摘要：目的：通過(guò)HPLC多成分一測(cè)多評(píng)含量測(cè)定方法及多模式化學(xué)識(shí)別方法對(duì)陳香露白露片進(jìn)行質(zhì)量分析研究。方法：采用高效液相色譜法，以橙皮苷為內(nèi)參物，建立與其他5個(gè)成分之間的相對(duì)校正因子，計(jì)算5種待測(cè)成分的含量，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng)。同時(shí)與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，驗(yàn)證QAMS法的定量評(píng)價(jià)和穩(wěn)定可控。通過(guò)聚類分析（CA）、主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘法判別分析（OPLS-DA）分別探討不同廠家陳香露白露片的質(zhì)量。結(jié)果：橙皮苷與甘草苷、甘草酸銨、β-細(xì)辛醚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的相對(duì)校正因子分別為0.681、3.744、0.680、1.030、1.068，然后與外標(biāo)法進(jìn)行比較。CA可將17批次陳香露白露片聚類為2類，PCA結(jié)果提取了2個(gè)主成分，OPLS-DA能有效地將不同廠家的產(chǎn)品明顯區(qū)分開(kāi)來(lái)。結(jié)論：以橙皮苷為內(nèi)參物，建立陳香露白露片中5個(gè)成分的QAMS法準(zhǔn)確、可行，可用于陳香露白露片的定量分析及質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：陳香露白露片；一測(cè)多評(píng)法；高效液相色譜法；化學(xué)模式識(shí)別

中圖分類號(hào)：R286.0文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1674-4977.2025.01.003

基金項(xiàng)目：湖北省藥品監(jiān)督管理局藥品安全監(jiān)管科研項(xiàng)目（20220117）。

0引言

一測(cè)多評(píng)（quantitative analysis of multi-compo？ nents by single marker，QAMS）由王智民[1]于2006年首次提出。它是一種高效、簡(jiǎn)便的測(cè)定方法，適用于中藥的多指標(biāo)質(zhì)量控制評(píng)價(jià)。該方法利用樣品中各活性成分之間的關(guān)系，僅選定1個(gè)化學(xué)成分（內(nèi)參物，通常為典型成分且對(duì)照品低價(jià)易得），建立內(nèi)參物與其他多種成分間的相對(duì)校正因子，實(shí)現(xiàn)多個(gè)同類成分的測(cè)定[2]。

2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）首次收錄QAMS法，不過(guò)當(dāng)時(shí)其應(yīng)用范圍僅局限于黃連。之后，由于QAMS法有效解決了對(duì)照品不足以及多指標(biāo)測(cè)定成本高昂等難題，其應(yīng)用領(lǐng)域不斷拓展，被廣泛應(yīng)用于各類中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究，在推動(dòng)中藥質(zhì)量精準(zhǔn)把控方面發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。到2020年版《中國(guó)藥典》時(shí)，QAMS法的應(yīng)用已延伸至中藥飲片、提取物以及制劑等多個(gè)方面。

陳香露白露片的處方由陳皮、甘草、川木香、大黃、石菖蒲五味中藥和碳酸鎂、氧化鎂、次硝酸鉍、碳酸氫鈉4種化學(xué)藥組成?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為WS3-B-1553-93《陳香露白露片》，僅規(guī)定了采用滴定法測(cè)定次硝酸鉍中鉍的含量[4]，未對(duì)其他成分，特別是甘草、陳皮等中藥成分進(jìn)行控制。而利用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定甘草苷、甘草酸銨、橙皮苷、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯、β-細(xì)辛醚這6種有效成分的含量[5-6]，將中成藥含量測(cè)定與化學(xué)模式識(shí)別相結(jié)合，可以有效分析和控制中成藥質(zhì)量。本研究以17批陳香露白露片樣品為對(duì)象，測(cè)定其有效成分含量，并借助聚類分析（CA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法（OPLS-DA）等模式，對(duì)不同廠家生產(chǎn)的陳香露白露片進(jìn)行分析，為通過(guò)多指標(biāo)含量測(cè)定評(píng)價(jià)不同廠家產(chǎn)品質(zhì)量的優(yōu)劣提供有效的參考。

1儀器與試劑

1.1儀器

1260高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器（安捷倫公司）；MS205DU十萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒）；AE100電子天平（梅特勒）；KQ-300DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Milli-Q Reference超純水機(jī)（默克密理博）。

