摘要：TIFY家族蛋白是一類在植物中廣泛存在的轉錄因子，該家族蛋白含有一個高度保守的TIFY結構域，通過參與植物內部的多種信號途徑，對植物的生長發(fā)育、逆境響應以及防御機制進行調節(jié)。本研究從‘草原4號’紫花苜蓿（Medicago sativa"L.）中克隆得到MsTIFY77基因并對其進行生物學信息分析以及表達模式分析，探究MsTIFY77基因在脅迫應答中的功能。結果發(fā)現(xiàn)，該基因全長1101 bp，開放閱讀框（Open reading frame，ORF）編碼367個氨基酸，含有TIFY和CCT-2結構域。氨基酸序列分析表明MsTIFY77蛋白為不穩(wěn)定蛋白，通過系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明紫花苜蓿MsTIFY77蛋白與蒺藜苜蓿（Medicago truncatula），豌豆（Pisum sativum），紅三葉（Trifolium pratense），毛苕子（Vicia villosa），鷹嘴豆（Cicer arietinum）和白車軸草（Trifolium repens）的TIFY蛋白親緣關系較近。亞細胞預測MsTIFY77蛋白定位于細胞核。qRT-PCR結果顯示，低溫和干旱脅迫誘導該基因的表達，而脫落酸脅迫對該基因表達有抑制作用。研究結果為MsTIFY77基因的功能提供參考。

關鍵詞：紫花苜蓿；TIFY77基因；基因克?。槐磉_分析

中圖分類號：S541.9 """""""文獻標識碼：A """""""文章編號：1007-0435（2025）03-0719-09

Cloning and Expression Analysis of MsTIFY77"Gene in Alfalfa

ZHANG Yan¹，"CHEN Qi¹，"DAI Rui¹，"LI Jian-wei¹，"BIAN Lin¹，"ZHANG Zhi-qiang^1，2*

（1.Colleg of Grassland Science，Inner Mongolia Agricultural University，Inner Mongolia Autonomous Region，"Hohhot，"Inner Mongolia 010000，China；"2.Technology Engineering Center of Drought and Cold-resistant Grass Breeding in North of the National Forestry and Grassland Administration，"Colleg of Grassland Science，"Inner Mongolia Agricultural University，"Hohhot，"Inner Mongolia 010000，China）

Abstract：The TIFY family proteins are a class of transcription factors that widely presented in plants，"which contain a highly conserved TIFY domain. They regulate plants growth and development，"stress responses，"and defense mechanisms by participating in numerous internal signaling pathways of plants. In this study，"MsTIFY77"gene was cloned from Medicago sativa. L. ‘Caoyuan No.4’"and its expression pattern and biological information were preliminarily elucidated. The results showed that the gene is 1101 bp in length，"with an open reading frame （ORF）"encoding 367 amino acids，"containing TIFY and CCT-2 domains. Amino acid sequence analysis showed that MsTIFY77 protein is an unstable protein. Phylogenetic tree analysis showed that MsTIFY77 protein is closely related to the TIFY proteins of Medicago truncatula，"Pisum sativum，"Trifolium pratense，"Vicia villosa，"Cicer arietinum and Trifolium repens. Subcellular localization indicated that the MsTIFY77 protein is located in the nucleus. The qRT-PCR results showed that low temperature and drought stress induced the expression of MsTIFY77"gene，"while abscisic acid treatment inhibited its expression. The results provided a reference for the function study of MsTIFY77"gene.

Key words：Alfalfa；MsTIFY77；Gene cloning；Expression analysis

紫花苜蓿（Medicago sativa"L.）作為一種具有重要經濟價值的牧草，在全球范圍內具有廣泛種植"^［1-2］。它不僅因其高產量、優(yōu)良品種和豐富的營養(yǎng)成分（如高蛋白、維生素和微量元素）而受到青睞^［3-4］，還因其在土壤保護和改善方面的積極作用而被譽為“牧草之王”^［5］。然而，紫花苜蓿在我國北方地區(qū)的生長面臨著低溫和干旱脅迫的挑戰(zhàn)^［6］，尤其是在寒冷的氣候條件下，凍害成為影響苜蓿安全越冬和穩(wěn)定高產的關鍵因素^［7］。低溫導致的凍害和干旱對紫花苜蓿生產造成了重大損失，因此，提高苜蓿的抗寒性和耐旱性成為品種改良和種植管理的重要目標^［8］。

