關(guān)鍵詞：油橄欖；間作；土壤養(yǎng)分；微生物多樣性；群落結(jié)構(gòu)

油橄欖Oleaeuropaea，為木樨科Oleaceae木樨欖屬Olea常綠小喬木，是世界四大木本油料植物之一。油橄欖原產(chǎn)于地中海地區(qū)，在我國(guó)的主要適生區(qū)包括金沙江干熱河谷區(qū)、白龍江低山河谷區(qū)、長(zhǎng)江三峽低山河谷區(qū)[1]。這些區(qū)域光熱資源充沛，為油橄欖的生長(zhǎng)提供了良好的自然條件。然而，這些區(qū)域多位于水土流失和養(yǎng)分流失嚴(yán)重的半山干旱區(qū)[2]，土壤質(zhì)量較差，地表植被稀疏，生態(tài)環(huán)境脆弱。此外，油橄欖幼林期長(zhǎng)，種植4～5a后才開(kāi)始開(kāi)花結(jié)果，7a后才能達(dá)到盛產(chǎn)期，這在一定程度上限制了油橄欖產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)效率和生態(tài)效益。因此，改善油橄欖園土壤管理方式是當(dāng)前油橄欖產(chǎn)業(yè)發(fā)展亟待解決的問(wèn)題之一。間作是一種高效的經(jīng)濟(jì)林經(jīng)營(yíng)措施，是目前在國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用的一種現(xiàn)代化可持續(xù)發(fā)展的土壤管理方式[3]。將不同生態(tài)位作物復(fù)合種植，不僅能充分利用林地空間資源，提高土地資源的利用效率，還能發(fā)揮間作作物的生態(tài)功能，改善土壤環(huán)境，對(duì)提高油橄欖園的土地利用率及其生態(tài)和經(jīng)濟(jì)效益具有深遠(yuǎn)的意義。

土壤微生物是土壤生態(tài)系統(tǒng)的關(guān)鍵組成部分，是土壤生態(tài)系統(tǒng)中較為活躍的組分之一，也是養(yǎng)分轉(zhuǎn)化和物質(zhì)循環(huán)等土壤生態(tài)過(guò)程中必不可少的生物因素[4]，對(duì)維持土壤生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定和健康起到重要作用。土壤養(yǎng)分是植物正常生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ)[5]，土壤有機(jī)質(zhì)和養(yǎng)分主要來(lái)源于土壤微生物對(duì)凋落物以及動(dòng)植物殘?bào)w的分解，與土壤微生物多樣性和豐度密切相關(guān)。間作可以通過(guò)改變植物生理特征及根系分泌特性間接影響土壤微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)，從而改善土壤微環(huán)境[6-7]。趙春梅等[8]發(fā)現(xiàn)，在橡膠林下間作王草、益智和咖啡作物有利于提高土壤微生物群落功能多樣性，改善土壤生態(tài)環(huán)境。不同的間作作物的生理特征和生物學(xué)特性不同，其對(duì)土壤養(yǎng)分及土壤微生物的影響也是不同的，如楊宏偉等[9]發(fā)現(xiàn)在油橄欖林間作百喜草增加了土壤有機(jī)質(zhì)含量，并能夠有效改善根際土壤微環(huán)境，而嚴(yán)毅等[10]發(fā)現(xiàn)在油橄欖林下種植百合后林地土壤養(yǎng)分含量明顯降低。因此，研究不同間作模式下油橄欖土壤養(yǎng)分變化及微生物動(dòng)態(tài)，對(duì)選擇適宜的油橄欖間作模式和促進(jìn)我國(guó)油橄欖產(chǎn)業(yè)高效發(fā)展具有重要意義。

