摘""" 要：雄性不育對(duì)雜交育種至關(guān)重要，挖掘茄子雄性不育關(guān)鍵候選基因有助于定向改良不育材料。以長(zhǎng)茄溫敏型雄性不育系05ms及其同源可育系S63為材料，對(duì)不育系05ms和可育系S63減數(shù)分裂時(shí)期（II）的花藥進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，并對(duì)05ms春季低溫不育（ML）和夏季高溫可育（MH）階段的花粉母細(xì)胞時(shí)期（I）、減數(shù)分裂期（II）、小孢子時(shí)期（III）和成熟花粉粒（IV）4個(gè)花藥發(fā)育時(shí)期的內(nèi)源激素含量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，差異表達(dá)基因主要富集在戊糖和葡萄糖酸酯的轉(zhuǎn)化、類胡蘿卜素的生物合成和植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等代謝通路，Smechr0702283、Smechr0801802、Smechr0600105、Smechr0802213、Smechr0302844、Smechr0601316、Smechr0401804等基因?yàn)榍炎訙孛粜坌圆挥年P(guān)鍵調(diào)控基因，實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可靠。激素代謝物檢測(cè)結(jié)果表明，生長(zhǎng)素類激素ICAld和乙烯前體ACC含量在4個(gè)時(shí)期中ML均顯著高于MH，而ML的生長(zhǎng)素IAA含量低于MH。從代謝水平和轉(zhuǎn)錄水平解析了茄子花藥的敗育機(jī)制，研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示茄子溫敏雄性不育調(diào)控機(jī)制奠定了理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：茄子；轉(zhuǎn)錄組；代謝組；溫敏雄性不育；激素

中圖分類號(hào)：S641.1"""""""""" 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A""""""""""" 文章編號(hào)：1673-2871（2024）11-027-11

收稿日期：2024-07-20；修回日期：2024-09-03

基金項(xiàng)目：河北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（C2023301109）；河北省省級(jí)科技計(jì)劃資助項(xiàng)目（21326309D）；河北省露地蔬菜創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（HBCT2024140202）；河北省農(nóng)林科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新專項(xiàng)課題資助項(xiàng)目（2022KJCXZX-JZS-2）

作者簡(jiǎn)介：張敬敬，女，副研究員，主要從事茄子、西瓜育種研究。E-mail：1109jing@163.com

通信作者：武彥榮，女，研究員，主要從事茄子、西瓜和甜瓜育種、栽培研究及推廣工作。E-mail：wuyanrong-68@163.com

DOI：10.16861/j.cnki.zggc.2024.0449

Analysis of endogenous hormones content and related gene expression in reverse thermo-sensitive genic male sterile line of eggplant

ZHANG Jingjing， LI Bing， GAO Xiurui， TIAN Peng， LIU Wei， ZHAO Xinze， LIU Huiru， PAN Xiuqing， WU Yanrong

（Institute of Cash Crops， Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences， Shijiazhuang 050051， Hebei， China）

Abstract： Male sterility is crucial for hybrid breeding， and digging key candidate genes for male sterility of eggplant is helpful to directional improvement of male sterile materials. In this experiment， using the thermo-sensitive male sterile line 05ms and the fertile line S63 as experimental materials， transcriptome sequencing was performed on the anthers of sterile line 05ms and fertile line S63 at meiosis stage（II）， and the endogenous hormone contents of the pollen mother cell stage（I）， meiosis stage（II）， microspore stage（III）and mature pollen grain stage（IV）of 05ms under low-temperature sterility period（ML）in spring and high-temperature fertility period（MH）in summer were detected. The results showed that differential expressed genes were mainly concentrated in the metabolic pathways of pentose and gluconate conversion， carotenoid biosynthesis and plant hormone signal transduction. The key regulatory genes of thermo-sensitive male sterility in eggplant， such as Smechr0702283， Smechr0801802， Smechr0600105， Smechr0802213， Smechr0302844， Smechr0601316， Smechr0401804， were identified by qRT-PCR， which confirmed the reiliability of the transcriptome data. The results of hormone metabolite detection showed that the content of auxin hormone ICAld and ethylene precursor ACC in ML were significantly higher than those in MH at all of the four stages， while the content of auxin IAA in ML were lower than those in MH. The author analyzed the mechanism of anther abortion in eggplant at the metabolism and transcription level， which laid a theoretical foundation for further revealing the regulatory mechanism of thermo-sensitive male sterility in eggplant.