TIFY家族蛋白在植物激素信號通路的交互作用中扮演著核心角色^［9］。這些轉錄因子不僅參與茉莉酸（Jasmonic acid，"JA）的信號傳遞，還與其他關鍵植物激素如赤霉素、水楊酸、脫落酸（Abscisic acid，"ABA）、生長素和乙烯的信號途徑相互作用，形成了一個復雜的調控網(wǎng)絡。在不利環(huán)境條件下^［10］，植物通過激素信號網(wǎng)絡來調節(jié)生長和脅迫反應^［11］。ABA作為其中一種抑制生長的激素^［12］，對于植物在逆境中維持水分平衡和增強抗寒性具有重要作用。它能促進根部水分的吸收和運輸，增加細胞膜的透性，幫助植物在寒冷環(huán)境中保持水分，減少冰晶對細胞結構的損害^［13-16］。在小麥（Triticum aestivum）中，TIFY轉錄因子顯示出對生物和非生物脅迫的敏感性。特別是在植物激素誘導的應激條件下，TIFY基因在最初的幾個小時內表達顯著上調，包括對ABA的響應。這種響應可能涉及對ABA信號的正向或負向調控，進而影響植物的逆境適應性^［17］。ABA的增加可以誘導TIFY基因的表達，激活或抑制特定基因的表達，從而增強植物對逆境的耐受性。TIFY轉錄因子通過與其他植物激素信號通路的交互作用，參與調控植物對逆境的響應^［18］，其中包括與ABA信號通路的相互作用，這對于植物適應和抵抗環(huán)境脅迫具有至關重要的意義。因此，TIFY轉錄因子與ABA之間的相互作用構成了植物逆境響應機制的一個重要環(huán)節(jié)，有助于提高作物的抗逆性和生產力。

TIFY基因家族在植物生長、發(fā)育、防御和應激反應中的作用已經得到了廣泛關注。在柑桔（Citrus reticulata Blanco）中的研究發(fā)現(xiàn)，Cs1g17210，Cs1g17220和Cs4g07130這三個TIFY基因在低溫脅迫下表達量顯著上調，且脅迫程度越大，表達量上調越高，這表明這些TIFY基因可能在柑桔對低溫脅迫的響應中起到了重要的調節(jié)作用^［19］；在雙穗短柄草（Brachypodium distachyon）中的研究也發(fā)現(xiàn)，21個BdTIFY基因中，有12個受到JA的誘導，4個受到ABA的誘導，且大多數(shù)BdTIFY基因對干旱、鹽堿、低溫和高溫等非生物脅迫有反應。這一發(fā)現(xiàn)進一步證實了TIFY基因家族在植物逆境應答中的廣泛作用，并且揭示了它們可能通過不同的激素信號途徑來實現(xiàn)對逆境的響應^［20］。MsTIFY77作為TIFY家族的一員，其功能探索對于理解植物如何精細調控其生命活動具有重要意義，本研究以‘草原4號’紫花苜蓿為研究材料，從中克隆得到MsTIFY77基因，并對其進行生物信息學分析，表達模式分析，為苜?？鼓嫘曰虻墓δ芡诰蚝屠锰峁┯辛σ罁?jù)。

1 材料與方法

1.1 植物材料及處理

本研究以‘草原4號’紫花苜蓿為試驗材料。選取顆粒飽滿的種子，將種子置于2%的次氯酸鈉溶液中浸泡10 min，其間不停攪拌，蒸餾水反復沖洗5～8次后，置于蒸餾水中浸泡12 h，將消毒過的種子種植于盛有營養(yǎng)土和蛭石（2∶1）的花盆中，放置在內蒙古農業(yè)大學草原與資源環(huán)境學院人工氣候室中進行培養(yǎng)，栽培時間為長日照條件（16 h光照/8 h黑暗），定期澆水。

