[摘要]"目的"探究尼克酰胺轉(zhuǎn)甲基酶介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive"oxygen"species，ROS）在肝癌細(xì)胞鐵死亡中的影響及其機(jī)制。方法"選取2019年3月至2020年2月于筆者醫(yī)院接受治療的40例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者作研究對(duì)象，分別取患者的癌旁組織標(biāo)本及肝癌組織標(biāo)本。使用串聯(lián)液相質(zhì)譜儀檢測(cè)細(xì)胞中甲基尼克酰胺（methyl"nicotinamid，MNA）表達(dá)，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS及過氧化脂質(zhì)的平均熒光強(qiáng)度，采用蛋白質(zhì)印跡法（Western"blot）法檢測(cè)人肝癌細(xì)胞（SK-Hep-1、Hep3B）細(xì)胞表達(dá)的情況變化。采用免疫組化法檢測(cè)癌旁組織、肝癌組織中尼克酰胺轉(zhuǎn)甲基酶（nicotinamide"N-methyltransferase，NNMT）及ROS水平，采用CCK-8法檢測(cè)不同鐵濃度細(xì)胞的生存活性。結(jié)果"肝癌組織組中的MNA水平較癌旁組織組有所提升差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。與癌旁組織組比較，肝癌組織組的ROS平均熒光強(qiáng)度表達(dá)升高，過氧化脂質(zhì)平均的熒光強(qiáng)度表達(dá)降低，SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞表達(dá)量上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。與對(duì)照組比較，NNMT組2、10、20及25μmol/L的細(xì)胞生存活性水平升高（Plt;0.05）。與NNMT組比較，鐵抑制組不同鐵濃度（2μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、25μmol/L）的細(xì)胞生存活性表達(dá)下降差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。結(jié)論"經(jīng)尼克酰胺轉(zhuǎn)甲基酶介導(dǎo)可引導(dǎo)產(chǎn)生ROS及能量紊亂，提高了腫瘤細(xì)胞的死亡率。

[關(guān)鍵詞]"肝癌；尼克酰胺轉(zhuǎn)甲基酶；細(xì)胞內(nèi)活性氧；鐵死亡

[中圖分類號(hào)]"R735.7""""""[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]"A""""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.23.007

Study"on"the"effect"of"NNMT"enzyme"on"iron"death"of"hepatocellular"carcinoma"cells"by"mediating"ROS

WANG"Jinchun1，"DAI"Yongqing1，"WANG"Yaqing1，"CHEN"Jue1，"LIU"Zuping2"，"LI"Yejia3

1.Department"of"Blood"Transfusion，"Affiliated"Hospital"of"Shaoxing"University，"Shaoxing"312000，"Zhejiang，"China;"2.Department"of"Pathology，"Affiliated"Hospital"of"Shaoxing"University，"Shaoxing"312000，"Zhejiang，"China;"3.Department"of"Clinical"Laboratory，"Affiliated"Hospital"of"Shaoxing"University，"Shaoxing"312000，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"explore"the"effect"of"nicotinamide"transmethylase"on"intracellular"reactive"oxygen"species"（ROS）"in"iron"death"of"hepatocellular"carcinoma"cells"and"its"mechanism."Methods"Methyl"nicotinamide"（MNA）"expression"in"cells"was"detected"using"a"tandem"liquid"chromatography-mass"spectrometry."The"average"fluorescence"intensity"of"ROS"and"lipid"peroxidation"was"measured"using"a"flow"cytometer."Western"blot"was"used"to"detect"changes"in"the"expression"of"human"liver"cancer"cells"（SK-Hep-1，"Hep3B）."Forty"patients"with"primary"hepatocellular"carcinoma"who"received"treatment"in"our"hospital"from"March"2019"to"February"2020"were"selected"as"the"study"subjects，"and"their"adjacent"tissue"samples"and"liver"cancer"tissue"samples"were"collected."Immunohistochemical"methods"were"used"to"detect"the"levels"of"nicotinamide"N-methyltransferase"（NNMT）"and"ROS"in"adjacent"and"liver"cancer"tissues."CCK-8"method"was"used"tonbsp;detect"the"survival"activity"of"cells"with"different"iron"concentrations."Results"The"MNA"levels"in"the"liver"cancer"tissue"group"were"higher"than"those"in"the"adjacent"tissue"group"（Plt;0.05）."Compared"with"the"adjacent"tissue"group，"the"average"fluorescence"intensity"expression"of"ROS"in"the"liver"cancer"tissue"group"increased，"while"the"average"fluorescence"intensity"expression"of"lipid"peroxidation"decreased"（Plt;0.05）."Compared"with"the"adjacent"tissue"group，"the"expression"levels"of"SK"Hep-1"and"Hep3B"cells"in"the"liver"cancer"tissue"group"increased"（Plt;0.05）."Compared"with"the"control"group，"NNMT"groups"2，"10，"20，"and"25"μmol/L"The"cell"survival"activity"level"increased"（Plt;0.05）;"Compared"with"the"NNMT"group，"the"iron"inhibition"group"had"different"iron"concentrations"（2μmol/L，"10μmol/L，"20μmol/L，"25μmol/L."The"expression"of"cell"viability"decreased"（Plt;0.05）."Conclusion"ROS"mediated"by"nicotinamide"methyltransferase"can"be"guided"to"produce"ROS"and"energy"disorders，"leading"to"increased"tumor"cell"death.

