驗結果顯示，shGINS1-#3組細胞在48 h內發(fā)生侵襲的細胞數(shù)量顯著少于shNC組細胞（Plt;0.01）（圖2f）。這些結果表明，GINS1的表達能夠促進HCC細胞增殖、遷移和侵襲。

2.3 GINS1表達缺失增強奧沙利鉑對HCC細胞的凋亡誘導作用 為了探究GINS1的表達是否與HCC細胞化療耐藥性的產(chǎn)生相關，本研究使用不同濃度梯度奧沙利鉑處理MHCC97H細胞。如圖3a所示，shGINS1-#3組細胞對奧沙利鉑敏感性增強，IC 50 值低于 shNC 細胞（Plt;0.01）。隨后，以35 μmol/L奧沙利鉑分別培養(yǎng)上述兩組細胞24 h。Western Blot檢測結果顯示，與shNC組相比，shGINS1-#3組細胞內凋亡蛋白Bax和Bad表達水平顯著升高（P值均lt;0.001）（圖3b）。這說明，GINS1的表達有利于HCC細胞對奧沙利鉑化療藥物抗性的形成，GINS1表達缺失增強了奧沙利鉑對HCC細胞的凋亡誘導作用。

2.4 GINS1敲低抑制了HCC腫瘤體內生長 為了驗證體外實驗的結果，本研究構建了裸鼠HCC負瘤模型。在接種腫瘤細胞第21天處死動物，完整取下腫瘤，觀察到GINS1敲低組裸鼠形成的腫瘤質量和體積均顯著小于對照組（P值均lt;0.001）（圖4）。

2.5 GINS1通過Notch/JAK2/STAT3通路促進HCC進展和奧沙利鉑耐藥 Notch通路和JAK/STAT通路的異常表達與HCC的進展密切相關。與shNC組細胞相比，在shGINS1-#3組細胞內，Notch通路中的Notch1、Notch3受體蛋白表達水平顯著降低（P值均lt;0.001），JAK/STAT通路中的JAK2、STAT3蛋白總體表達水平無顯著差異，而p-JAK2和p-STAT3蛋白表達水平顯著降低（P值均lt;0.001）（圖 5a）。加入 10 μg/mL 的 Notch 受體激動劑 Jagged-1后，發(fā)現(xiàn)shGINS1-MHCC97H組細胞p-JAK2、p-STAT3表達水平均有所升高（P 值均lt;0.01）（圖 5b），提示 JAK2/STAT3通路受到Notch信號的直接調控。此外，克隆形成實驗結果顯示，10 μg/mL的Jagged-1有效增強了shGINS1-MHCC97H組細胞增殖活性（Plt;0.01）（圖5c）。而劃痕實驗和 Transwell 侵襲實驗進一步發(fā)現(xiàn)，在 Jagged-1 作用下，因GINS1敲低而導致的MHCC97H細胞遷移和侵襲活性抑制得到部分逆轉（P值均lt;0.01）（圖5d、e）。最后，以35 μmol/L奧沙利鉑培養(yǎng)細胞24 h，Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)添加Jagged-1的shGINS1-MHCC97H組細胞凋亡蛋白 Bax 和 Bad 表達水平均顯著低于未添加 Jagged-1 的shGINS1-MHCC97H組細胞（P值均lt;0.01）（圖5f）。以上結果表明，GINS1對HCC增殖、遷移、侵襲和耐藥性形成的作用是通過Notch/JAK2/STAT3通路介導的。