將紫花苜蓿幼苗置于4℃低溫培養(yǎng)箱中，分別于0 h，2 h，6 h，12 h，24 h，48 h采集樣品；ABA激素處理，在植株上噴灑10 μmol·L^-1"ABA，為減少誤差，每株噴5次，并用透明塑料袋罩住，防止激素揮發(fā)，在0 h，1 h，3 h，6 h和12 h取樣；將紫花苜蓿幼苗進行空氣干旱處理，分別于0 h，2 h，4 h，8 h，12 h和24 h取樣；在紫花苜蓿結莢期，分別對植物根、莖、老葉、嫩葉、花、莢和種子進行取樣，用于組織特異性分析。所有樣品一式三份。取樣后，立即將樣品快速冷凍在液氮中，并在-80°C保存以供后續(xù)分析。

1.2 試驗方法

1.2.1 總RNA提取及反轉錄合成cDNA 使用TRIzon Rragent（康為世紀生物科技有限公司）試劑從‘草原4號’苜蓿葉片中提取總RNA，利用Nano Drop檢測RNA質量，將RNA儲存在-80℃。利用Easy Script First-Strand cDNA Synthesis試劑盒（康為世紀生物科技有限公司）獲得cDNA，保存在-20 ℃供后續(xù)實驗。

1.2.2 目的基因克隆 以‘草原4號’紫花苜蓿cDNA為模板，利用Primer 3.0軟件設計引物（表1），進行PCR擴增目的基因，PCR體系為50 μL，包含cDNA模板5 μL（10 ng·μ^-1），2×Es Taq Master Mix（Dye）"25 μL，上下游引物各2 μL（10 ng·μ^-1），ddH₂O 16 μL。擴增程序為：94℃預變性2 min；98℃變性30 s，55℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環(huán)；72℃延伸2 min，4℃保存。用凝膠回收試劑盒（天根生化科技有限公司，中國）回收產物，利用熱激法轉化大腸桿菌感受態(tài)Trans1-T1，挑取陽性單菌落，經過菌落以及菌液PCR檢測后，將陽性的單克隆菌落送至北京擎科生物科技股份有限公司測序。

1.2.3 生物學信息分析 利用NCBI Blast（BLAST："Basic Local Alignment Search Tool （nih.gov））在線網(wǎng)站進行序列比對，使用DNAMAN軟件進行系統(tǒng)進化樹制作，采用最大似然法構建系統(tǒng)進化樹；SOPMA（https：//npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/secpred_sopma.pl）在線網(wǎng)站預測蛋白質二級結構；利用SWISS-MODEL（https：//swissmodel.expasy.org/）在線軟件預測蛋白質三級結構；NCBI protein BLAST在線工具分析保守結構域；運用Expasy Prot Param tool（https：//web.expasy.org/protscale/）分析蛋白理化性質。

1.2.4 qRT-PCR分析 利用Primer 3.0在線軟件設計qRT-PCR引物（表1）。不同組織部位的cDNA模板取4 μL，上下引物各0.4 μL，ddH₂O 5 μL，ROX Reference Dye（50×）0.2 μL，SYBR qPCR Master Mix 10 μL（康為世紀生物科技有限公司）。反應程序為：95℃ 30 s；95℃ 5 s；60℃ 30 s；95℃ 15 s；40個循環(huán)。以β-actin為內參基因，每樣品3次重復，用2^-??Ct方法計算基因相對表達量。

1.2.5 亞細胞位置預測 利用PSORT軟件對MsTIFY11蛋白進行亞細胞定位預測。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析與處理 使用"Excel 2010統(tǒng)計計算相關數(shù)據(jù)，使用IBM SPSS Statistics 27軟件進行方差分析，使用t檢驗比較5%顯著性水平下的平均值。使用Origin 2021軟件制作條形圖。

2 結果與分析

2.1 MsTIFY77基因克隆

采用TRIzon法提取‘草原4號’紫花苜蓿葉片總RNA反轉錄合成第一鏈cDNA，設計特異性引物，經過PCR擴增、切膠回收、連接、轉大腸桿菌以及測序，最終獲得MsTIFY77基因。測序后發(fā)現(xiàn)該基因cDNA全長為1～101 bp（圖1），ORF框編碼含367個氨基酸（圖2），NCBI基因登錄號為OR936160。