Key words： Eggplant; Transcriptomic; Metabolomic; Thermo-sensitive male sterility; Hormone

茄子（Solanum melongena L.）屬茄科茄屬作物，是我國(guó)主要的蔬菜之一。我國(guó)茄子的栽培面積占世界42%以上，是茄子種植面積最大的國(guó)家[1]。茄子具有較強(qiáng)的雜種優(yōu)勢(shì)，生產(chǎn)中使用的雜交種多采用人工去雄方法獲得。人工去雄不僅成本高、勞動(dòng)強(qiáng)度高，而且存在去雄不徹底的情況，影響雜交種純度和質(zhì)量[2]。茄子雄性不育系是雜種優(yōu)勢(shì)利用的重要工具，可以簡(jiǎn)化制種程序、提高種子純度、降低制種成本[3]，具有重要的生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。

植物內(nèi)源激素對(duì)雄性不育的發(fā)生起著重要的調(diào)節(jié)作用，對(duì)雄蕊和花粉發(fā)育具有重要影響[4-6]。已有研究表明，茄子雄性不育發(fā)生常伴有內(nèi)源激素含量變化，郭麗娟等[7]測(cè)定不育系和保持系花蕾不同發(fā)育階段的生長(zhǎng)素（IAA）、脫落酸（ABA）、赤霉素（GA3）和玉米素核苷（ZR）含量，結(jié)果表明，不育系和保持系存在明顯不同。Yuan等[8]采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的方法研究茄子雄性不育，KEGG結(jié)果表明，差異表達(dá)基因聚集到激素代謝通路。Wang等[9]通過測(cè)定茄子不育系和可育系茉莉酸（JA）、IAA、GA和ABA含量，發(fā)現(xiàn)IAA、GA和ABA含量存在顯著差異。但目前關(guān)于茄子反向溫敏雄性不育系（rTGMS系）內(nèi)源激素的研究還鮮有報(bào)道，溫度對(duì)不育系花藥中內(nèi)源激素的代謝有待進(jìn)一步研究。反向溫敏雄性不育在低溫條件下不育，高溫條件下可育。水稻中J207S是一個(gè)反式溫敏核雄性不育（rTGMS）材料，表現(xiàn)為在低溫下不育，高溫下可育[10]。反向溫敏雄性不育為兩系法育種開辟了新的路徑。鑒于此，筆者采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和代謝組對(duì)茄子反向溫敏雄性不育系05ms進(jìn)行研究，旨在探討茄子rTGMS系05ms響應(yīng)溫度的內(nèi)源激素代謝特點(diǎn)，挖掘相關(guān)的關(guān)鍵候選基因，豐富茄子雄性不育的理論內(nèi)容，為加快茄子兩系雜交育種進(jìn)程奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

以河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所瓜類室創(chuàng)制的長(zhǎng)茄溫敏雄性不育系05ms和可育系S63為試驗(yàn)材料（圖1）。不育系05ms的原始株由S63品系中自然突變而來。當(dāng)日最低氣溫低于18 ℃時(shí)雄蕊敗育，無花粉；當(dāng)日最低氣溫高于19.5 ℃時(shí)，雄蕊完全恢復(fù)正常，具有成熟花粉粒。試驗(yàn)材料于2022－2023年種植于河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所試驗(yàn)園區(qū)，每年1月上旬溫室穴盤育苗，3月20日左右定植于試驗(yàn)園區(qū)大棚，行距80 cm，株距45 cm，高壟栽培，雙稈整枝，常規(guī)管理。

1.2 RNA-seq測(cè)序

1.2.1 測(cè)序樣品的采集 分別采集雄性不育材料05ms低溫階段（ML）、高溫階段（MH）和可育材料S63低溫階段（CL）和高溫階段（CH）減數(shù)分裂時(shí)期的花藥，每個(gè)樣品取0.3 g，設(shè)置3次重復(fù)，共12個(gè)樣品，取樣后放入2 mL的PE管中，液氮速凍，保存于-80 ℃冰箱備用。