[Key"words]"Liver"cancer;"Nicotinamide"methyltransferase;"Intracellular"reactive"oxygen"species;"Ferroptosis

肝細(xì)胞癌為原發(fā)性肝癌中的重要類型（gt;80%），其死亡率位居世界腫瘤疾病第2位，目前新發(fā)肝細(xì)胞癌例數(shù)及病死率不斷上升[1]。對(duì)于早期肝細(xì)胞癌患者實(shí)施肝移植、肝臟切除或是局部消融有利于改善患者預(yù)后，而肝硬化或晚期肝細(xì)胞癌患者預(yù)后治療效果較差[2-3]。尼克酰胺轉(zhuǎn)甲基酶（nicotinamide"N-methyltransferase，NNMT）是甲基轉(zhuǎn)移酶家族中依賴于S-腺苷甲硫氨酸的一員，屬于肝臟組織中較高表達(dá)的代謝酶，NNMT主要針對(duì)外源性化合物及多類藥物給予生物性解毒與轉(zhuǎn)化，也參與尼克酰胺的代謝過程，尤其是經(jīng)甲基化之后對(duì)尼克酰胺的清除可幫助調(diào)節(jié)細(xì)胞中尼克酰胺的表達(dá)[4-5]。同時(shí)NNMT在人體疾病狀況與健康狀況下都有較廣的生物學(xué)能力，如NNMT能夠在調(diào)節(jié)肝臟及脂肪代謝中有所參與，與胃癌、胰腺癌、肝癌等多類癌癥的進(jìn)展或是其他類型的癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移及入侵有關(guān)，此外NNMT在機(jī)體中表達(dá)較高時(shí)具備保護(hù)性和致病效果，這與NNMT下游效應(yīng)器激活及組織分布相關(guān)[6]。

細(xì)胞內(nèi)活性氧（reactive"oxygen"species，ROS）在肝臟組織細(xì)胞中的積聚可造成細(xì)胞自噬、脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic"acid，DNA）受損、耐藥等多種類生物學(xué)作用，且經(jīng)對(duì)細(xì)胞中ROS表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)，可有助于腫瘤細(xì)胞凋亡。研究表明，ROS可能參與了腫瘤細(xì)胞鐵死亡過程[7]?；诖?，本研究探討NNMT是否與ROS反應(yīng)相關(guān)聯(lián)，以及后者是否有助于誘導(dǎo)體內(nèi)肝癌細(xì)胞出現(xiàn)鐵死亡，為臨床靶向治療肝細(xì)胞癌提供有利參考。

1""材料與方法

1.1""實(shí)驗(yàn)材料

人肝癌細(xì)胞系SK‐Hep‐1、Hep3B和正常肝細(xì)胞系（中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫）；RPMI-1640培養(yǎng)基（上海百賽生物技術(shù)股份有限公司，貨號(hào)：10-040-CM）；光鏡（廣州市明美光電技術(shù)有限公司，型號(hào)：MF52-N）；Lipofectamine"TM"2000轉(zhuǎn)染試劑（11668019）（北京百奧創(chuàng)新科技有限公司）；磷酸緩沖液（phosphate"buffer，PBS）（上海阿拉丁生化科技股份有限公司，型號(hào)：P196987-500ml）；CCK-8液體（漢恒生物工程（上海）有限公司，HB-CCK-8-500T）；酶標(biāo)檢測(cè)儀（美谷分子儀器（上海）有限公司，型號(hào)：SpectraMax"iD5）；ROS試劑盒流式細(xì)胞儀（上海頂儀科技有限公司，型號(hào)：FACSCalibur）；蛋白質(zhì)定量試劑盒（BCA試劑盒）（賽默飛世爾科技，貨號(hào)：23221-23230）；Hoechst"33342染色（北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)：C0031）。