2.2 MsTIFY77基因生物信息學分析

經NCBI protein BLAST分析，可獲得MsTIFY77蛋白的結構域，表明MsTIFY77屬于TIFY家族成員，該蛋白含有TIFY結構域和CCT-2結構域，屬于JAZ亞家族蛋白（圖3A）。分子量為：38 617.66 kDa，理論等電子點為：9.18。紫花苜蓿MsTIFY77蛋白分子式為C₁₆₈₅H₂₆₈₂N₄₇₆O₅₃₁S₁₆，該基因編碼的氨基酸序列中絲氨酸（Ser13.4%）含量最高，其次是丙氨酸（Ala8.7%），脯氨酸（Pro 8.5%），天冬酰胺（Asn 7.1%），甘氨酸（Gly 7.1%）和纈氨酸（Val 7.1%）。脂肪指數(shù)為：69.84，平均親水指數(shù)為-0.308，不穩(wěn)定指數(shù)為：44.56，這將MsTIFY77蛋白歸類為不穩(wěn)定親水性蛋白（圖3C）。接下來利用SOPMA在線網(wǎng)站預測蛋白二級結構（圖3D），其中α-螺旋（藍色）占11.20%，β-折疊（紅色）占3.28%，不規(guī)則卷曲（紫色）占70.49%，延伸鏈（綠色）占15.03%。蛋白三級結構預測由SWISS-MODEL完成，其結果與預測的二級結構基本吻合（圖3B）。PSORT軟件預測結果顯示，MsTIFY77蛋白定位于細胞核（圖4）。

利用DNAMAN軟件及NCBI-Blast（www.ncbi.nlm.nih.gov）分析后發(fā)現(xiàn)，MsTIFY77蛋白與蒺藜苜蓿（Medicago truncatula），豌豆（Pisum sativum），紅三葉（Trifolium pratense），毛苕子（Vicia villosa），鷹嘴豆（Cicer arietinum）和白車軸草（Trifolium repens）中相關氨基酸的相似度分別為97.14%，86.08%，85.84%，85.48%，83.22%和78.57%（圖5A）。系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明，紫花苜蓿MsTIFY77蛋白與其他豆科植物如蒺藜苜蓿、豌豆、紅三葉、毛苕子、鷹嘴豆和白車軸草親緣關系較近，與蒺藜苜蓿親緣關系最近（圖5B）。

2.3 MsTIFY77的表達模式分析

利用實時熒光定量PCR技術，對MsTIFY77基因在紫花苜蓿根、莖、老葉、嫩葉、花、莢和種子中的表達量進行分析，發(fā)現(xiàn)該基因在所有組織中均表達，其中在莖中表達量最高，約為種子的10倍，老葉和嫩葉、花和莢的表達量相近（圖6A）；在低溫處理下，其表達量除2 h外較對照組均顯著上調（Plt;0.05），且在低溫脅迫48 h時，其表達量最高，約為0 h的表達量的9倍，在低溫脅迫2 h時表達量最低，在這之后隨著時間的增加，表達量均不同程度地顯著增加（Plt;0.05）（圖6B）；在不同干旱時間處理下，MsTIFY77基因在8 h，12 h和24 h被顯著誘導（圖6C）；以不同的小時數(shù)脫落酸脅迫后，在脅迫6 h時的表達量最低，24 h時相對表達量較其他時間高，但仍低于對照水平（圖6D）。