1.2.2 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析 委托諾禾致源生物科技有限公司開展茄子花藥RNA提取和測(cè)序，構(gòu)建測(cè)序文庫并進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，利用Illumina HiSeq 4000測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行樣品轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。使用諾禾云平臺(tái)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，所測(cè)數(shù)據(jù)以茄子基因組為參考基因組（http：//eggplant-hq.cn/Eggplant/home/index）進(jìn)行比對(duì)分析，差異表達(dá)基因通過DESeq2-edgeR軟件進(jìn)行篩選與檢測(cè)，再利用GOseq R和KOBAS軟件包對(duì)獲得的差異基因進(jìn)行GO富集分析、KEGG富集分析。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證差異表達(dá)基因 隨機(jī)挑選6個(gè)差異基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）驗(yàn)證，采用賽諾生物SN0309植物總RNA提取試劑盒提取不育材料05ms和可育材料S63花藥的RNA，再用康為試劑Cat# CW2582MHiFiScriptT 快速去除基因組，利用cDNA第一條鏈合成試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA后作為模板，最后采用UltraSYBR Mixture試劑，以β-actin基因作為內(nèi)參基因，在ABI7500（Applied Biosystems， USA）實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀上進(jìn)行qRT-PCR，每個(gè)基因設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù)，按以下程序進(jìn)行：95 ℃，15 min；40個(gè)PCR循環(huán)（95 ℃，10 s; 58 ℃，30 s; 72 ℃，30 s）。熒光定量數(shù)據(jù)采用2-△△ct相對(duì)定量計(jì)算，各引物序列見表1。

1.3 內(nèi)源激素檢測(cè)

1.3.1 檢測(cè)樣品的采集 采集不育材料05ms低溫階段（ML）和高溫階段（MH）的花粉母細(xì)胞時(shí)期（I）、減數(shù)分裂時(shí)期（II）、小孢子時(shí)期（III）和成熟花粉粒時(shí)期（IV）的花藥，分別命名為ML1～ML4和MH1～MH4，每個(gè)樣品取0.5 g，設(shè)置3次重復(fù)，共24個(gè)樣品，取樣后放置2 mL帶封口PE管中，液氮速凍，保存于-80 ℃冰箱備用。

1.3.2 內(nèi)源激素代謝物的檢測(cè) 委托邁維代謝生物科技有限公司開展茄子花藥激素代謝物的提取和檢測(cè)。將樣品用研磨儀（MM400，Retsch）在30 Hz條件下研磨1 min至粉末狀，稱取50 mg研磨后的樣本，加入適量?jī)?nèi)標(biāo)，用1 mL甲醇/水/甲酸（15∶4∶1，v/v/v）進(jìn)行提取，提取液濃縮后用100 μL 80%甲醇溶液復(fù)溶，過0.22 μm濾膜，置于進(jìn)樣瓶中，用于LC-MS/MS分析。樣品提取液使用超高效液相色譜（UPLC，ExionLC? AD，https：//sciex.com.cn/）和串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS，QTRAP? 6500+，https：//sciex.com.cn/）進(jìn)行檢測(cè)，液相條件主要包括色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18柱（1.8 μm，100 mm×2.1 mm i.d.）；流動(dòng)相：A相，超純水（加入0.04%的乙酸）；B相，乙腈（加入0.04%的乙酸）；梯度洗脫程序：0 min A/B為95∶5（V/V），1.0 min A/B為95∶5（V/V），8.0 min為5∶95（V/V），9.0 min為5∶95（V/V），9.1 min為95∶5（V/V），12.0 min為95∶5（V/V）；流速0.35 mL·min-1；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量2 μL。質(zhì)譜條件主要包括：電噴霧離子源（ESI）溫度550 ℃，正離子模式下質(zhì)譜電壓5500 V，負(fù)離子模式下質(zhì)譜電壓-4500 V，氣簾氣（CUR）35 psi。在Q-Trap 6500+中，每個(gè)離子對(duì)根據(jù)優(yōu)化的去簇電壓（DP）和碰撞能（CE）進(jìn)行掃描檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 基于RNA-seq測(cè)序結(jié)果分析

