摘要：目的：建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/M）測定木香藥材中12種真菌毒素的分析方法，并利用該方法對51批來自三峽庫區(qū)生產(chǎn)企業(yè)和種植基地的樣品進行檢測分析。方法：溶劑為70%甲醇溶液，樣品經(jīng)過提取超聲后，用HLB小柱凈化；色譜柱為Waters Atlantisd C18色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.7μm），質(zhì)譜條件為電噴霧電離源（ESI）和多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）。結(jié)果：12種真菌毒素標準曲線線性關(guān)系良好（R>0.995），方法的檢出限在0.1～3.8μg/kg之間，高、中、低3個不同濃度加標回收率為81.6%～100.5%，相對標準偏差（RSD，n=6）為1.88%～6.81%。在51份樣品中，真菌毒素的檢出率為9.8%；檢出率最高的真菌毒素是ZEN，為9.8%，其次為T-2和FB1，均為3.9%，其他毒素檢出率相對較低。結(jié)論：該方法檢測快速、結(jié)果精準，可用于中藥材樣品中多種真菌毒素的檢測分析。除了藥典規(guī)定的黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮外，還應(yīng)重點監(jiān)督三峽庫區(qū)道地藥材中伏馬毒素B1、伏馬毒素B2和T-2毒素這三種真菌毒素的污染現(xiàn)狀。

關(guān)鍵詞：三峽庫區(qū)；超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；道地藥材；真菌毒素

中圖分類號：R282文獻標志碼：ADOI編碼：10.3969/j.issn.1674-4977.2025.01.001

基金項目：重慶三峽醫(yī)藥高等專科學校重點實驗室項目（Sys20210030）：三峽庫區(qū)道地藥材木香、黃精、陳皮和太白貝母真菌毒素安全性質(zhì)量標準研究。

三峽庫區(qū)常年溫度適宜，濕度較大，為植被提供了較好的生長條件，但這種環(huán)境也加大了庫區(qū)中藥材被污染的風險[1]。在濕度高的地區(qū)，中藥材在處理環(huán)節(jié)中可能因為干燥不徹底、儲藏不當?shù)纫蛩厥艿秸婢廴?，進而影響其藥用價值，嚴重時還會危害人的生命安全[2]。因此，本研究以木香為研究對象，對三峽庫區(qū)道地藥材中12種真菌毒素進行檢測分析。

1實驗部分

1.1儀器與試劑

TSQ Series超高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Waters公司）；AB204S型天平（萬分之一，瑞士梅特勒托利多公司）；TurbovapⅡ型自動吹氮儀（瑞典Biotage公司0；CNW Poly-Sery HLB Pro SPE柱（60 mg，3 mL/100 pcs，上海安譜公司）。

真菌毒素混合標準溶液（青島普瑞邦生物工程有限公司）：黃曲霉毒素B1（AFB1，0.502μg/mL）、黃曲霉毒素G1（AFG1，0.503μg/mL）、黃曲霉毒素B2（AFB1，0.502μg/mL）、黃曲霉毒素G2（AFG2，0.503μg/mL）、玉米赤霉烯酮（ZEN，5.03μg/mL）、T-2毒素（T-2，50.93μg/mL）、伏馬毒素B1（FB1，10.0μg/mL）、伏馬毒素B2（FB2，10.04μg/ mL）、伏馬毒素B3（FB3，10.18μg/mL）、嘔吐毒素（DON，50.01μg/mL）、赭曲霉毒素A（OTA，0.500μg/mL）、赭曲霉毒素B（OTB，50.06μg/mL）。甲醇、乙腈等試劑均為色譜級（迪馬科技有限公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

準確移取標準溶液適量，用50%乙腈稀釋并定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0.0502μg/mL、0.0502μg/ mL、0.0503μg/mL、0.0503μg/mL、0.5093μg/mL、1.001μg/mL、1.004μg/mL、1.018μg/mL、0.503μg/ mL、0.050μg/mL、0.5006μg/mL、0.5001μg/mL的AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、T-2、FB1、FB2、FB3、ZEN、OTA、OTB、DON混合標準溶液，并于-4℃條件下備用。