1.2""培養(yǎng)與檢測(cè)方法

1.2.1""細(xì)胞培養(yǎng)""選擇SK-Hep-1（高表達(dá)"NNMT）和Hep3B（低表達(dá)"NNMT）兩種肝癌細(xì)胞株與正常肝細(xì)胞（對(duì)照組）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將5%青鏈霉素混合液+10%"胎牛血清+RPMI-1640培養(yǎng)基放溫度5%CO2、37℃、飽和濕度的環(huán)境下予以培養(yǎng)，每24h觀察細(xì)胞的生長情況，平均48h對(duì)培養(yǎng)基予以更換或是傳代，光鏡下SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞貼壁成長，細(xì)胞呈現(xiàn)圓形或多邊形。

1.2.2""細(xì)胞轉(zhuǎn)染""用含有shRNA-NNMT"慢病毒對(duì)SK-Hep-1"細(xì)胞轉(zhuǎn)染，獲取低表達(dá)NNMT的細(xì)胞株；經(jīng)構(gòu)建NNMT"質(zhì)粒對(duì)Hep3B"細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，獲取NNMT高表達(dá)的細(xì)胞株，或于Hep3"B細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)放MNA以發(fā)揮補(bǔ)充NNMT的效果。

1.2.3""轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證""采用實(shí)時(shí)熒光定量（real"time"polymerase"chain"reaction，RT-PCR）法測(cè)定NNMT的轉(zhuǎn)染效率，在NNMT轉(zhuǎn)染24h后取各組的細(xì)胞，提取RNA，用Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒行反轉(zhuǎn)錄，獲取總cDNA，用Primer5.0軟件設(shè)計(jì)引物序列，開啟PCR儀，反應(yīng)條件：94"℃預(yù)變性2"s、97℃"6s、65℃"30s，共循環(huán)45次，通過2-△△Ct方法算出NNMT的表達(dá)量，反應(yīng)體系：0.5"μl"上下游引物、2μl""cDNA模板、8"μl""SYB"Green，放蒸餾水到25"μl"。Notch1引物序列：上游：5’-AGCTGGAGAAGTGGCTGAAG-3’，下游：5’-"TGGACCCTTGACTCTGTTCC-3’，內(nèi)參GAPDH引物序列：上游：5’-GATTGGAATCTGGCTACT-3’，下游：5’-TAGGGCTGAAGACAGGG-3’。重復(fù)試驗(yàn)3次。

1.2.4""串聯(lián)液相質(zhì)譜儀檢測(cè)細(xì)胞中MNA的表達(dá)""使用串聯(lián)液相質(zhì)譜儀及試劑盒測(cè)定每組細(xì)胞中MNA表達(dá)，步驟主要按試劑盒說明書予以完成。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5""流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS及過氧化脂質(zhì)的平均熒光強(qiáng)度""集取細(xì)胞，用PBS清洗，按ROS試劑盒說明書的步驟進(jìn)行操作，加ROS試劑，在避光環(huán)境中培養(yǎng)30min，用流式細(xì)胞儀測(cè)定每組的ROS、過氧化脂質(zhì)的平均熒光強(qiáng)度。

1.2.6""Western"blot法檢測(cè)NNMT表達(dá)""取70%～"80%生長密度的SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞，按每孔細(xì)胞3×105個(gè)在6孔板內(nèi)接種，待細(xì)胞貼壁24h之后培養(yǎng)至50～60%時(shí)，后PBS沖洗細(xì)胞2次，加入蛋白裂解液（RIPA的裂解液）60μl"，放于冰上裂解（4min），收集蛋白的裂解液，在6℃、8min、轉(zhuǎn)速10"000r/min下給予離心處理，分離清液，用BCA法檢測(cè)細(xì)胞濃度，在電泳處理、轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）內(nèi)、脫脂奶粉5%后進(jìn)行2h密封。5℃環(huán)境中培養(yǎng)，過夜，后用0.1%"Tris"鹽緩沖液（TBS+Tween，TBST）進(jìn)行洗膜，加入靜電式揚(yáng)聲器（electrostatic"loudspeaker，ESL）給予曝光、顯影處理，以獲得每組SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞表達(dá)量。