3 討論

TIFY轉錄因子家族在植物生物學中的重要性日益凸顯，它們在植物的生長發(fā)育、脅迫應答和激素信號轉導等方面發(fā)揮著關鍵作用^［22］。TIFY家族蛋白因其獨特的TIFY結構域而得名，該結構域參與了DNA的結合過程，從而調控目標基因的表達。在多種植物中對TIFY基因家族的研究已經取得了一定的進展。在辣椒（Capsicum annuum）中，CaTIFY7和CaTIFY10b兩種基因在非生物脅迫尤其是冷脅迫下表達量顯著增加，參與調控植物的逆境響應^［21］；LrJAZ2基因在枸杞（Lycium barbarum）和擬南芥（Arabidopsis thaliana）中的過表達顯示了對氣孔發(fā)育的負向調控作用^［22］；在菊花中，TIFY家族蛋白CmJAZ1-like與bHLH轉錄因子CmBPE2的相互作用對于花瓣大小的調控起著關鍵作用^［23］；高叢藍莓（Vaccinium corymbosum）基因組中鑒定出34個TIFY基因，它們在花和果實發(fā)育過程中具有特定的表達模式，并對外部茉莉酸（JA）處理有反應^［24］；在花生（Arachis hypogaea）中，JAZ1基因和TIFY8基因在根瘤共生的早期和晚期階段分別顯示出增強的表達^［25］；甘藍型油菜中，通過對TIFY基因家族的全面全基因組分析，發(fā)現(xiàn)TIFY基因成員在植物結構中的作用，特別是在芽分枝調控上，研究發(fā)現(xiàn)，TIFY家族基因在莖、花芽和長角果中表達量較高，而且多數(shù)TIFY基因在芽激活時顯著下調表達^［26］。這些研究揭示了TIFY轉錄因子在不同植物種類中的多樣性和保守性，以及它們在植物生理過程中的潛在作用。本研究從‘草原4號’紫花苜蓿中克隆到的MsTIFY77基因，全長1101 bp，含367個氨基酸的蛋白。將MsTIFY77基因與鷹嘴豆、毛苕子、紅三葉、豌豆和蒺藜苜蓿的序列進行同源比對，發(fā)現(xiàn)在系統(tǒng)進化上MsTIFY77基因與以上基因具有較近的親緣關系，由此推測，MsTIFY77在功能上可能與這幾個物種具有高度相似性。

TIFY轉錄因子家族在植物對逆境脅迫的響應中起著重要作用，尤其是在非生物脅迫如低溫和干旱條件下。這些轉錄因子通過調節(jié)特定基因的表達，幫助植物適應和抵御低溫帶來的不利影響。在油菜（Brassica napus）中，TIFY3和TIFY6基因在低溫脅迫下被誘導表達，這表明它們可能參與了植物對冷害或凍害的防御反應^［27］。而TIFY7基因在冷休克條件下表達受到抑制，這可能反映了不同TIFY基因在植物對低溫脅迫響應中的多樣性和復雜性。黃獼猴桃（Actinidia chinensis）中的TIFY轉錄因子也顯示出在低溫脅迫下的顯著誘導表達，進一步證實了TIFY家族在植物對低溫脅迫響應中的普遍作用^［28］。在低溫脅迫下，TIFY轉錄因子不僅可以直接調節(jié)下游功能基因的表達，還可以通過調控其他轉錄因子的表達來影響低溫相關基因的表達。這種多層次的調控網(wǎng)絡使得植物能夠有效地應對低溫。在干旱脅迫方面，TIFY基因家族的成員已被證明在不同植物中發(fā)揮著關鍵作用，在玉米（Zea mays）中，干旱脅迫誘導了特定ZmTIFY基因的表達，如ZmTIFY4，5，8，26和28，而其他一些基因如ZmTIFY16，13，24，27，18和30的表達受到了干旱的抑制。這表明ZmTIFY家族在應對干旱脅迫方面可能起著至關重要的作用^［29］。本研究發(fā)現(xiàn)在低溫脅迫下其表達量顯著上調；在干旱脅迫下，在8 h、12 h和24 h被顯著誘導，說明MsTIFY77基因可能參與低溫和干旱的防御反應。

此外，植物對低溫脅迫的響應機制受到脫落酸（ABA）的調控^［30］。在月季（Rosa chinensis）研究中ABA可能是有效地提高月季TIFY家族成員參與月季的脅迫響應重要因素^［31］；蘋果（Malus pumila）在外源ABA處理下，大部分MdTIFY基因被誘導表達^［32］。本研究通過qRT-PCR技術發(fā)現(xiàn)，在ABA脅迫下MsTIFY77表達量下降，說明MsTIFY77基因可能參與ABA脅迫的防御反應。