3 討論

HCC發(fā)病率和病死率均較高，通常預后不良，全球每年有近60萬人死于該?。?2-13］。因此，尋找HCC早期診斷和靶向治療的特異性標志物有重要意義。

GINS1是四聚體復合物GINS的一部分，其編碼基因在進化上非常保守。它是復制解旋酶機制的組成部分，并被認為參與DNA復制。研究發(fā)現(xiàn)，GINS1的缺失導致內細胞團增殖受損，造成胚胎死亡［14］。多項研究表明，GINS1不僅在正常細胞中有重要作用，而且在癌細胞中也發(fā)揮作用。GINS復合物在乳腺癌、肺癌等腫瘤中被發(fā)現(xiàn)高表達，并且GINS1高轉錄活性與腫瘤細胞高增殖和轉移活性、高轉移潛能相關［15］。在本研究中，GINS1被證明在HCC患者、HCC組織和HCC細胞系中高表達，并且促進HCC進展和化療耐藥。

研究發(fā)現(xiàn)，Notch信號通路在進化上較為保守，Notch受體（Notch1～4）經(jīng)過三次剪切后轉位至細胞核內調控靶基因的轉錄［16］。Notch信號深度參與多種組織器官的發(fā)育和穩(wěn)態(tài)，異常表達可導致癌性和非癌性疾病的發(fā)生。但近期研究表明，Notch信號的結果是多變的，且高度依賴于環(huán)境。Notch信號既可以促進多種癌癥的發(fā)展，也可以抑制腫瘤進展［17］。據(jù)報道，Notch1的表達上調可以增強HCC細胞干性和化療耐藥性［18］。另外，Notch1受體的激活可以引發(fā)肝祖細胞驅動的HCC發(fā)生和腫瘤肺轉移［19］。Notch3受體在HCC中表達異常，并且與患者低生存率相關［20-21］。多項研究發(fā)現(xiàn)，抑制Notch3可以有效增強化療藥物對 HCC 的治療作用［22-24］。因此，Notch1 和 Notch3受體在HCC中均展現(xiàn)出重要作用。

JAK 非受體酪氨酸激酶家族由四種蛋白質組成：JAK1、JAK2、JAK3和 TYK2。STAT蛋白是 JAK下游信號分子。STAT家族成員包括STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5A、STAT5B和STAT6。JAK/STAT信號通路是細胞內普遍表達的信號轉導通路，參與細胞增殖、分化、凋亡、免疫調節(jié)等許多重要的生物學過程［25-26］。多項研究表明，JAK/STAT信號通路與HCC發(fā)生和發(fā)展相關。使用干擾素-α（IFN-α）來驅動宿主的抗病毒反應是目前治療慢性乙型肝炎的一線方法，并已被證實可以減緩肝纖維化的進展，甚至延緩HCC的發(fā)生。作為一種重要的免疫相關細胞因子，IFN-α可激活JAK/STAT信號，誘導各種具有抗病毒和免疫調節(jié)功能的IFN刺激基因［27］。此外，由外來信號引起的HCC細胞內JAK2/STAT3通路的激活能夠促進HCC進展［28］。在本研究中，GINS1的表達被證明能夠通過激活JAK2/STAT3通路促進HCC進展和化療耐藥。

總之，本研究進一步證實了GINS1在HCC中的關鍵作用，并且與Notch/JAK2/STAT3通路的激活相關。這些發(fā)現(xiàn)可能為臨床HCC診治提供新的思路。然而，由于本研究缺少關于GINS1過表達的相關實驗，因此GINS1在HCC發(fā)生和發(fā)展中的作用還需要進一步探索。

倫理學聲明：本研究中臨床樣本相關研究由新疆醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院倫理委員會審批，批號：K202311-01，患者均簽署知情同意書。本研究中所有動物操作均經(jīng)醫(yī)院動物保護和使用倫理委員會批準，批號：A240301-236。

利益沖突聲明：本文不存在任何利益沖突。

作者貢獻聲明：霍怡杉負責設計論文框架，起草論文；段相冰、馬玉玉負責實驗操作，研究過程的實施；李大偉、張凱楠負責樣本數(shù)據(jù)收集，統(tǒng)計學分析和繪制圖表；張國軍負責論文修改；馬秀敏負責擬定寫作思路，指導撰寫文章并最后定稿。

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收稿日期：2024-07-20；錄用日期：2024-10-08

本文編輯：王瑩

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