摘要：為了解我國(guó)江西不同地區(qū)的中小型豬場(chǎng)豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）和豬偽狂犬病（PR）的疫苗免疫水平和病毒感染狀況，2023年上半年通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）對(duì)采自江西四個(gè)地區(qū)的中小型豬場(chǎng)的234份血清樣品進(jìn)行抗體檢測(cè)。結(jié)果表明，CSF、PR的免疫情況較好，PRRS的免疫情況較差；豬瘟病毒（CSFV）平均抗體陽(yáng)性率為96.2%；豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）平均抗體陽(yáng)性率為51.3%；豬偽狂犬病毒（PRV）gB的抗體陽(yáng)性率為90.2%、gE的抗體陽(yáng)性率為0.4%，存在野毒感染的情況，本研究旨在為江西部分地區(qū)豬CSFV、PRRSV、PRV的科學(xué)防控提供一定參考。

關(guān)鍵詞：抗體檢測(cè)；豬瘟；豬繁殖與呼吸障礙綜合征；豬偽狂犬病

豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）感染導(dǎo)致豬的一種以高熱和出血為主要癥狀的重要傳染病，舊稱豬霍亂，嚴(yán)重危害了全球養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展[1]，已被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）歸入為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病[2]，截至目前應(yīng)對(duì)該病最好的手段是疫苗免疫。豬繁殖與呼吸障礙綜合征（PRRS）又稱豬藍(lán)耳病，是由豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）引起的一種高度傳染性疾病，已被WOAH列入疫病目錄，同時(shí)國(guó)內(nèi)也將高致病性藍(lán)耳病列為一類動(dòng)物疫病，近年也有研究結(jié)果表明，目前國(guó)內(nèi)主要流行毒株為NADC30毒株[3]，同時(shí)毒株的基因重組也進(jìn)一步加劇了PRRSV的防控難度[4-5]。豬偽狂犬?。≒R）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，豬是該病的唯一宿主，其臨床癥狀常表現(xiàn)為腦脊髓炎、流產(chǎn)、生殖衰竭、嚴(yán)重的神經(jīng)癥狀[6-7]。近幾年新出現(xiàn)的流行毒株相比于經(jīng)典毒株其毒力更強(qiáng)，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失及新的挑戰(zhàn)[8]。本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)ELISA對(duì)江西部分地區(qū)中小豬場(chǎng)進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，為上述三種疫病的防控提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1）樣品來(lái)源。2023年分別對(duì)江西4個(gè)地區(qū)（贛州、萍鄉(xiāng)、宜春、高安）中小型豬場(chǎng)隨機(jī)采集234份血液樣品，樣品主要以懷孕中期母豬為主。待血液樣品凝固后吸取血清5 000 r/min離心2 min進(jìn)一步分離血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2 ）主要試劑。CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE抗體檢測(cè)試劑盒，均為北京金諾診斷（金諾百泰生物科技有限公司）。

3）主要儀器。酶標(biāo)儀，型號(hào)Infinite200 PRO，瑞士帝肯集團(tuán)公司；高速離心機(jī)，型號(hào)5424，德國(guó)Eppendoft；移液器，德國(guó)Eppendoft；微孔板恒溫振蕩器，型號(hào)Leopard70-2A，普萊特科學(xué)儀器（北京）有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，型號(hào)SPX-250BIII，天津泰斯特。

1.2 方法

1）三種病毒ELISA抗體檢測(cè)及結(jié)果判定。按照CSFV、PRRSV、PRV-gE 和 PRV-gB 病毒抗體檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作?；静僮鬟^(guò)程如下：加入稀釋血清、陰性血清和陽(yáng)性血清孵育→洗滌→加入酶標(biāo)抗體孵育→洗滌→加入底物孵育→加入終止液→ OD 值測(cè)定與分析。3種病毒抗體檢測(cè)結(jié)果按說(shuō)明書標(biāo)準(zhǔn)判定（表 1）。注意所有檢測(cè)試劑盒組分在使用前需恢復(fù)至 18 ～ 25 ℃條件下操作。

2 結(jié)果

2.1 總體檢測(cè)情況

在采集的江西省四個(gè)地區(qū)共234份樣品中，CSFV抗體陽(yáng)性率為96.2%，變異系數(shù)為0.31，免疫水平較高且抗體水平整齊度高，達(dá)到國(guó)家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)免疫（抗體合格率保持在70%以上）；PRRSV抗體陽(yáng)性率為51.3%，變異系數(shù)為1.59%，免疫水平不達(dá)標(biāo)且抗體水平整齊度不高，未達(dá)到國(guó)家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)；PRV-gB的陽(yáng)性率為90.2%，變異系數(shù)為1.34%，免疫效果較好但抗體水平參差不齊；PRV-gE抗體陽(yáng)性率為0.4%，其結(jié)果表明該地區(qū)有野毒感染但不嚴(yán)重。具體結(jié)果見表2。