4 結論

本研究成功克隆到‘草原4號’紫花苜蓿MsTIFY77基因，并對其進行生物信息學分析，MsTIFY77基因全長1101 bp，開放閱讀框編碼367個氨基酸，含有TIFY和CCT-2結構域，屬于TIFY家族成員。亞細胞定位預測顯示該蛋白位于細胞核。表達分析結果表明低溫和干旱脅迫誘導MsTIFY77基因的表達，而脫落酸脅迫對MsTIFY77基因表達有抑制作用。

參考文獻

［1］"李雪，沙栢平，高雪芹，等. 不同紫花苜蓿種質材料萌發(fā)期耐鹽性鑒定與綜合評價［J］. 草地學報，2020，28（2）：437-445

［2］"李剛. 紫花苜蓿研究進展［J］. 安徽農學通報，2019，25（14）：71-75

［3］"Ll X，WEI Y，MOORE K，et al. Association mapping of biomass yield and stem composition in a tetraploid alfalfa breeding population［J］. The Plant Genome，2011，4（1）：24-35

［4］"范雪，張文杰，任斐兒，等. 添加苜蓿干草對斷奶犢牛生長性能、瘤胃發(fā)酵及血清指標的影響［J］. 中國飼料，2022（24）：22-27

［5］"鄭普山，郝保平，馮悅晨，等. 紫花苜蓿對鹽堿地的改良效果［J］. 山西農業(yè)科學，2012，40（11）：1204-1206

［6］"陳衛(wèi)東，張玉霞，叢百明，等. 鉀肥對紫花苜蓿根頸丙二醛、可溶性蛋白含量與抗氧化系統(tǒng)的影響［J］. 草地學報，2021，29（4）：717-723

［7］"孫啟忠，王育青，侯向陽. 紫花苜蓿越冬性研究概述［J］. 草業(yè)科學，2004（3）：21-25

［8］"謝思藝，周承哲，朱晨，等. 茶樹CsTIFY家族全基因組鑒定及非生物脅迫和激素處理中主要基因表達分析［J］. 園藝學報，2022，49（1）：100-116

［9］"楊銳佳，張中保，吳忠義. 植物轉錄因子TIFY家族蛋白結構和功能的研究進展［J］. 生物技術通報，"2020，"36（12）："121-128

［10］"劉玉鳳，王孝，陳海銀，等. 植物中miRNA響應非生物脅迫研究進展［J］. 中國蔬菜，2017（2）：23-29

［11］"WASTERNACK C，F(xiàn)EUSSNER I. The oxylipin pathways：biochemistry and function［J］. Annual Review of Plant Biology，2018（69）：363-386

［12］"郝格格，孫忠富，張錄強，等. 脫落酸在植物逆境脅迫研究中的進展［J］. 中國農學通報，2009，25（18）：212-215

［13］"劉德兵，魏軍亞，崔百明，等. 脫落酸對香蕉幼苗抗寒性的影響［J］. 熱帶作物學報，2007（2）：1-4

［14］"徐利利，陳焱山，張士權，等. ABA對木犀科植物抗凍性影響的研究［J］. 現(xiàn)代農業(yè)科技，2007（15）：8-9

［15］"湯日圣，黃益洪，唐現(xiàn)洪，等. 微生物源脫落酸（ABA）對辣椒苗耐冷性的影響［J］. 江蘇農業(yè)學報，2008（4）：467-470

［16］"尤揚，袁志良，張曉云. 葉面噴施ABA對香樟幼樹抗寒性的影響［J］. 河南科學，2008，26（11）：1352-1354

［17］"SINGH P，K MUKHOPADHYAY K. Comprehensive molecular dissection of TIFY Transcription factors reveal their dynamic responses to biotic and abiotic stress in wheat （Triticum aestivum"L.）［J］. Scientific Reports，"2021，"11（1）："9739

［18］"HUSSAIN Q，ASIM M，ZHANG R，et al. Transcription factors interact with ABA through gene expression and signaling pathways to mitigate drought and salinity stress［J］"Biomolecules，2021，11（8）：1159