1.2.7""免疫細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)""首先將癌旁組織及癌組織樣本切片，分別用NNMT"抗體、Perl鐵染色試劑及ROS"熒光施以Hoechst"33342染色，且陰性對(duì)照組反應(yīng)同時(shí)實(shí)施，無放抗體的步驟。通過使用四級(jí)評(píng)分系統(tǒng)對(duì)染色強(qiáng)度進(jìn)行表示（陰性=0、低于5%，弱陽=+1、6%～24%，中度陽=+2、25%～50%，強(qiáng)陽=+3、高于50%），以5%閾值作陽性標(biāo)準(zhǔn)，免疫組化法染色的結(jié)果主要通過2名病理學(xué)專科醫(yī)師予以檢測(cè)。

1.2.8""CCK-8法檢測(cè)不同鐵濃度細(xì)胞的生存活性""首先培養(yǎng)SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞直到對(duì)數(shù)生長時(shí)期，重懸消化，于96孔板內(nèi)以細(xì)胞密度1×104個(gè)/mL接種，每孔250μl，孵育直到細(xì)胞貼壁，分別用濃度"""0、2、10、20、25μmol/L的NNMT對(duì)細(xì)胞予以處理，每組設(shè)有3個(gè)復(fù)孔，在培養(yǎng)48h之后，移去培養(yǎng)液，PBS洗滌3次，每孔滴加CCK-8溶液120μl，避光環(huán)境、37℃下培養(yǎng)1.0～1.5h，檢測(cè)酶標(biāo)檢測(cè)儀460nm處的波長，即為吸光度A值。細(xì)胞生存活性=（NNMT組A-鐵抑制組A）/（NNMT組A-對(duì)照組A）×100%。

1.3""統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS"19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間進(jìn)行比較采用F檢驗(yàn)。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2""結(jié)果

2.1""MNA、ROS、過氧化脂質(zhì)平均的熒光強(qiáng)度表達(dá)水平比較

肝癌組織組的MNA表達(dá)水平為81.13±7.51，而癌旁組織組的MNA表達(dá)水平為64.37±5.43，明顯低于肝癌組織組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。肝癌組織組的ROS平均熒光強(qiáng)度表達(dá)高于癌旁組織組，而過氧化脂質(zhì)平均的熒光強(qiáng)度表達(dá)低于癌旁組織組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見表1。

2.2""SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞表達(dá)水平比較

肝癌組織組的SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞表達(dá)量高于癌旁組織組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05），見表2。

2.3""細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)

對(duì)各組肝臟細(xì)胞進(jìn)行染色并用光鏡進(jìn)行觀察，觀察對(duì)照組和NNMT組的熒光強(qiáng)度。在激發(fā)最大波長575nm、發(fā)射最大的波長598nm時(shí)，與對(duì)照組比較，NNMT組的線粒體形態(tài)顯著性縮減，細(xì)胞核狀態(tài)有所改變，細(xì)胞中熒光強(qiáng)度上升，細(xì)胞的增值率下降，對(duì)于細(xì)胞的濃度有一定依賴性，見圖1。

2.4""不同鐵濃度細(xì)胞的生存活性表達(dá)比較

NNMT組2、10、20及25μmol/L的鐵濃度細(xì)胞生存活性水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05）。鐵抑制組的不同鐵濃度（2μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、25μmol/L）細(xì)胞生存活性表達(dá)較NNMT組下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.05），見表3。

3""討論

肝細(xì)胞癌為高病死率的原發(fā)性肝癌，其進(jìn)展快速、惡性程度較高，患者遠(yuǎn)期預(yù)后效果較差[8-9]。肝細(xì)胞癌的發(fā)生進(jìn)展為復(fù)雜的細(xì)胞生化及病理學(xué)的過程，有較多研究證明肝癌細(xì)胞中存在明顯鐵代謝水平失衡[10-11]。研究顯示，鐵代謝水平障礙在肝細(xì)胞癌疾病中有較廣泛存在[12-13]。經(jīng)鐵調(diào)素-排鐵蛋白軸有較多鐵聚集于肝癌細(xì)胞中，導(dǎo)致氧化應(yīng)激水平失衡。因此對(duì)于鐵代謝的調(diào)控機(jī)制的研究能為臨床靶向診治肝細(xì)胞癌疾病提供新思路。