目前關(guān)于油橄欖間作經(jīng)營(yíng)方式的探索已取得一些成果，如油橄欖間作毛苕子、百喜草、紅三葉等綠肥作物[11-13]，以及在油橄欖林下種植大球蓋菇、榆黃蘑、靈芝和小麥等作物[14-15]。這些研究?jī)?nèi)容集中于根系發(fā)育形態(tài)、光合特性、抗旱生理、經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量等方面。然而，關(guān)于不同間作模式下油橄欖林地土壤養(yǎng)分變化、微生物多樣性及其群落結(jié)構(gòu)變化等的深入分析報(bào)道較為鮮見(jiàn)。本研究中以油橄欖單作為對(duì)照，以3種油橄欖間作模式為研究對(duì)象，分析了間作模式對(duì)油橄欖土壤養(yǎng)分含量、土壤微生物多樣性和群落結(jié)構(gòu)的影響，旨在為探索油橄欖高效栽培模式和改善油橄欖林地土壤生態(tài)環(huán)境提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)區(qū)概況

研究地位于云南省麗江市永勝縣六德鄉(xiāng)玉水村油橄欖栽培示范園（100°86′E，26°57′N(xiāo)）。該園地處云南省北部金沙江中游亞熱帶干熱河谷地帶，平均海拔1991.7m，年平均氣溫16.2℃，年平均日照2403h，年降水量800.40mm。干、熱是該地區(qū)典型的氣候特征，降水主要集中在夏秋季節(jié)，冬春干旱，全年光照充足。示范園土壤以砂壤土為主，土層較厚。整個(gè)園區(qū)油橄欖種植面積超46.67hm2，在試驗(yàn)基地內(nèi)選擇坡向、海拔且水肥管理措施基本一致的油橄欖‘佛奧’品種種植區(qū)域進(jìn)行試驗(yàn)，株行距為5m×7m。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)

油橄欖為2017年初種植的品種‘佛奧’。試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理，以油橄欖單作為對(duì)照（CK），其余為間作模式，分別為油橄欖林下間作滇黃精（FD）、紫花苜蓿草（FZ）、3種混播草（F3）。2018年，將紫花苜蓿草與3種混播草種（紫花苜蓿草、黑麥草、金雞菊）撒播于油橄欖林地內(nèi)，將滇黃精種植于油橄欖行間（株行距0.5m×1.0m）。試驗(yàn)期間油橄欖樹(shù)的施肥、灌溉等管護(hù)措施保持一致，均按照常規(guī)方法統(tǒng)一進(jìn)行管理。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1土壤樣品采集

2023年5月，采用典型的“S”形布設(shè)土壤取樣法，在每個(gè)處理區(qū)域內(nèi)設(shè)置3個(gè)土壤采樣點(diǎn)。在距離油橄欖樹(shù)干基部50cm處，除去地面的枯枝落葉、碎石和雜物，垂直采集深度0～10cm的土壤。每個(gè)樣地采取3份土樣，每處理重復(fù)3次，將其混合均勻?yàn)?份土樣。將每份土壤樣本取0.5kg，立即裝入無(wú)菌自封袋并編號(hào)，置于冷凍箱中保存?zhèn)溆?，用于土壤微生物群落結(jié)構(gòu)及多樣性的測(cè)定。將一部分土壤樣品自然風(fēng)干，用于養(yǎng)分含量等指標(biāo)的測(cè)定。

1.3.2土壤理化指標(biāo)測(cè)定[16]

土壤pH值采用電位計(jì)法（土、水體積比1∶2.5）測(cè)定，有機(jī)碳含量采用重鉻酸鉀容量法測(cè)定，全氮含量采用凱氏定氮法測(cè)定，速效鉀和全鉀含量采用火焰原子分光光度法測(cè)定，有效磷和全磷含量采用鉬銻抗比色法測(cè)定，堿解氮含量采用堿解擴(kuò)散法測(cè)定。

1.3.3土壤DNA的提取及微生物高通量測(cè)序

利用IlluminaMiseq高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)細(xì)菌和真菌多樣性進(jìn)行分析。采用OMEGASoilDNAKit試劑盒提取土壤基因組DNA，利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA質(zhì)量，利用NanodropNC2000測(cè)定DNA濃度，具體操作步驟以自帶說(shuō)明書(shū)為標(biāo)準(zhǔn)。以提取的基因組DNA為模板，以細(xì)菌通用引物338F（5′-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3′）和806R（5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）對(duì)16S的V3～V4區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)土壤真菌ITS的V1區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增引物為ITS5F（5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′）和ITS1R（5′-GCTGCGTTCTTCATCGATGC-3′）。利用IlluminaMiseq技術(shù)平臺(tái)進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建和Paired-end測(cè)序。