2.1.1 差異基因分析 RNA-seq檢測(cè)24個(gè)樣本，共獲得83.69 Gb高質(zhì)量Clean date數(shù)據(jù)，Q30在92%以上，GC含量在41%～43%之間，基因組比對(duì)率在90%以上。采用DESeq2軟件對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行差異分析，以|log2（FoldChange）| ≥ 2 和 p-value≤ 0.05為標(biāo)準(zhǔn)，篩選差異表達(dá)基因（DEG）。由圖2可知，不育材料05ms在低溫不育和高溫可育中篩選出3965個(gè)DEGs，其中1154個(gè)上調(diào)，2811個(gè)下調(diào)（圖2-A）；可育材料S63在低溫和高溫條件下篩選出7555個(gè)DEGs，其中2754個(gè)上調(diào)，4801個(gè)下調(diào)（圖2-B）；低溫條件下不育材料05ms和可育材料S63中篩選出2439個(gè)DEGs，其中1177個(gè)上調(diào)，1262個(gè)下調(diào)（圖2-C）；高溫條件下不育材料05ms和可育材料S63中篩選出4099個(gè)DEGs，其中1811個(gè)上調(diào)，2288個(gè)下調(diào)（圖2-D）。

通過比對(duì)不育材料和可育材料在低溫和高溫條件下的差異基因（圖3），可知不育材料在低溫不育和高溫可育條件下（ML vs MH）和低溫條件下兩材料（ML vs CL）組合共同的DEGs有754個(gè)，這些基因可能與育性有關(guān)；除去和可育條件下的兩組合（MH vs CH）和（CL vs CH）中共有的508個(gè)DEGs后，剩下的246個(gè)DEGs即是與茄子溫敏雄性不育相關(guān)的候選基因。

2.1.2 DEGs的GO富集分析 利用GO（Gene Ontology）數(shù)據(jù)庫對(duì)獲得的246個(gè)差異基因進(jìn)行富集分析，DEGs被注釋在生物學(xué)過程（biological process）、細(xì)胞組分（cellular compent）及分子功能（molecular function）3大功能方面，分別對(duì)這3大功能富集程度高的前10個(gè)GO條目作柱形圖（圖4），生物學(xué)過程類DEGs富集在胺代謝過程（amine metabolic process，2個(gè)）、磷脂信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)（phosphorelay signal transduction system，2個(gè)）、金屬離子運(yùn)輸（metal ion transport，1個(gè)）等條目；細(xì)胞組分類DEGs富集在微管復(fù)合物（microtubule associated complex，1個(gè)）、光系統(tǒng)（photosystem，2個(gè)）、光合膜（photosynthetic membrane，2個(gè)）等條目；分子功能類DEGs富集在DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性（DNA-binding transcription factor activity，10個(gè)）、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性（transcription regulator activity，10個(gè)）、DNA結(jié)合序列特異性（sequence-specific DNA binding，6個(gè)）、轉(zhuǎn)移酶活性（transferase activity，6個(gè)）等條目。

2.1.3 DEGs的KEGG富集分析 利用KEGG數(shù)據(jù)庫，246個(gè)差異基因被富集到41條代謝通路中，選擇富集程度前20條代謝通路進(jìn)行散點(diǎn)作圖（圖5），差異基因主要在戊糖和葡萄糖酸酯的轉(zhuǎn)化（5個(gè)）、類胡蘿卜素的生物合成（2個(gè)）、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)（5個(gè)）、類黃酮代謝（2個(gè)）等通路富集，其中戊糖和葡萄糖酸酯的轉(zhuǎn)化（sly00040）、類胡蘿卜素的生物合成（sly00906）通路顯著富集。前期研究已對(duì)戊糖和葡萄糖酸酯的轉(zhuǎn)化（sly00040）代謝通路進(jìn)行了分析，現(xiàn)對(duì)類胡蘿卜素的生物合成（sly00906）代謝通路進(jìn)行分析。