NNMT是指近幾年發(fā)現(xiàn)的一類癌癥相關(guān)蛋白，屬于甲基轉(zhuǎn)移酶，NNMT可有效對(duì)甲基予以催化從S-腺苷蛋氨酸轉(zhuǎn)移至尼克酰胺，分別出現(xiàn)甲基尼克酰胺及S-腺苷同型半胱氨酸。近來研究顯示，NNMT能提高對(duì)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力及改善患者預(yù)后不良[14-15]。鐵代謝障礙極易引起細(xì)胞發(fā)生鐵死亡，而鐵死亡屬于一類依賴于鐵的以ROS與脂質(zhì)過氧化物積聚作為主要因素的新細(xì)胞死亡的形式[16]。目前，鐵死亡在癌癥發(fā)展及化療、放療中已被表明可發(fā)揮出較重要的作用。在肝癌細(xì)胞內(nèi)鐵死亡期間調(diào)控多種上游信號(hào)通路，如p53可調(diào)控鐵死亡而誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌病癥發(fā)展，鐵硫結(jié)構(gòu)域蛋白1（CDGSH鐵流域I）能夠有效對(duì)鐵死亡予以調(diào)控，對(duì)肝細(xì)胞癌的進(jìn)程、產(chǎn)生也有較大影響[17]。

本研究肝癌組織組的MNA水平較癌旁組織組有所提升（Plt;0.05）。與癌旁組織組比較，肝癌組織組的ROS平均熒光強(qiáng)度表達(dá)升高，過氧化脂質(zhì)平均的熒光強(qiáng)度表達(dá)降低（Plt;0.05）。故全面分析鐵死亡可有效減緩肝細(xì)胞癌疾病的發(fā)展。NNMT的底物NAM及鐵均可作為細(xì)胞中參與電子傳導(dǎo)的重要指標(biāo)，在探究NNMT活性水平變化及鐵過載小鼠模型時(shí)，都能對(duì)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide"adenine"dinucleotide，NADH）表達(dá)變化清晰觀察，表明鐵可經(jīng)電子傳導(dǎo)對(duì)NNMT表達(dá)造成一定影響[18]。研究顯示，在小鼠正常的肝臟組織細(xì)胞內(nèi)，過量鐵可顯著性減少肝臟中NNMT轉(zhuǎn)錄的表達(dá)量，且在人正常血清內(nèi)，肝臟NNMT轉(zhuǎn)錄表達(dá)和鐵含量呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)[19-20]。由于對(duì)鐵和NNMT水平間關(guān)系的考慮，預(yù)測(cè)NNMT表達(dá)與鐵死亡狀況可能有著緊密聯(lián)系，需更深一步分析NNMT在肝癌細(xì)胞產(chǎn)生鐵死亡中具體的調(diào)控病理機(jī)制。

本研究中，與癌旁組織組比較，肝癌組織組的SK-Hep-1、Hep3B細(xì)胞表達(dá)量上升（Plt;0.05）。肝細(xì)胞癌患者體內(nèi)鐵蛋白上升，證實(shí)肝細(xì)胞癌患者伴有顯著的鐵代謝障礙。研究表明，NNMT能有效降低腫瘤細(xì)胞ROS含量，而降低NNMT水平后可引導(dǎo)ROS表達(dá)上升，能有助于腫瘤細(xì)胞自噬及凋亡提升，降低其對(duì)藥物化療的耐藥性[21]。研究證實(shí)，在結(jié)直腸癌細(xì)胞內(nèi)提高NNMT表達(dá)能有效降低細(xì)胞的凋亡，而NNMT水平下降可明顯提升細(xì)胞的凋亡概率。且下調(diào)NNMT可提升ROS，而ROS的出現(xiàn)可作為觀察鐵死亡產(chǎn)生的重要信號(hào)之一，但引發(fā)ROS生成病理機(jī)制尚未清晰[22]。