1.4數(shù)據(jù)處理與分析

使用Vsearch和Cutadapt軟件進(jìn)行去引物、拼接、質(zhì)量過(guò)濾、去重、去嵌合體、聚類(lèi)等流程，獲取高質(zhì)量序列，在97%相似度水平對(duì)高質(zhì)量序列聚類(lèi)，生成ASVs特征序列，并分別輸出代表序列和OTU表格，最后去除OTU表格中豐度為1的OTU及其代表序列。使用Silva數(shù)據(jù)庫(kù)和UNITE數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)ASVs特征序列，得到每個(gè)ASV對(duì)應(yīng)的分類(lèi)學(xué)信息。使用R腳本的VennDiagram包制作韋恩圖，利用QIIME2分析平臺(tái)對(duì)物種分類(lèi)組成情況和物種多樣性進(jìn)行分析。采用SPSS22.0軟件分析數(shù)據(jù)差異的顯著性，采用Excel軟件制作表格。

2結(jié)果與分析

2.1不同間作模式下土壤養(yǎng)分含量和pH值

由表1可知，4個(gè)處理下土壤的pH值為8.12～8.36，均為堿性土壤，F(xiàn)D、F3間作處理下土壤pH值相對(duì)較低，但處理間差異均不顯著。相較于CK，F(xiàn)D間作模式下土壤有機(jī)碳、全氮、全磷、全鉀的含量均有所降低，但并無(wú)顯著差異，速效鉀、有效磷、堿解氮含量分別顯著降低了55.45%、45.55%和33.46%。相較于CK，F(xiàn)Z間作模式下土壤全氮、全磷含量無(wú)顯著差異，間作后有機(jī)碳、速效鉀和堿解氮含量分別顯著降低了60.73%、56.01%和77.48%，全鉀、有效磷含量顯著增加了29.40%、49.87%，且含量均高于其他3個(gè)處理。相較于CK，F(xiàn)3間作模式下土壤全鉀含量顯著增加了24.59%，堿解氮含量有所降低但不顯著，其他養(yǎng)分含量相較于CK均無(wú)顯著差異，但含量均有所增加。綜上可見(jiàn)，與對(duì)照組CK相比，3種油橄欖間作模式均能在一定程度上改變油橄欖林地土壤養(yǎng)分含量，F(xiàn)D和FZ間作處理下土壤部分速效養(yǎng)分含量顯著降低，F(xiàn)3間作處理對(duì)提高油橄欖林地土壤養(yǎng)分含量的效果最佳。

2.2不同間作模式下土壤微生物群落狀況

2.2.1微生物OTUs數(shù)量

由不同間作模式下油橄欖土壤微生物OTUs數(shù)量韋恩圖可知（圖1），4種間作模式下土壤細(xì)菌OTUs總數(shù)量為38652，真菌OTUs總數(shù)量為3059，共有細(xì)菌OTUs數(shù)量為1088，占OTUs總數(shù)量的2.81%，共有真菌OTUs數(shù)量為30，占OTUs總數(shù)量的0.98%。CK、FD、FZ、F3間作模式下土壤特有的細(xì)菌OTUs數(shù)量分別為5998、5304、4601、7851，分別占細(xì)菌特有OTUs總數(shù)量的25.25%、22.33%、19.37%、33.05%。CK、FD、FZ、F3間作模式下土壤特有的真菌OTUs數(shù)量分別為541、640、370、778，分別占真菌特有OTUs總數(shù)量的23.23%、27.48%、15.89%、33.40%。4種間作模式下土壤細(xì)菌和真菌所包含的OTUs數(shù)量和特有的OTUs數(shù)量均以F3間作模式最多，F(xiàn)Z間作模式最少。根據(jù)細(xì)菌的OTUs總數(shù)量和特有OTUs數(shù)量由大到小排列，各處理依次為F3、CK、FD、FZ；根據(jù)真菌的OTUs數(shù)量由大到小排列，各處理依次為F3、FD、CK、FZ。綜上，與油橄欖單作CK相比較，不同處理間細(xì)菌和真菌OTUs數(shù)量均有一定的差別。F3處理模式能在一定程度上增加土壤中細(xì)菌、真菌OTUs數(shù)量，F(xiàn)Z處理降低了土壤細(xì)菌、真菌微生物OTUs數(shù)量。