2.1.4 類胡蘿卜素生物合成和植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路DEGs分析 通過分析類胡蘿卜素生物合成路徑（圖6），發(fā)現(xiàn)2個(gè)差異基因（Smechr0702283和Smechr0801802）在不育材料05ms中下調(diào)表達(dá)，主要負(fù)責(zé)調(diào)控下游脫落酸（abscisic acid）代謝產(chǎn)物紅花菜豆酸（phaseic acid）積累。脫落酸屬于植物激素之一，與植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)代謝路徑有關(guān)。經(jīng)分析，5個(gè)差異基因（Smechr0600105、Smechr0802213、Smechr0302844、Smechr0601316和Smechr0401804）被富集到植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)路徑（圖7），基因Smechr0600105和Smechr0802213與細(xì)胞生長(zhǎng)素（auxin）相關(guān)，基因Smechr0302844與細(xì)胞分裂素（cytokinine）相關(guān)，基因Smechr0601316與脫落酸相關(guān)，基因Smechr0401804與水楊酸（salicylic acid）相關(guān)。

類胡蘿卜素生物合成和植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的7個(gè)DEGs表達(dá)量見表2，Smechr0702283、Smechr0801802、Smechr0600105、Smechr0302844和Smechr0401804基因在低溫階段的不育材料05ms中均下調(diào)表達(dá)，Smechr0802213和Smechr0601316基因在05ms中上調(diào)表達(dá)。Smechr0600105基因在低溫階段可育材料S63中的表達(dá)量是05ms的40.94倍，該基因在05ms中高溫階段表達(dá)量是低溫階段的65.08倍。

2.1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證 為了驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組差異表達(dá)基因的準(zhǔn)確性，隨機(jī)挑選6個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）驗(yàn)證，對(duì)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)（RNA-seq）和qRT-PCR的結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，低溫階段相關(guān)性系數(shù)為0.860 7（圖8-A），高溫階段相關(guān)性系數(shù)為0.883 0（圖8-B），表明轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可靠。

2.2 激素代謝組結(jié)果分析

植物激素在花粉敗育方面起重要作用。由于轉(zhuǎn)錄組研究發(fā)現(xiàn)脫落酸和生長(zhǎng)素通路差異表達(dá)基因較多，為了更清楚地了解茄子溫敏雄性不育代謝機(jī)制，筆者分析了不育材料05ms在低溫和高溫階段花粉母細(xì)胞時(shí)期（I）、減數(shù)分裂期（II）、小孢子時(shí)期（III）和成熟花粉粒時(shí)期（IV）4個(gè)花藥發(fā)育時(shí)期中生長(zhǎng)素、脫落酸和乙烯3類代謝物。結(jié)果表明（圖9），在低溫和高溫階段共檢測(cè)到吲哚-3-甲醛（ICAld）、吲哚-3-乙酸甲酯（ME-IAA）、吲哚-3-乙酸（IAA）、吲哚-3-丁酸（IBA）、3-吲哚丙酸（IPA）等5種生長(zhǎng)素；脫落酸（ABA）、脫落酸葡萄糖酯（ABA-GE）等2種脫落酸和1種乙烯中的1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC）。其中，生長(zhǎng)素類的IAA、ICAld、ME-IAA，以及脫落酸類的ABA和ACC這5種激素在低溫和高溫階段的4個(gè)時(shí)期均有檢出；生長(zhǎng)素類的IBA在低溫和高溫階段的III和IV時(shí)期有檢出，IBA含量（w，后同）在低溫階段III時(shí)期為0.95 ng·g-1、IV時(shí)期為4.83 ng·g-1，呈上升趨勢(shì)，而在高溫階段III時(shí)期為2.23 ng·g-1、IV時(shí)期為1.74 ng·g-1，呈下降趨勢(shì)；IPA只在低溫不育階段III時(shí)期有檢出，含量為0.5 ng·g-1；脫落酸類的ABA-GE只在高溫可育階段的I時(shí)期有檢出，含量為144 ng·g-1。