1.2色譜和質(zhì)譜條件

色譜條件：采用Waters Atlantisd C18（150 mm×2.1 mm，1.7μm）為色譜柱。水（A）-甲醇（B）為流動相，梯度洗脫程序為：0～1.0 min，流動相B為15%；1.0～3.0 min，流動相B為15%～70%；3.0～5.1 min，流動相B為70%～ 90%；5.1～8.0 min，流動相B為90%；8.0～8.1 min，流動相B為90%～15%；8.1～10 min，流動相B為15%。柱溫為25℃，流速為0.2 mL/min，進樣量為5μL。

質(zhì)譜條件：ESI掃描方式為正負離子掃描。離子源溫度為300℃，毛細管溫度為350℃；ESI+模式下毛細管電壓為+4.0 kV，ESI-模式下毛細管電壓為-2.0 kV；12種真菌毒素質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)見表1。

1.3樣品的制備

稱取樣品固體粉末5 g，精密加入甲醇（體積分數(shù)為70%）溶液25 mL，超聲處理30 min，離心5 min。精密量取上清液5 mL，加水稀釋至20 mL。取3 mL混合液通過HLB柱，后用3 mL甲醇洗脫，在40℃氮氣下緩慢吹至近干，用乙腈（體積分數(shù)為50%）溶液稀釋至1 mL，過濾后進行測定。

2結(jié)果與分析

2.1線性關(guān)系、檢測限（LOD）和定量限（LOQ）的考察

精密移取1.1項下的混合標準溶液適量，用乙腈（體積分數(shù)為50%）溶液稀釋并定容，配制成系列梯度混合標液，以各目標物質(zhì)量濃度對應(yīng)的峰面積進行最小二乘線性回歸繪制標準曲線，并根據(jù)斜率和平方相關(guān)系數(shù)（R2）對結(jié)果進行評價。此外，根據(jù)3倍信噪比（S/N=3）計算LOD，10倍信噪比（S/N=10）計算LOQ。12種真菌毒素的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍、檢出限和定量限結(jié)果見表2。各真菌毒素在一定濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2>0.995）。各真菌毒素的LOD為0.1～3.8μg/kg，LOQ為0.3～8.5μg/kg。

2.2回收率實驗

稱取一定質(zhì)量的空白樣品木香，添加適量真菌毒素混合標準溶液，制成不同濃度水平的樣品，計算方法的回收率（見表3）。12種真菌毒素的加標回收率范圍為81.6%～100.5%，相對標準偏差（RSD）為6%～6.81%，說明方法回收率良好。

2.3方法的精密度

稱取空白基質(zhì)的樣品各6份，加入混合標準溶液4.0 mL，制成精密度樣品溶液進行測定。12種真菌毒素含量的RSD為0.3%～2.7%，表明精密度良好。

2.4樣品溶液的穩(wěn)定性

取空白基質(zhì)加標供試品溶液1份，分別于0、4、8、12、16、20、24 h進行測定。12種真菌毒素含量的RSD為0.3%～2.1%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5樣品的測定

利用已建立的方法對三峽庫區(qū)51批木香藥材進行測定（檢出的結(jié)果見表4），共檢出陽性樣品5份，檢出率為9.8%。其中，F(xiàn)B2毒素的檢出平均值最高，為12.05μg/kg，其次為T-2、FB1和ZEN，分別為5.83μg/ kg、1.58μg/kg和0.69μg/kg。檢出率最高的真菌毒素是ZEN，為9.8%，其次為T-2和FB1，均為3.9%。綜上，木香的真菌毒素污染情況值得關(guān)注，在關(guān)注毒性較強的四種黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的同時，仍然需要重點監(jiān)督藥材中伏馬毒素B1、伏馬毒素B2和T-2毒素這三種真菌毒素。

3結(jié)束語

本文建立了同時測定三峽庫區(qū)道地藥材木香中12種真菌毒素的分析方法。結(jié)果表明，該方法檢測快速、結(jié)果準確、操作簡單，適用于基質(zhì)復(fù)雜的中藥材中多種真菌毒素的檢測。

參考文獻

[1]敦靜怡.三峽庫區(qū)消落帶土壤氮垂直遷移轉(zhuǎn)化特征研究[D].重慶：重慶三峽學院，2023.

[2]張鑫，賀儀，劉素娟，等.陳皮“陳久者良”原因探究[J].食品科技，2017，42（1）：90-95.

作者簡介

王文婷，女，1992年出生，工程師，碩士，研究方向為藥品質(zhì)量檢測。

賀靈芝，女，1986年出生，工程師，碩士，研究方向為中藥質(zhì)量分析，155303935@qq.com。

（編輯：李鈺雙，收稿日期：2024-06-27）