2.2.2微生物α多樣性指數(shù)

α多樣性指數(shù)是反映微生物群落豐富度、多樣性和均勻度的綜合指標(biāo)。從表2中多個(gè)多樣性指數(shù)來(lái)看，4種間作模式下細(xì)菌和真菌多樣性指數(shù)間無(wú)顯著差異，細(xì)菌的Chao1、Shannon指數(shù)均大于真菌，各處理細(xì)菌和真菌多樣性指數(shù)變化與OTUs數(shù)量變化趨勢(shì)基本一致。根據(jù)細(xì)菌群落豐富度和多樣性指數(shù)由大到小排列，各處理依次為F3、CK、FD、FZ；根據(jù)真菌群落豐富度和多樣性指數(shù)由大到小排列，各處理依次為F3、FD、CK、FZ。

2.2.3微生物群落組成

4種間作模式下油橄欖土壤細(xì)菌群落中共檢測(cè)到33門(mén)83綱165目232科348屬，真菌群落中共檢測(cè)出7門(mén)17綱42目93科154屬。由表3可知，細(xì)菌群落組成的數(shù)量在各分類(lèi)水平上均明顯高于真菌群落組成數(shù)量。根據(jù)細(xì)菌群落組成在各分類(lèi)水平上由多到少排列，各處理依次為CK、F3、FZ、FD；根據(jù)真菌群落組成在各分類(lèi)水平上由多到少排列，各處理依次為FD、F3、CK、FZ。

圖2～3分別展示了4種間作模式下油橄欖土壤細(xì)菌和真菌在門(mén)和屬分類(lèi)學(xué)水平上相對(duì)豐度的變化規(guī)律，1種色塊代表1個(gè)物種，色塊的長(zhǎng)度表示該物種的相對(duì)豐度。由圖2A可知，4種間作模式下油橄欖土壤細(xì)菌門(mén)類(lèi)相對(duì)豐度在前10位的菌群基本相同，分別為放線菌門(mén)Actinobacteriota、變形菌門(mén)Proteobacteria、酸桿菌門(mén)Acidobacteriota、綠彎菌門(mén)Chloroflexi、芽單胞菌門(mén)Gemmatimonadota、擬桿菌門(mén)Bacteroidota、黏球菌門(mén)Myxococcota、疣微菌門(mén)Verrucomicrobiota、Methylomirabilota、浮游球菌門(mén)Planctomycetota。4種間作模式下油橄欖土壤中優(yōu)勢(shì)菌門(mén)均為放線菌門(mén)（17.09%～31.03%）、變形菌門(mén)（21.27%～28.46%）、酸桿菌門(mén)（14.11%～16.60%）、綠彎菌門(mén)（8.95%～10.38%）、芽單胞菌門(mén)（7.06%～11.01%）。4種間作模式下放線菌門(mén)相對(duì)豐度由高到低分別為CK（31.03%）、FZ（29.72%）、F3（24.02%）、FD（17.09%），變形菌門(mén)相對(duì)豐度由高到低分別為FD（28.46%）、FZ（22.08%）、CK（21.84%）、F3（21.27%），酸桿菌門(mén)相對(duì)豐度由高到低分別為FD（16.60%）、CK（16.13%）、F3（15.58%）、FZ（14.11%）。4種間作模式下油橄欖土壤中細(xì)菌在屬分類(lèi)水平上的相對(duì)豐度具有一定差異（圖2B），前3位優(yōu)勢(shì)菌屬分別為Vicinamibacteraceae（4.03%～6.80%）、鞘氨醇單胞菌屬Sphingomonas（2.97%～5.64%）、RB41（2.75%～4.67%），4種間作模式下Vicinamibacteraceae相對(duì)豐度由高到低分別為FD（6.80%）、CK（6.30%）、FZ（5.45%）、F3（4.03%），鞘氨醇單胞菌屬相對(duì)豐度由高到低分別為FD（5.64%）、FZ（4.40%）、F3（3.20%）、CK（2.97%），RB41相對(duì)豐度由高到低分別為F3（4.67%）、FD（3.63%）、CK（3.16%）、FZ（2.75%）。綜上，間作后各模式下土壤細(xì)菌在門(mén)、屬水平群落物種組成上與CK相似，但間作后各菌群的相對(duì)豐度存在差異。