在I時(shí)期（圖9-A），低溫階段ACC含量為413.00 ng·g-1，顯著高于高溫階段，是高溫階段的3.53倍；在II時(shí)期（圖9-B），低溫階段ICAld、ME-IAA和ACC含量極顯著高于高溫階段，依次為高溫階段的2.85、2.67和1.81倍，低溫階段ABA含量顯著高于高溫階段；在III時(shí)期（圖9-C），低溫階段ICAld含量為41.6 ng·g-1，是高溫階段的6.16倍（高溫階段含量為7.34 ng·g-1），低溫階段的ACC和ICAld含量極顯著高于高溫階段，而ABA、IAA和ME-IAA在低溫階段的含量極顯著低于高溫階段；在IV時(shí)期（圖9-D），ME-IAA和IAA在低溫階段的含量極顯著低于高溫階段，分別為高溫階段的22%和20%，而ACC、IBA和ICAld在低溫階段的含量極顯著高于高溫階段，分別是高溫階段的2.12、2.78和4.35倍。

3 討論與結(jié)論

植物內(nèi)源激素的平衡對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要，可以維持正常的生理活動(dòng)，保證植物正常發(fā)育[11]。目前已有研究表明，植物激素對(duì)雄性不育的發(fā)生同樣起著重要的調(diào)節(jié)作用[12]。本研究結(jié)果表明，在05ms和S63不同材料的ML和MH階段存在5個(gè)與植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)代謝通路相關(guān)的DEGs，其中Smechr0600105基因?yàn)檎{(diào)控生長(zhǎng)素/吲哚乙酸（AUX/IAA）基因，Smechr0600105基因在不育材料05ms低溫不育階段下調(diào)表達(dá)。在沒有生長(zhǎng)素的情況下，AUX/IAA與ARF結(jié)合，ARF對(duì)下游基因的調(diào)控能力被抑制，生長(zhǎng)素信號(hào)通路關(guān)閉；加入生長(zhǎng)素后，AUX/IAA蛋白被泛素蛋白酶途徑降解，釋放出ARF，ARF對(duì)下游基因的調(diào)控能力恢復(fù)，下游的生長(zhǎng)素響應(yīng)基因表達(dá)發(fā)生改變，生長(zhǎng)素信號(hào)被打開[13]。Smechr0802213基因參與調(diào)控生長(zhǎng)素中的SAUR基因，該基因在不育材料05ms低溫不育階段上調(diào)表達(dá)。SAUR基因家族是生長(zhǎng)素響應(yīng)中最大的家族[14]，Kathare等[15]研究表明，SAUR表達(dá)量升高干擾生長(zhǎng)素正常運(yùn)輸，負(fù)向調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素運(yùn)輸。ASUR62/75與其相互作用蛋白R(shí)PL12在花粉管生長(zhǎng)和核糖體組裝中發(fā)揮重要作用[16]。Smechr0601316基因?yàn)檎{(diào)控脫落酸ABA途徑中的PP2C基因，該基因在05ms低溫不育階段上調(diào)表達(dá)。ABA受體PYL和下游復(fù)合體PP2C/SnRK2共同傳遞ABA誘導(dǎo)的低溫信號(hào)。PP2C編碼蛋白磷酸酶，通過催化低溫蛋白的磷酸化和去磷酸化反應(yīng)來調(diào)控植物的逆境信號(hào)途徑[17]。Smechr0302844基因是調(diào)控細(xì)胞分裂素（CKs）代謝路徑中的A-ARR基因，Smechr0401804基因則是調(diào)控水楊酸（SA）代謝路徑中的TGA基因，這兩個(gè)基因在05ms低溫不育階段下調(diào)表達(dá)。