2.2 不同病原抗體檢測(cè)情況

1）CSFV抗體檢測(cè)結(jié)果。CSFV不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表3）表明：贛州、萍鄉(xiāng)、宜春、高安在四個(gè)地區(qū)中免疫水平最好的為高安100%，最低為贛州90%，其結(jié)果表明，江西部分地區(qū)CSF抗體陽(yáng)性率均保持在較高水準(zhǔn)，且變異系數(shù)較低，總體免疫狀態(tài)良好。

2）PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果。PRRSV不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表4）表明：江西四個(gè)地區(qū)的PRRSV免疫水平差異較大其中贛州免疫情況良好高安次之，其余兩個(gè)地區(qū)免疫效果均未達(dá)到免疫標(biāo)準(zhǔn)，免疫水平較低，其中萍鄉(xiāng)地區(qū)抗體陽(yáng)性率僅為11.1%。

3）PRV抗體檢測(cè)結(jié)果。PRV不同地區(qū)統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表5、表6）表明：萍鄉(xiāng)市PRV-gB抗體陽(yáng)性率最高，為100%；其次是萍鄉(xiāng)、贛州和宜春。萍鄉(xiāng)地區(qū)存在一定比例的PRV-gE抗體陽(yáng)性，提示存在一定程度的野毒感染。

3 討論

CSF、PRRS、PR作為豬場(chǎng)基礎(chǔ)免疫指標(biāo)，其免疫效果關(guān)乎整個(gè)豬群的健康狀況和生產(chǎn)效益，目前由于該三類疫病的商品化疫苗眾多，進(jìn)而導(dǎo)致不同地區(qū)不同豬場(chǎng)的免疫效果存在較大差異，因此通過(guò)血清學(xué)方法第一時(shí)間掌握豬群抗體水平并制定相應(yīng)措施，對(duì)這三類疫病的防控甚至凈化具有重要的生產(chǎn)意義。

在本次調(diào)查的CSFV抗體結(jié)果表明江西各地區(qū)CSFV抗體陽(yáng)性率均在90%以上，均超過(guò)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部70%的標(biāo)準(zhǔn)，其中高安地區(qū)陽(yáng)性率更是達(dá)到100%，各地區(qū)免疫效果較好且群體抗體水平整齊度高。近年來(lái)，我國(guó)市場(chǎng)上已有60余家企業(yè)獲得豬瘟疫苗的政府生產(chǎn)批文[9]，新型豬瘟基因工程亞單位疫苗相繼研究成功并開始推廣使用[10]，疫苗具有更高的安全性和穩(wěn)定性，這可能是大部分豬場(chǎng)CSFV免疫抗體相比于其他疫病抗體合格率逐年升高的原因，也表明江西省各地區(qū)都比較重視豬瘟的免疫工作，這也與高映雪[11]調(diào)查了江西地區(qū)2016—2018年CSFV抗體陽(yáng)性率的結(jié)果相似， 也間接說(shuō)明了豬瘟的抗體合格率與高品質(zhì)的豬瘟疫苗和科學(xué)的免疫程序存在相關(guān)性[12]。

本次調(diào)查經(jīng)ELISA檢測(cè)PRRSV血清樣本共234份，總體抗體陽(yáng)性率僅51.3%，且變異系數(shù)高，群體免疫效果差，從不同區(qū)域?qū)Ρ葋?lái)看，其中只有贛州地區(qū)抗體合格率達(dá)標(biāo)陽(yáng)性率為90%，宜春地區(qū)抗體合格率為47.7%，萍鄉(xiāng)地區(qū)陽(yáng)性率最低僅有11.1%，導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因一方面可能是該地區(qū)豬場(chǎng)并不重視藍(lán)耳疫苗免疫，另一方面原因可能是該地區(qū)沒(méi)有制定科學(xué)合理的免疫程序，杜喜忠等[13]的研究表明藍(lán)耳的減毒活疫苗和豬瘟活疫苗同時(shí)使用存在明顯的干擾作用，根據(jù)以上結(jié)果，建議這兩個(gè)地區(qū)豬場(chǎng)應(yīng)該重視藍(lán)耳病的生物安全防控，制定合理的疫苗免疫方案，并通過(guò)抗體檢測(cè)結(jié)果采取相應(yīng)的應(yīng)對(duì)措施降低損失、提高生產(chǎn)效益[14-16]。

本次調(diào)查PRV-gB血清樣本陽(yáng)性率為90.2%，其中陽(yáng)性率最高的地區(qū)為高安，其次為萍鄉(xiāng)、贛州、宜春，陽(yáng)性率分別為100%、96.1%、85%和84.4%，同時(shí)萍鄉(xiāng)地區(qū)檢測(cè)到不同例的PRV-gE抗體，提示該場(chǎng)存在一定程度野毒感染，這也說(shuō)明即使存在高滴度的疫苗抗體也不能完全抵擋野毒感染，這也與段群鵬[17]和李海琴[18]調(diào)查的結(jié)果類似，因此對(duì)PRV的防控甚至凈化，還需要完善生物防控體系，同時(shí)使用對(duì)豬群使用保健產(chǎn)品以提高豬群非特異性免疫，配合gE基因缺失苗及時(shí)淘汰感染豬以達(dá)到凈化PRV的目的。

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