由圖3A可知，間作模式下土壤優(yōu)勢(shì)真菌門(mén)類(lèi)群主要為子囊菌門(mén)Ascomycota（88.42%～73.18%）、擔(dān)子菌門(mén)Basidiomycota（2.87%～13.45%）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)：被孢霉門(mén)Mortierellomycota為FZ間作模式下的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)，相對(duì)豐度達(dá)6.03%，在其他模式中豐度較小。各間作模式按照土壤中子囊菌門(mén)的相對(duì)豐度由大到小排序，依次為FD（88.42%）、FZ（85.66%）、F3（82.20%）、CK（73.18%）；按照擔(dān)子菌門(mén)的相對(duì)豐度由大到小排序，依次為CK（13.45%）、F3（10.07%）、FD（6.21%）、FZ（2.87%）。由圖3B可知，真菌屬水平類(lèi)群主要為鐮刀菌屬Fusarium、青霉屬Penicillium、曲霉屬Aspergillus、古根菌屬Archaeorhizomyces、尖囊菌屬Subulicystidium、黑星菌屬Venturia、小囊菌屬M(fèi)icroascus、被孢霉屬M(fèi)ortierella、阿澤拉霉屬Arxiella、枝孢屬Cladosporium。各間作模式下的優(yōu)勢(shì)菌屬不同，CK模式下古根菌屬（5.46%）和尖囊菌屬（4.29%）是優(yōu)勢(shì)菌屬，F(xiàn)D間作模式下鐮刀菌屬（11.32%）、曲霉屬（10.52%）和黑星菌屬（6.97%）為優(yōu)勢(shì)菌屬，F(xiàn)Z間作模式下優(yōu)勢(shì)菌屬為鐮刀菌屬（8.86%）和青霉屬（14.36%），F(xiàn)3間作模式下土壤中優(yōu)勢(shì)菌屬為古根菌屬（9.26%）、青霉屬（7.83%）、小囊菌屬（6.13%）和尖囊菌屬（5.66%）。綜上，4種模式下土壤真菌在門(mén)水平上子囊菌門(mén)均為絕對(duì)優(yōu)勢(shì)門(mén)，且間作后子囊菌門(mén)的相對(duì)豐度較CK均有所增加，在屬水平上各模式間優(yōu)勢(shì)屬組成及相對(duì)豐度差異較大，3種間作模式均使部分土壤功能真菌微生物的相對(duì)豐度明顯增加，其中FD和FZ模式增加了常見(jiàn)致病菌屬鐮刀菌屬的相對(duì)豐度，病原菌屬黑星菌屬、枝孢屬在FD模式下的相對(duì)豐度也較高，說(shuō)明該間作模式可能會(huì)增加土壤病害侵?jǐn)_的概率。