1.2樣品

17批陳香露白露片樣品來(lái)自10個(gè)生產(chǎn)廠家：云南白藥集團(tuán)大理藥業(yè)有限責(zé)任公司（企業(yè)1），批號(hào)DCA2139（S1）；廣西邦琪藥業(yè)集團(tuán)有限公司（企業(yè)2），批號(hào)20221118（S2）；廣西慧寶源醫(yī)藥科技有限公司（企業(yè)3），批號(hào)20221214（S3）、230502（S4）；廣西圣特藥業(yè)有限公司（企業(yè)4），批號(hào)230211（S5）、230510（S6）；廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)集團(tuán)有限公司（企業(yè)5），批號(hào)20220702（S7）、20220209（S8）；貴州百靈企業(yè)集團(tuán)制藥股份有限公司（企業(yè)6），批號(hào)20221204（S9）、20230306（S10）、20220605（S11）；葫蘆娃藥業(yè)集團(tuán)廣西維威制藥有限公司（企業(yè)7），批號(hào)221002（S12）、230901（S13）；湖南漢森制藥股份有限公司（企業(yè)8），批號(hào)2303119（S14）、2305108（S15）；四川康福來(lái)藥業(yè)集團(tuán)有限公司（企業(yè)9），批號(hào)2220901（S16）；重慶科瑞制藥（集團(tuán)）有限公司（企業(yè)10），批號(hào)833008（S17），以上樣品規(guī)格均為每片重0.3 g。

1.3試劑

對(duì)照品甘草苷（批號(hào)111610-202209，純度95.2%）、甘草酸銨（批號(hào)110731-202122，純度94.4%）、橙皮苷（批號(hào)110721-202220，純度97.2%）、細(xì)辛醚（批號(hào)112018-201802，純度99.3%）、木香烴內(nèi)酯（批號(hào)111525-202313，純度99.6%）、去氫木香內(nèi)酯（批號(hào)111525-202313，純度99.8%）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

乙腈和甲醇為色譜純（湖北弗頓科學(xué)技術(shù)有限公司），其余試劑均為分析純（購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），水為超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

采用Agilent5 TC-C18（2）色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為0.1%磷酸水（A）-甲醇（B）-乙腈（C），梯度洗脫見(jiàn)表1。流速為1.0 mL/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為10μL。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液制備

取甘草苷、橙皮苷、甘草酸銨、β-細(xì)辛醚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品適量，精密稱定，分別用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶解并稀釋成質(zhì)量濃度為78.64、63.58、159.3、23.66、20.92、36.56μg/mL的混合對(duì)照溶液。

2.2.2供試品溶液制備

取陳香露白露片10片，研細(xì)，精密稱定粉末（過(guò)4號(hào)篩）0.5 g，精密加入20 mL體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇，超聲30 min，放冷，精密稱定，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，經(jīng)0.45μm濾膜濾過(guò)，即得。

2.3相對(duì)校正因子（RCF）計(jì)算

采用多點(diǎn)校正法，精密吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10、15μL，按色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品易得、穩(wěn)定且含量最高的橙皮苷作為內(nèi)參物，建立該成分與其他5個(gè)待測(cè)成分之間的相對(duì)校正因子。公式為：

5個(gè)成分相對(duì)校正因子計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4一測(cè)多評(píng)法和外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果比較

橙皮苷作為內(nèi)參物，采用一測(cè)多評(píng)法（QAMS）同時(shí)測(cè)定5種成分含量，與外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果比較結(jié)果見(jiàn)表3。

5種成分QAMS計(jì)算結(jié)果與外標(biāo)法（EMS法）測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差（RSD）為±5%，無(wú)顯著性差異，表明一測(cè)多評(píng)法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能有效反映陳香露白露片的質(zhì)量。運(yùn)用SPSS軟件進(jìn)行PL回歸計(jì)算，分析橙皮苷對(duì)于各目標(biāo)成分的影響，結(jié)果見(jiàn)表4。

結(jié)果表明，兩種方法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05，說(shuō)明x對(duì)于y呈現(xiàn)出顯著性影響）。本研究建立的相對(duì)校正因子準(zhǔn)確可靠，QAMS法可用于陳香露白露片成分的同步定量檢測(cè)。

2.5聚類分析（CA）

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)17批次陳香露白露片中6種有效成分含量進(jìn)行樣品聚類。由圖1可知，當(dāng)分類距離為29時(shí)，17批樣品分為兩類：第一類為S1～S3、S5～S8、S16；第二類為S4，S9～S17。