［19］"張滬，肖翠，王貴元，等. 柑桔TIFY基因結構特征及響應低溫表達分析［J］. 中國南方果樹，2020，49（2）：34-39

［20］"ZHANG L，YOU J，CHAN Z. Identification and characterization of TIFY family genes in Brachypodium distachyon［J］. Journal of Plant Research，2015，128（6）：995-1005

［21］"WANG X，LI N，ZAN T，et al. Genome-wide analysis of the TIFY family and function of CaTIFY7"and CaTIFY10b"under cold stress in pepper （Capsicum annuum L.）［J］. Frontiers in Plant Science，2023（14）：1308721

［22］"ZHAO J，LI A，XU M，et al. Genome-wide analysis of the TIFY family in Lycium and the negative regulation of stomatal development by LrJAZ2 gene［J］. Plant Physiology and Biochemistry，2024（206）：108285

［23］"GUAN Y，DING L，JIANG J，et al.The TIFY family protein CmJAZ1-like negatively regulates petal size via interaction with the bHLH transcription factor CmBPE2 in Chrysanthemum morifolium［J］. The Plant Journal，2022，112（6）：1489-1506

［24］"LIU L M，BAI N ，ZHENG Y Q，et al. Genome-wide identification and analysis of TIFY family in highbush blueberry and their responses to exogenous jasmonic acid［J］. Scientia Horticulturae，2022，305：111391

［25］"SEN S，DASGUPTA M. Involvement of Arachis hypogaea Jasmonate ZIM domain/TIFY proteins in root nodule symbiosis［J］. Journal of Plant Research，2021，134（2）："307-326

［26］"XIN H，YU K，LI W Q，et al. Genome-wide identification and functional analysis of the TIFY gene family in the response to multiple stresses in Brassica napus L［J］. BMC Genomics，2020，21（1）：736-736

［27］"張琪，陶順仙，蘇倩，等. 甘藍型油菜耐鹽相關基因"BnaJAZ1 的克隆及BnaTIFY基因家族分析［J］.分子植物育種，2024，22（14）：4549-4559

［28］"HAKATA M，KURODA M，OHSUMI A，et al. Overexpression of a rice TIFY gene increases grain size through enhanced accumulation of carbohydrates in the stem［J］. Bioscience，"Biotechnology，"and Biochemistry，2012，76（11）：2129-2134

［29］"DAI W，"MANK J E，"BAN L. Gene gain and loss from the Asian corn borer W chromosome［J］. BMC Biology，"2024，22（1）：102

［30］"李秀青，胡子曜，雷建峰，等. 棉花黃萎病抗性相關基因GhTIFY9的克隆與功能分析［J］. 生物技術通報，2022，38（8）：127-134

［31］"ZHANG Z，LI X，YU R，et al. Isolation，"structural analysis，"and expression characteristics of the maize TIFY gene family［J］. Molecular Genetics and Genomics，2015，290（5）：1849-1858

［32］"LI X，YIN X，WANG H，et al. Genome-wide identification and analysis of the apple（Malusxdomestica"Borkh.）TIFY gene family［J］. Tree Genetics amp; Genomes，2015（1）：1-13

（責任編輯""劉婷婷）

引用格式：張巖， 陳崎， 代蕊，"等.紫花苜蓿MsTIFY77基因克隆及表達分析[J].草地學報，2025，33（3）：719-727

Citation：ZHANG Yan， CHEN Qi， DAI Rui， et al.Cloning and Expression Analysis of"MsTIFY77"Gene in Alfalfa[J].Acta Agrestia Sinica，2025，33（3）：719-727

基金項目：內蒙古自治區(qū)高等學?！扒嗄昕萍加⒉胖С猪椖俊保∟JYT23009）；苜蓿分子育種體系構建及種質創(chuàng)制（BR22-11-12）；內蒙古農業(yè)大學草學學科青年基金（IMAUCXQJ2023004）資助

作者簡介：張巖（1999-），女，漢族，內蒙古赤峰人，碩士研究生，主要從事草育種方面研究，E-mail：18247628125@163.com；*通信作者Author for correspondence，E-mail："zhangzq19890102@126.com