2.3不同間作模式下土壤微生物群落組成與土壤環(huán)境因子的相關(guān)性

為了進(jìn)一步了解土壤環(huán)境因子與土壤細(xì)菌、真菌群落的關(guān)系，將土壤中主要優(yōu)勢(shì)細(xì)菌和真菌菌群的相對(duì)豐度與土壤環(huán)境因子進(jìn)行相關(guān)性分析。由土壤細(xì)菌相對(duì)豐度與土壤環(huán)境因子的Spearman相關(guān)性熱圖（圖4）可知，在門(mén)分類(lèi)水平上，酸桿菌門(mén)和擬桿菌門(mén)的相對(duì)豐度與全磷含量、全鉀含量、有效磷含量極顯著負(fù)相關(guān)，疣微菌門(mén)的相對(duì)豐度與有機(jī)碳含量、全氮含量、速效鉀含量極顯著正相關(guān)，浮游球菌門(mén)的相對(duì)豐度與堿解氮含量極顯著正相關(guān)。由土壤真菌相對(duì)豐度與土壤環(huán)境因子的Spearman相關(guān)性熱圖（圖4）可知，擔(dān)子菌門(mén)Basidiomycota的相對(duì)豐度與堿解氮含量極顯著正相關(guān)，被孢霉門(mén)的相對(duì)豐度與有機(jī)碳含量、全氮含量、速效鉀含量極顯著負(fù)相關(guān)。同時(shí)，土壤pH值與細(xì)菌、真菌各類(lèi)菌群的相對(duì)豐度均無(wú)顯著相關(guān)性。綜上，細(xì)菌和真菌群落結(jié)構(gòu)與土壤環(huán)境因子有著密切的相關(guān)性，但影響其土壤微生物群落結(jié)構(gòu)的主要環(huán)境因子存在差異。

3討論與結(jié)論

3.1間作模式對(duì)土壤養(yǎng)分元素含量的影響

大量研究結(jié)果證明，間作會(huì)對(duì)土壤環(huán)境因子產(chǎn)生影響[17-19]。本研究中，相較于CK，3種間作模式均對(duì)土壤養(yǎng)分含量產(chǎn)生了影響，F(xiàn)D間作模式下土壤速效鉀、有效磷、堿解氮含量顯著降低。滇黃精是多年生宿根草本植物，以地下根狀莖為主要收獲對(duì)象。在本研究中，自2018年起開(kāi)始用滇黃精進(jìn)行間作試驗(yàn)，其生長(zhǎng)階段對(duì)速效鉀、有效磷、堿解氮等養(yǎng)分有不同的需求，并且會(huì)將大量養(yǎng)分向根莖積累[20]，導(dǎo)致土壤養(yǎng)分含量下降。這一現(xiàn)象與嚴(yán)毅等[10]的研究結(jié)果相吻合，他們發(fā)現(xiàn)在油橄欖林下種植百合后，土壤中營(yíng)養(yǎng)成分含量均明顯降低，表明百合生長(zhǎng)對(duì)有機(jī)質(zhì)、氮、磷、鉀等養(yǎng)分有不同程度的吸收需求。因此，在間作滇黃精期間，應(yīng)注意其與油橄欖之間的養(yǎng)分競(jìng)爭(zhēng)，注意加強(qiáng)施肥管理。FZ間作模式顯著增加了土壤的全鉀、有效磷含量，但有機(jī)碳、堿解氮、速效鉀含量在間作后顯著降低。紫花苜蓿草為深根性多年生牧草，有研究結(jié)果表明豆科作物具有較強(qiáng)的質(zhì)子釋放能力，其根系對(duì)土壤中難溶性磷的活化和其他作物吸收磷有促進(jìn)作用[21-22]，進(jìn)而提高了作物的磷含量。大量生產(chǎn)實(shí)踐結(jié)果表明，紫花苜蓿草的根瘤有固氮的作用[23-24]，可在一定程度上增加土壤中氮含量。本研究中可能由于紫花苜蓿草間作年限較長(zhǎng)，其根系會(huì)分泌一些不易降解的酚酸類(lèi)物質(zhì)，這些物質(zhì)累積在土壤中影響其生長(zhǎng)[25]，從而影響?zhàn)B分吸收與轉(zhuǎn)化，同時(shí)間作后紫花苜蓿草與油橄欖樹(shù)存在養(yǎng)分爭(zhēng)奪的現(xiàn)象，導(dǎo)致土壤中氮含量顯著降低。F3間作模式下土壤全鉀含量顯著增加，除堿解氮外其他養(yǎng)分含量相較于CK均有所增加，其原因是多種牧草根系在地下的分布存在生態(tài)位差異[26]，可充分協(xié)調(diào)水、養(yǎng)、氣的協(xié)同[27]，這與王雪等[28]、姜黎等[29]、張永亮等[30]的研究結(jié)果相似，同時(shí)混種間作作物占據(jù)了更多生態(tài)位，增加了群落的穩(wěn)定性，其凋落物累積量也會(huì)增加，從而回歸土壤的養(yǎng)分增多[31]。