本研究中，與對(duì)照組比較，NNMT組2、10、20及25μmol/L的細(xì)胞生存活性水平升高（Plt;0.05）；與NNMT組比較，鐵抑制組不同鐵濃度（2μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、25μmol/L）的細(xì)胞生存活性表達(dá)下降（Plt;0.05）。提示通過尼克酰胺轉(zhuǎn)甲基酶介導(dǎo)ROS，可有效誘發(fā)肝癌細(xì)胞中鐵死亡，緩解細(xì)胞的活性，對(duì)MNA表達(dá)進(jìn)行調(diào)節(jié)，改善ROS、過氧化脂質(zhì)的熒光強(qiáng)度變化水平，以促進(jìn)疾病恢復(fù)加快，與其他研究結(jié)果較相似[23-25]。原因可能腫瘤的進(jìn)展、產(chǎn)生屬于多因素、多基因相互作用的一種結(jié)果，在進(jìn)展的不同時(shí)期，不同的抑癌基因或癌基因的種類、數(shù)量、作用等各不同，其在NNMT能對(duì)細(xì)胞凋亡、傳導(dǎo)信號(hào)、物質(zhì)代謝（糖、脂類等）、分化細(xì)胞有關(guān)基因水平，故證明NNMT能夠在腫瘤細(xì)胞生物能力中有所參與，而NNMT水平及癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移與腫瘤時(shí)期呈正相關(guān)，因此，可將NNMT作為一類能有效轉(zhuǎn)移腫瘤細(xì)胞的調(diào)控指標(biāo)。表明NNMT能有效調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞中的鐵代謝，誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)鐵死亡，緩和過氧化脂質(zhì)、ROS水平，改善疾病。

綜上所述，肝癌細(xì)胞因存有較常見的鐵代謝水平障礙，極易引發(fā)細(xì)胞中鐵死亡，對(duì)于調(diào)控鐵死亡可對(duì)肝細(xì)胞癌的發(fā)展有一定影響，且在肝細(xì)胞內(nèi)NNMT和鐵代謝水平有一定關(guān)聯(lián)，NNMT水平提升可有效增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及遷移能力，提高了腫瘤細(xì)胞對(duì)于疾病用藥物化療中的耐藥效果，而降低NNMT，可經(jīng)引導(dǎo)產(chǎn)生ROS及能量紊亂，提高了腫瘤細(xì)胞的死亡，使得細(xì)胞的生存水平下降。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

[參考文獻(xiàn)]

[1] SHIMADA"S，"MOGUSHI"K，"AKIYAMA"Y，"et"al."Comprehensive"molecular"and"immunological"characterization"of"hepatocellular"carcinoma[J]."EBio"Med，"2019，"40："457–470.

[2] TEMRAZ"S，"NASSAR"F，"KREIDIEH"F，"et"al."Hepatocellular"carcinoma"immunotherapy"and"the"potential"influence"of"gut"microbiome[J]."Int"J"Mol"Sci，"2021，"22（15）："7800.

[3] TAN"D"J"H，"NG"C"H，"LIN"S"Y，"et"al."Clinical"characteristics，"surveillance，"treatment"allocation，"and"outcomes"of"non-alcoholic"fatty"liver"disease-related"hepatocellular"carcinoma："A"systematic"review"and"meta-analysis[J]."Lancet"Oncol，"2022，"23（4）："521–530.

[4] 張彥亭，"楊振威，"原姍姍，"等."ZEB1通過誘導(dǎo)NNMT的表達(dá)調(diào)控胃癌細(xì)胞的免疫逃逸[J]."醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志，"2021，"18（5）："360–365.

[5] 楊雨嘉，"姚茜，"霍慧敏，"等."鼻咽癌細(xì)胞體外誘導(dǎo)腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞形成并上調(diào)NNMT表達(dá)[J]."廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，"2022，"39（4）："520–525.

[6] 趙磊，"王姝昊，"孫紫洋，"等."NQO1生物活性藥物β-Lapachone抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431增殖、誘導(dǎo)周期阻滯及ROS生成[J]."臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，"2022，"38（2）："187–190.

[7] 陶潔，"薛淑萍，"馬曉梅."Ⅳ期肺腺癌患者ROS1基因狀態(tài)與使用培美曲塞聯(lián)合鉑類方案化療效果的關(guān)系[J]."中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，"2022，"19（11）："111–114.

[8] 馬嬌陽，"保欣晨，"張振寧，"等."正常肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞對(duì)鎘暴露毒性響應(yīng)差異分析[J]."環(huán)境科學(xué)研究，"2022，"35（1）："257–264.

[9] 杜紅蕾，"張鋒，"張?jiān)伻A，"等."毛茛總苷通過circ_0079593/miR-324-5p通路抑制肝癌細(xì)胞增殖、遷移及侵襲的機(jī)制研究[J]."肝癌電子雜志，"2022，"9（1）："48–54.