當(dāng)分類距離為20時(shí)，17批樣品分為四類：第一類為S5、S6、S16；第二類為S1～S3、S7、S8；第三類為S10、S12、S13；第四類為S10、S12、S13、S14、S15、S4、S17、S9、S11。其中，S5、S6為企業(yè)4生產(chǎn)的不同批次，S7、 S8為企業(yè)5生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，S12、S13為企業(yè)7生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，S14、S15為企業(yè)8生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品。說(shuō)明這四家企業(yè)生產(chǎn)的陳香露白露片批次間有效成分含量穩(wěn)定，但不同廠家之間的陳香露白露片有效成分含量具有明顯差異。

2.6主成分分析（PCA）

將17批陳香露白露片6種組分含量導(dǎo)入SIM？ CA14.0軟件，進(jìn)行PCA分析，得分矩陣圖（R2x=0.446）見(jiàn)圖2。從圖2中可以看到樣品間的分離趨勢(shì)。x軸以上有8批，x軸上有1批，x軸以下有8批。

其中，位于第一象限的S7、S8為企業(yè)5生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，位于第二象限的S14、S15為企業(yè)8生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，位于第三象限的S12、S13為企業(yè)7生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品，位于第四象限的S5、S6為企業(yè)4生產(chǎn)的不同批次產(chǎn)品。從整體來(lái)看，不同廠家生產(chǎn)的陳香露白露片的有效成分含量存在一定差異。

2.7正交偏最小二乘法（OPLS-DA）

以17批陳香露白露片6種有效成分含量為變量，導(dǎo)入SIMCA 14.0軟件進(jìn)行OPLS-DA分析，得到的得分圖和VIP圖分別見(jiàn)圖3和圖4。

建立的OPLS-DA模型（R2x=0.53）可以對(duì)不同廠家間的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行判別。由圖3可知，10家生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的陳香露白露片沒(méi)有交叉。2個(gè)廠家生產(chǎn)的陳香露白露片批次間有交叉，證明2家生產(chǎn)企業(yè)批次間產(chǎn)品有效成分含量較穩(wěn)定。

對(duì)成分含量進(jìn)行變量投影重要性（VIP）分析，當(dāng)某一成分含量VIP大于1.0時(shí)，表示該成分為重要變量。6個(gè)變量中橙皮苷、甘草苷、甘草酸銨含量的VIP值大于1，可以標(biāo)記不同廠家生產(chǎn)的陳香露白露片的成分含量存在差異，其余含量VIP值小于1，無(wú)法高效區(qū)分不同樣品的產(chǎn)品質(zhì)量。

3討論

陳香露白露片的處方工藝較為簡(jiǎn)單，產(chǎn)品質(zhì)量主要體現(xiàn)在藥材品質(zhì)的差異上。橙皮苷作為君藥陳皮的主要成分，在不同生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品中測(cè)得的含量差異較大。主要原因是各生產(chǎn)企業(yè)采購(gòu)的藥材產(chǎn)地、種植方式及采收年限不同。β-細(xì)辛醚、木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯為揮發(fā)性成分，如果企業(yè)在藥材購(gòu)進(jìn)及養(yǎng)護(hù)方面存在不當(dāng)，將會(huì)導(dǎo)致其含量流失，從而產(chǎn)生差異。CA、PCA、OPLS-DA是含量測(cè)定結(jié)合化學(xué)模式識(shí)別應(yīng)用最普遍的一種分析方法，其可以清晰地標(biāo)明不同廠家間產(chǎn)品質(zhì)量的差異。結(jié)果表明，CA能將17批次陳香露白露片清晰地分為2類。通過(guò)OPLS-DA分析結(jié)果可以找出影響陳香露白露片產(chǎn)品質(zhì)量差異的3種主要成分。由于現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)缺乏對(duì)該品種重要指標(biāo)成分的控制，因而導(dǎo)致不同企業(yè)生產(chǎn)的陳香露白露片存在較大差異。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介

李華，女，1982年出生，工程師，碩士，研究方向?yàn)橹兴幏治?。通信作者：張正懸，女?990年出生，檢驗(yàn)員，學(xué)士，研究方向?yàn)橹兴幏治觯?36376191@qq.com。

（編輯：李鈺雙，收稿日期：2024-10-09）