3.2間作模式對(duì)土壤微生物多樣性和群落組成的影響

間作對(duì)土壤微生物多樣性的改變通常與土壤環(huán)境、作物種類(lèi)、間作年限等多重因素相關(guān)。OTU分析與α多樣性分析結(jié)果顯示，間作后細(xì)菌和真菌多樣性指數(shù)無(wú)顯著差異，但F3間作模式在一定程度上增加了土壤中細(xì)菌、真菌的OTUs數(shù)量，這也反映了多草種間作有利于提高土壤微生物多樣性，3種間作處理下細(xì)菌群落物種組成與CK相似，均以放線菌門(mén)、變形菌門(mén)、酸桿菌門(mén)為優(yōu)勢(shì)細(xì)菌菌門(mén)，這些菌門(mén)在油橄欖土壤中的優(yōu)勢(shì)地位已有報(bào)道[32]，但間作后各菌群的相對(duì)豐度有一定變化，由于不同植物的根系分泌物和凋落物理化性質(zhì)不同，其分解時(shí)釋放的養(yǎng)分具有差異，進(jìn)而導(dǎo)致各處理中優(yōu)勢(shì)菌門(mén)的相對(duì)豐度存在差異[33-34]。子囊菌門(mén)、擔(dān)子菌門(mén)、被孢霉門(mén)為真菌優(yōu)勢(shì)菌門(mén)，這與許彥明等[35]的研究結(jié)果一致。子囊菌門(mén)作為真菌界種類(lèi)最多的門(mén)，在土壤有機(jī)質(zhì)的降解中具有重要作用[36]。真菌門(mén)水平上，3種間作處理相較于CK均增加了子囊菌門(mén)的相對(duì)豐度，這可能與間作作物的分泌物、凋落物為其提供營(yíng)養(yǎng)與能量有關(guān)。被孢霉門(mén)具有溶磷性[37]，被孢霉門(mén)為FZ間作模式下土壤的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)，這與FZ間作模式顯著增加了土壤中有效磷含量的分析結(jié)果一致。在真菌屬水平上，各模式間優(yōu)勢(shì)屬組成及相對(duì)豐度的差異均較大，間作均增加了其他功能真菌群落的相對(duì)豐度。其中間作滇黃精（FD）和紫花苜蓿草（FZ）后鐮刀菌屬的相對(duì)豐度明顯增加，鐮刀菌屬為常見(jiàn)的根腐病病原菌，并在多種植物中被檢出[38-39]，因此間作滇黃精與紫花苜蓿草后可能出現(xiàn)病害侵?jǐn)_。相較于CK，F(xiàn)3模式下土壤中古根菌屬、青霉屬、小囊菌屬等有益微生物的相對(duì)豐度明顯增加，這種間作模式有利于提高土壤有益功能真菌的豐富度，多草種間作通常對(duì)土壤溫度、養(yǎng)分等土壤環(huán)境因子有明顯影響，從而對(duì)微生物群落種類(lèi)和結(jié)構(gòu)產(chǎn)生直接或間接影響[40]，導(dǎo)致群落組成結(jié)構(gòu)產(chǎn)生差異。