目前已有研究表明，植物內(nèi)源激素如IAA、ABA、GA、JA、ZR等含量的過高或過低會(huì)引起植物的雄性不育[18-24]。本研究中對(duì)茄子rTGMS系05ms在低溫不育和高溫可育階段的花藥（4個(gè)時(shí)期）進(jìn)行了靶向激素檢測(cè)，結(jié)果表明，乙烯類激素ACC含量在4個(gè)時(shí)期中ML均極顯著高于MH，生長(zhǎng)素類激素ICAld含量在4個(gè)時(shí)期中ML高于MH，且在II、III、IV時(shí)期顯著高于MH，而生長(zhǎng)素IAA含量ML低于MH，且在III和IV時(shí)期呈極顯著差異。這與前人在西瓜[22]、芝麻[25]、玉米[26]等不育系中發(fā)現(xiàn)的IAA含量低于可育系的結(jié)果一致，IAA的虧損可能破壞了植物維管束的正常發(fā)育，影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在花藥中的正常分配，導(dǎo)致花藥敗育。本試驗(yàn)中生長(zhǎng)素IAA在ML中含量低而生長(zhǎng)素類激素ICAld含量高，可能由于IAA降解生成大量ICA1d。胡一兵等[27]在生長(zhǎng)素與乙烯信號(hào)途徑及其相互關(guān)系的研究進(jìn)展中指出，生長(zhǎng)素能促進(jìn)乙烯的合成，乙烯也能引起植物體內(nèi)生長(zhǎng)素含量的升高，乙烯反應(yīng)更有可能位于生長(zhǎng)素途徑的上游，乙烯對(duì)生長(zhǎng)素的影響應(yīng)該是發(fā)生在生長(zhǎng)素的合成或分解過程中，或者是在生長(zhǎng)素的極性運(yùn)輸層面上。本試驗(yàn)中測(cè)定的內(nèi)源激素ACC屬于乙烯類激素，其含量與生長(zhǎng)素ICAld含量存在協(xié)同關(guān)系，與胡一兵等[27]的研究結(jié)果一致。

聯(lián)合分析轉(zhuǎn)錄組和代謝組結(jié)果，低溫不育階段05ms中生長(zhǎng)素IAA含量低于高溫可育階段，低溫不育階段Smechr0600105（Aux/IAA）基因在05ms中的表達(dá)量為0.063 8，幾乎為0。這可能是在低濃度生長(zhǎng)素IAA水平下，ARF蛋白通過與Aux/IAA結(jié)構(gòu)域III和IV互作使其被招募到含有生長(zhǎng)素響應(yīng)元件（AuxRE， TGTCTC）基因的啟動(dòng)子上，由于Aux/IAA蛋白的結(jié)構(gòu)域I中包含EAR結(jié)構(gòu)域，通過該結(jié)構(gòu)域Aux/IAAs可以招募共抑制子TPL并形成高級(jí)復(fù)合物，促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的抑制[28]，進(jìn)而抑制植物細(xì)胞增長(zhǎng)，影響花藥發(fā)育，從而引發(fā)敗育。低溫不育階段Smechr0802213（SAUR）基因在05ms中上調(diào)表達(dá)，SAUR表達(dá)量升高，干擾生長(zhǎng)素正常運(yùn)輸，負(fù)向調(diào)節(jié)生長(zhǎng)素運(yùn)輸，導(dǎo)致低溫階段生長(zhǎng)素IAA含量低于高溫階段。Smechr0601316（PP2C）基因?yàn)锳BA代謝路徑的關(guān)鍵調(diào)控基因，在05ms中的低溫階段上調(diào)表達(dá)；而減數(shù)分裂時(shí)期脫落酸ABA含量在低溫階段高于高溫階段，ABA受體PYL和下游復(fù)合體PP2C/SnRK2共同傳遞ABA誘導(dǎo)的低溫信號(hào)，使PP2C基因表達(dá)上調(diào)，最終影響氣孔閉合代謝路徑，這可能是花藥敗育的原因之一。上述研究結(jié)果表明內(nèi)源激素代謝對(duì)花藥發(fā)育具有重要影響。

綜上所述，茄子溫敏雄性不育系05ms通過響應(yīng)戊糖和葡萄糖酸酯的轉(zhuǎn)化、類胡蘿卜素的生物合成和植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等通路相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控茄子花藥發(fā)育。下一步，筆者將對(duì)水楊酸代謝路徑中的TGA基因進(jìn)行深入研究，以期為進(jìn)一步揭示茄子溫敏雄性不育調(diào)控機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。

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