[10] 楊蕙華，"陳大紅，"刁文婧，"等."G6PD調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞索拉非尼耐藥的機(jī)制研究[J]."中國藥房，"2022，"33（19）："2338–2342.

[11] 周董董，"馮婷，"徐靜."紅樹林內(nèi)生真菌來源dicerandrol"A及其對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用和機(jī)制的初步研究[J]."中國抗生素雜志，"2022，"47（5）："481–487.

[12] 姚元謙，"呂建林，"柳琳琳，"等."鐵死亡基因及相關(guān)長鏈非編碼RNA在肝細(xì)胞癌發(fā)生與預(yù)后中的作用[J]."中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，"2022，"19（26）："9–14.

[13] 羅羽田，"李世朋，"徐紅偉，"等."鐵死亡在肝癌中的調(diào)控機(jī)制及作用研究進(jìn)展[J]."新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，"2021，"38（1）："91–96.

[14] 鞠薇薇，"于生金，"林黎娟，"等."尼克酰胺-N-甲基轉(zhuǎn)移酶在肺腺癌間質(zhì)中的表達(dá)及其生物學(xué)功能[J]."天津醫(yī)藥，"2021，"49（2）："113–118.

[15] 文智慧，"梁煒祺，"鐘依秀，"等."煙酰胺-N-甲基轉(zhuǎn)移酶在胃癌中高表達(dá)并與預(yù)后負(fù)相關(guān)："基于生物信息學(xué)方法[J]."南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，"2021，"41（6）："828–838.

[16] 張飛宇，"阿迪拉·亞克普，"趙金明，"等."鐵死亡的發(fā)生機(jī)制及在肝臟疾病中的作用[J]."臨床肝膽病雜志，"2021，"37（6）："1454–1458.

[17] 孫偉，"孫立新，"郎慶賦，"等."鐵死亡發(fā)生機(jī)制及其與消化系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)病的關(guān)系研究進(jìn)展[J]."山東醫(yī)藥，"2021，"61（35）："92–96.

[18] 周嘉梁，"吳佳，"黃建鋒，"等."煙酰胺N甲基轉(zhuǎn)移酶在食管癌中的表達(dá)及機(jī)制研究[J]."中國血液流變學(xué)雜志，"2021，"31（4）："514–517.

[19] 邴鐘興，"王桂閣，"王彥卿，"等."煙酰胺N甲基轉(zhuǎn)移酶在食管癌中的表達(dá)及其機(jī)制[J]."中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，"2022，"39（1）："29.

[20] 陳珍英，"傅芳萌，"鄭山，"等."99Tc"m-3PRGD"2"SPECT顯像對(duì)乳腺癌新輔助化療后病理完全緩解的預(yù)測(cè)價(jià)值及與"18F-FDG"PET/CT的比較研究"[J]."中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志，"2022，"42（2）："96–103.

[21] 楊洪秀，"宋苗苗，"胡思翠，"等."1例尼克酰胺轉(zhuǎn)氫酶基因突變家族性糖皮質(zhì)激素缺乏癥的診斷[J]."山東醫(yī)藥，"2022，"62（18）："86–88.

[22] 張偉嬌，"張巍."尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在血管性認(rèn)知障礙中的作用及其機(jī)制的研究進(jìn)展[J]."中華老年醫(yī)學(xué)雜志，"2021，"40（2）："255–259.

[23] 殷東杰，"薛夢(mèng)恒，"楊過，"等."芡實(shí)殼醇提物抑制人胃癌SGC7901細(xì)胞和人肝癌HepG2細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡[J]."現(xiàn)代食品科技，"2022，"38（6）："55–65.

[24] 胡連濤，"鄧文俊，"鹿士振，"等."CC趨化因子配體20在肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其在肝細(xì)胞肝癌預(yù)后評(píng)估中作用的生物信息學(xué)分析[J]."吉林大學(xué)學(xué)報(bào)："醫(yī)學(xué)版，"2022，"48（4）："1010–1017.

[25] 陳凱，"張竹青，"馬濤，"等."miR-664及其靶基因在肝癌細(xì)胞及組織中的表達(dá)及其與化療敏感性關(guān)系研究[J]."中國免疫學(xué)雜志，"2022，"38（9）："1082–1088.

（收稿日期：2024–01–26）

（修回日期：2024–05–30）