3.3土壤微生物群落組成與土壤環(huán)境因子的關(guān)系

土壤微生物對(duì)環(huán)境極為敏感，土壤類(lèi)型和理化性質(zhì)的改變會(huì)引起土壤微生物群落組成發(fā)生變化，主要菌群的豐度和結(jié)構(gòu)也不同[41]。土壤理化性質(zhì)對(duì)土壤微生物群落的影響較為復(fù)雜，目前尚無(wú)完全一致的結(jié)論。顏彩繽等[42]通過(guò)對(duì)3種菠蘿蜜間作模式進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)放線菌門(mén)與土壤全鉀、全氮、全磷含量均呈現(xiàn)極顯著或顯著負(fù)相關(guān)；何升然等[43]通過(guò)對(duì)紫花苜蓿與甜高粱間作進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)酸桿菌門(mén)和疣微菌門(mén)與土壤pH值呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)，與土壤堿解氮含量呈現(xiàn)極顯著負(fù)相關(guān)。李敏等[44]發(fā)現(xiàn)氮和磷含量能夠顯著影響根際土壤真菌群落，氮元素的轉(zhuǎn)化和循環(huán)與土壤真菌有著密切的關(guān)系，磷元素在真菌的繁殖和生長(zhǎng)中也發(fā)揮了重要的作用。相關(guān)性分析結(jié)果表明，土壤有機(jī)碳、全氮、全磷、全鉀、速效鉀、堿解氮、有效磷的含量與部分細(xì)菌門(mén)的相對(duì)豐度有極顯著相關(guān)性，土壤有機(jī)碳、全氮、速效鉀、堿解氮的含量與部分真菌門(mén)的相對(duì)豐度有極顯著相關(guān)性，表明養(yǎng)分元素對(duì)這些微生物的生長(zhǎng)和代謝具有促進(jìn)或抑制作用，間作通過(guò)改善土壤理化性質(zhì)為土壤部分菌群提供了適宜的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，進(jìn)而使得土壤微生物數(shù)量、活性及群落組成發(fā)生變化[45-46]，李承臻等[47]的研究結(jié)果表明，在荔枝園間作柱花草可以改變土壤微生物群落結(jié)構(gòu)，微生物群落相對(duì)豐度的變化與間作柱花草后氮、磷、鉀等土壤養(yǎng)分含量的變化有關(guān)，這與本研究結(jié)果一致。同時(shí)部分養(yǎng)分含量與某些細(xì)菌、真菌存在抑制效應(yīng)，土壤中某些養(yǎng)分過(guò)量可能抑制這些微生物的生長(zhǎng)或?qū)е缕涮幱诟?jìng)爭(zhēng)劣勢(shì)[48]。

油橄欖×滇黃精（FD）、油橄欖×紫花苜蓿草（FZ）、油橄欖×紫花苜蓿草×黑麥草×金雞菊（F3）3種間作模式實(shí)施5a后，土壤化學(xué)性質(zhì)均發(fā)生了改變。FD模式和FZ模式間作后土壤中部分養(yǎng)分含量顯著降低，間作作物與油橄欖存在養(yǎng)分爭(zhēng)奪現(xiàn)象，F(xiàn)3模式提高油橄欖林地土壤養(yǎng)分含量的效果最佳。3種間作模式對(duì)土壤微生物多樣性影響較小，但可誘導(dǎo)土壤細(xì)菌、真菌群落結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，以真菌群落結(jié)構(gòu)的變化最為明顯。3種間作模式均明顯增加了部分土壤真菌有益微生物的相對(duì)豐度，但FD和FZ模式增加了常見(jiàn)部分土壤致病菌屬的相對(duì)豐度，F(xiàn)3間作模式對(duì)維持和促進(jìn)土壤生態(tài)系統(tǒng)良性發(fā)展具有積極影響。土壤細(xì)菌與真菌群落結(jié)構(gòu)變化受土壤化學(xué)性質(zhì)驅(qū)動(dòng)，土壤養(yǎng)分含量對(duì)部分細(xì)菌和真菌群落組成和豐度有重要影響。綜上，油橄欖×紫花苜蓿草×黑麥草×金雞菊（F3）多草種間作模式優(yōu)于油橄欖×滇黃精（FD）和油橄欖×紫花苜蓿草（FZ）間作模式。本研究中僅測(cè)定分析了間作模式下油橄欖林地表層土壤養(yǎng)分含量指標(biāo)和土壤微生物多樣性及群落結(jié)構(gòu)變化的差異，未涉及不同深度土壤的養(yǎng)分含量和微生物群落變化，后續(xù)將進(jìn)一步研究間作對(duì)油橄欖林地不同土層微生物群落和養(yǎng)分變化的影響，同時(shí)間作作物對(duì)油橄欖樹(shù)養(yǎng)分吸收及果實(shí)產(chǎn)量和品質(zhì)的影響程度也有待進(jìn)一步探究。